1、湖南新寧二中生物組生物選修31.2基因工程的基本操作程序專題1 基因工程湖南新寧二中生物組目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的獲取基因表達載體的構建將目的基因導入受體細胞湖南新寧二中生物組閱讀與思考1、什么是目的基因？2、獲取目的基因的方法有哪些？其操作過程分別是怎樣的？一、目的基因的獲取1、目的基因概念：主要指的是編碼蛋白質的結構基因。也可以是一些具有調控作用的因子。2、目的基因獲取方法：從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術擴增目的基因化學方法直接人工合成湖南新寧二中生物組從基因文庫中獲取目的基因基因文庫： 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體

2、中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。湖南新寧二中生物組基因文庫 基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫）基因文庫的構建過程湖南新寧二中生物組基因組文庫限制酶供體細胞的全部DNA大量DNA片段拼接到載體上導入受體細胞擴增基因文庫的構建過程湖南新寧二中生物組mRNA單鏈DNA 雙鏈DNA逆轉錄cDNA文庫湖南新寧二中生物組如何從基因文庫中找到所需要的基因？依據目的基因的有關信息。如：根據基因的核苷酸序列 基因在染色體上的位置 基因的轉錄產物mRNA 基因翻譯產物蛋白質等特性。從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術擴增目的基因PCR的全稱： 聚合酶鏈式反應PCR的原理： DNA復

3、制 PCR技術擴增目的基因的前提條件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。湖南新寧二中生物組利用PCR技術擴增目的基因湖南新寧二中生物組模板原料引物酶控制溫度目的基因DNA四種脫氧核苷酸如單鏈DNA分子片段耐熱的DNA聚合酶PCR儀自動調控PCR的條件：湖南新寧二中生物組PCR的過程：利用PCR技術擴增目的基因變性(90-95)復性(55-60)延伸(70-75)湖南新寧二中生物組用化學方法直接人工合成條件：基因較小，核苷酸序列已知。湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的構建核心用切目的基因相同的限制性內切酶切割質粒湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的構建核心湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的

4、構建核心目的基因湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的構建核心1、基因表達載體的組成目的基因啟動子:終止子:標記基因等一段有特殊結構的DNA片段。位于基因的首端。一段有特殊結構的DNA片段。位于基因的尾端。啟動子的作用：湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的構建核心終止子作用：使轉錄在所需要的地方停止。標記基因作用： 是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基 因，從而將有目的基因的細胞篩選出來，如青霉素基因。 是RNA聚合酶識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得蛋白質。湖南新寧二中生物組二、基因表達載體的構建核心2、基因表達載體的構建目的：a.使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代。b.使目的基因能夠表達和發揮作用。三、目的基因導入受體細胞 1、什么是轉化？ 2、目的基因導入植物細胞常用的方法是什么？具體過程是怎樣的？ 3、目的