1、分光光度計Your logo here利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。分光光度計Your logo here光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法1234567分光光度計1234567光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法分光光度法：是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量的分析。 常用的波長范圍 種類200400nm的紫外光區 紫外分光光度計400760nm的可見光區 可見光分光光度計 2.5 25 um的紅外光區 紅外分光光度計 原子吸收分光光度計 分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光

2、裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法1234567 單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關系式如下：A=-log(I/I。)=-lgT=kLcA：吸光度 k：摩爾吸收系數（物理常數）I：透射的單色光強度 I。：入射的單色光強度T：物質的透射率 c：物質的濃度L：被分析物質的光程，即比色皿的邊長樣品的吸光值與樣品的濃度成正比分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法1234567

3、特點：靈敏、精確 、快速 、簡便廣泛設用于生物化學微量物質的定性定量分析測定基本部件：光源 、單色器、比色杯、檢測器、顯示器常用的顯示器：記錄器、檢流計、微安表、數字顯示器可顯示：濃度（C）、透光度（T%）、吸光度（A）分光光度計1234567光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法1、核酸的定量：是分光光度計使用頻率最高的功能。2、蛋白質的直接定量（UV法）：適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。3、比色法蛋白質定量4、細菌細胞密度（OD 600）1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法

4、注意事項比色方法1234567 2、將靈敏度開關調至“1”檔（若零點調節器調不到“0”時，需選用較高檔。）分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法12345673、根據所需波長轉動波長選擇鈕。分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法12345674、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法12345676、蓋上暗箱蓋，調節“100”調節器，使空白管的T=100，指針穩定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。分光光

5、度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法12345677、比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法可能造成讀數漂移的原因：1、離子濃度太高（建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩定讀數。）2、樣品的稀釋濃度（核酸樣品中不可避免存在一些細小的顆粒。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試

6、范圍）。3、混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法 在可見光區，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法Lowry 法：蛋白質與Cu2 反應，產生藍色的反應物。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑；反應需要的時間較長；容易受到非蛋白物質的影響；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物質的蛋白不適合此種方法。123

7、4567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法BCA法：這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2 反應產生Cu ，后者與BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系極強，反應后形成的化合物非常穩定。相對于Lowry法，操作簡單，敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法Bradford 法：這種方法的原理是蛋白質與考馬斯亮蘭結合反應，產生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特點是，敏感度

8、好，是Lowry 和BCA 兩種測試方法的2 倍；操作更簡單，速度更快；只需要一種反應試劑；化合物可以穩定1小時，方便結果；而且與一系列干擾Lowry，BCA 反應的還原劑（如DTT，巰基乙醇）相容。但是對于去污劑依然是敏感的。最主要的缺點是不同的標準品會導致同一樣品的結果差異較大，無可比性。1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法 由于各種方法反應的基團以及顯色基團不一，所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。即使是測定同一樣品，同一種比色法選擇的標準樣品不一致，測試后的濃度也不一致。各種比色法測出的結果并不一致？1234567分光光度計光度定義基本原理基本特點基本用途操作方法注意事項比色方法12345672.反應后分光光度計的重要配件 比色杯的顏色是有一定的半衰期？所以每種比色法都列出了反應測試時間，所有的樣品（包括標準樣品