1、果實(shí)測(cè)酸、總糖、Vc、石細(xì)胞原理及方法可滴定酸含量測(cè)定方法：試劑：0.1%酚歐指示劑（少量95%乙醇溶解，蒸餾水定容100ml）、NaOH 0.01mol/L 器材：燒杯、堿式滴定管、電熱恒溫水浴鍋、研缽、移液管、吸球步驟：不含有色素或者色素含量較低，易形成膠質(zhì)體的果蔬品。可滴定酸含量測(cè)定步驟如下:1、剔除試樣的非可食部分，用四分法取可食用部分切碎混勻，準(zhǔn)確稱取510g置 于研缽中，加入0.30.5 g石英砂研磨勻漿；2、用100mL蒸餾水洗入100mL燒杯后，用移液管吸取10ml加入25ml錐形瓶中，加 蒸餾水15ml，蓋上封口膜，置于75水浴上加熱，期間不時(shí)用玻棒攪拌，30min后取出，

2、冷卻；3、加酚歐指示劑35滴，用0.01mol/L NaOH溶液滴定至淡紅色，30s內(nèi)不退色為終。4、計(jì)算通式為：含酸量=CV1 V2f / V3M X100%C： NaOH滴定液濃度；V1：滴定所用氫氧化鈉體積；V2：提取液的體積；f：蘋(píng)果酸折算系 數(shù)，0.067，0.067g/m mol； V3：被滴定的提取液體積；M：提取樣品的質(zhì)量。可溶性糖測(cè)定：還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基或酮基的單糖和含有游 離醛基的二糖都具有還原性。還原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。非還原性糖有蔗糖、淀粉、纖維素等，但它們都可以通過(guò)水解生成相應(yīng)的還原性單糖。總糖主要指具有

3、還原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在測(cè)定條件下能水解為還原性的 單糖的蔗糖（水解后為1分子葡萄糖和1分子果糖），麥芽糖（水解后為2分子葡萄糖）以 及可能部分水解的淀粉（水解后為2分子葡萄糖）。可溶性糖包括單糖、二糖，多糖很難溶解；可溶性固形物主要是指可溶性糖類，包括單糖、雙糖，多糖（除淀粉，纖維素、幾丁質(zhì)、 半纖維素不溶于水），我們喝的果汁一般糖都在100g/L以上（以葡萄糖計(jì)），主要是蔗糖、 葡萄糖和果糖，可溶性固形物含量可以達(dá)到9%左右。測(cè)定可溶性固形物可以衡量水果成熟 情況，以便確定采摘時(shí)間。總糖的測(cè)定一一蒽酮比色法糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后，與蒽酮（C1

4、4H10O） 脫水縮合形成糠醛的衍生物 呈藍(lán)綠色該物質(zhì)在620nm處有最大吸收，在150昭/ml范圍內(nèi)， 其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30gg左右就能進(jìn)行測(cè) 定，所以可做為微量測(cè)糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。儀器、試劑和材料儀器：電熱恒溫水浴鍋、可見(jiàn)光分光光度計(jì)、電子天平、100ml燒杯、刻度吸管、100ul 和1000ul移液槍等試劑：（1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：l00 gg/ml濃硫酸蒽酮蒽酮試劑：0.2g蒽酮溶于100 ml濃H2SO4中，當(dāng)日配制使用。操作步驟1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取7支大試管，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶

5、液葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定編號(hào)12345678葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液ml00.10.20.30.40.60.81蒸餾水ml10.90.80.70.60.40.20葡萄糖含量ug/ml0102030406080100在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0ml，注意混勻。迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完 后一起浸于沸水浴中，管口加蓋，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸10min取出， 用冰浴冷卻至室溫，在620nm波長(zhǎng)下以第1管為空白，迅速測(cè)其余各管吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)葡 萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、樣品中可溶性糖的提取：剔除試樣的非可食部分，用四分法取可食用部分切碎混勻， 準(zhǔn)確稱取510g置于研缽

6、中，砂研磨勻漿；用100 mL蒸餾水洗入100 mL燒杯中。3、在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0ml，用1000ul移液槍加入975ul蒸餾水，用100ul 移液槍吸取25ul提取液加入到試管中，空白用蒸餾水代替提取液，注意混勻。迅速浸于冰 水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn) 確煮沸10min取出，用冰浴冷卻至室溫，在620nm波長(zhǎng)下以蒸餾水為空白，迅速測(cè)其余各 管吸光值。4、計(jì)算通式為：含糖量=CV2 V3/ V1M X100%C：標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到的樣品總糖濃度；V1：測(cè)定所加樣品體積；V2：測(cè)定體系的體積； V3：提取液的體積；M：提取樣

7、品的質(zhì)量。Vc含量測(cè)定I維生素C是人體重要的維生素之一，它影響膠元蛋白的形成，參與人體多種氧化還原 反應(yīng)，并且有解毒作用。人體不能自身制造Vc，所以人體必須不斷地從食物中攝入Vc，通 常還需儲(chǔ)藏能維持一個(gè)月左右的Vc。缺乏時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病，故又稱抗壞血酸。維生素c屬水溶性維生素，分子式c6h8o6。分子結(jié)構(gòu)中具有二烯醇結(jié)構(gòu)。它易溶于水， 微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具極強(qiáng)的還原性，性質(zhì)活潑，易被氧化 為二酮基而成為脫氫抗壞血酸。維生素C分子結(jié)構(gòu)中有共軛雙鍵，固在紫外光區(qū)有較強(qiáng)的 吸收。根據(jù)維生素C在稀鹽酸溶液中，Vc吸收曲線比較穩(wěn)定，在最大吸收波長(zhǎng)處(243nm)， 其吸收值A(chǔ)

8、的大小與維生素C的濃度c的大小成正比，符合郎伯一比爾定律：A=gbc其中A為吸收度；c為試樣中維生素C的濃度，mol L-1； b為吸收池厚度，cm； 8為 摩爾吸收系數(shù)，Lmol-1cm-1。若在最大吸收波長(zhǎng)下，首先繪制出維生素C在最大吸收波 長(zhǎng)下的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后在相同條件下測(cè)定出吸光度A，由測(cè)得的吸光度A在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查 得濃度，換算為Vc含量。儀器：紫外分光光度計(jì)、研缽、試管試劑：10%HCL、1mol/L NaOH、抗壞血酸試驗(yàn)方法:1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取0.010 g抗壞血酸，加2mL10%HCl溶解，用蒸餾水定容至100ml，混勻，即 得100 ug-ml-1維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液。2

9、、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別準(zhǔn)確移取 100 ug- ml-1 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、0.1 ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.6ml、 0.8ml 于試管中，分別加入 5ml、4.9ml、4.8ml、4.7ml、4.6ml、4.4ml、4.2ml。以水為參比，在最大吸收波長(zhǎng)243nm處測(cè)定吸光度，以維生素C濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線。VC標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定編號(hào)12345678標(biāo)準(zhǔn)VC ml00.10.20.30.40.60.81蒸餾水ml14.90.80.70.60.40.20VC ug/ml01020304060801003、提取液將樣品洗凈晾干，稱取510g于研缽中，

10、加入1ml10%HCl，加少量石英砂，勻漿，轉(zhuǎn) 移到50ml容量瓶中，稀釋至刻度，混勻。移至離心管中離心10min，取上清液即為待測(cè)提 取液。4、吸光度的測(cè)定待測(cè)樣品提取液：取1.0 ml待測(cè)提取液，放入盛有0.4ml 10%HCl、3.6ml蒸餾水的試 管中，搖勻。以蒸餾水為空白，在最大吸收波長(zhǎng)243nm處測(cè)定其吸光度。堿處理提取液：依次吸取3.2ml蒸餾水、1.0ml待測(cè)池梨提取液和0.4ml 1mol-L-1NaOH 溶液放入試管中，搖勻；靜置20min后加入0.4ml 10%HCl，混勻。以蒸餾水為空白，在吸 收波長(zhǎng)243nm處測(cè)定其吸光度。待測(cè)池梨提取液與堿處理池梨提取液的吸光度之差

11、即為池梨樣品吸光度。| 蒸餾水 3.6 ml 堿未處理j 10% HCL 0.4 mlI 提取液 1.0 ml | 蒸餾水 3.6 ml 堿未處理j 10% HCL 0.4 mlI 提取液 1.0 ml1mol-L-1NaOH 0.4 ml堿處理提取液1.0 ml靜置20min10% HCL0.4 ml5、維生素C含量的計(jì)算測(cè)得池梨樣品的吸光度后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計(jì)算出池梨中維生素 C的含量mg-(100g)-1o維生素 C 含量=CXV2XV3X10 0/V XM X10 0 0c：標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到的維生素C濃度，ugml-1； V1為測(cè)吸光度時(shí)吸取樣品溶液的體積， ml； V2為

12、測(cè)定體系體積，ml; V3為提取樣品體積，ml； M為果蔬質(zhì)量，g。石細(xì)胞測(cè)定方法(未親身測(cè)定)試劑：勻漿機(jī)、燒杯、玻璃棒步驟：1、1cm3小塊；3h+3h+3h，冷凍3h，取出完全融化后再冷凍3h，取出待完全融化后再 冷凍3h；2、取出待完全解凍后，加少量水，于勻漿機(jī)中22000r/min勻漿3min；3、將勻漿轉(zhuǎn)移直1000ml燒杯中，加水至800ml，用玻璃棒攪拌1min，靜置30s,傾出 上層懸浮液，再加水至800ml，重復(fù)上述漂洗過(guò)程4次，同時(shí)收集最初幾次漂洗傾出的漂洗 液，重復(fù)進(jìn)行石細(xì)胞漂洗收集。4、合并所得石細(xì)胞，用粗濾紙過(guò)濾。將石細(xì)胞鋪開(kāi)，連同濾紙置烘箱中60-65烘至 恒重，取出，干燥器中冷卻至室溫。收集石細(xì)胞，稱量，精確導(dǎo)1mg。每處理3次重復(fù)。5、石細(xì)胞含量=提取的石細(xì)胞重量/所用果肉重量X100%。注意事項(xiàng)：加完樣品需要混勻；標(biāo)樣（標(biāo)準(zhǔn)曲線）必需用容量瓶，必需要準(zhǔn)確；其它試劑可以不用容量瓶；樣品提取需過(guò)濾或離心，取上清（上面用定量的蒸餾水沖洗），定容；堿式滴定管用橡膠；酸式滴定管用玻璃；分光光度計(jì)分可見(jiàn)光和紫外光，可見(jiàn)光用玻璃比色皿；紫外光用石英比色皿；分光光度計(jì)預(yù)熱30min，比色皿注意排