1、生物化學二實驗教學大綱課程代碼：MEIM1003課程名稱：生物化學與（二） 英文名稱：Experiment of Biochemistryand Molecular Biology（ = 2 * ROMAN II）實驗室名稱：蘇州大學基礎醫學實驗中心機能學實驗課程學時：108實驗學時：36一、本課程實驗教學目的與要求1、熟練掌握以下各項生物化學實驗的基本操作技能各種常用玻璃儀器的洗滌和使用。滴管、吸量管、微量加樣器、移液器的使用。各種離心機、分光光度計、紫外檢測儀、PCR、層析系統、水浴箱、電泳儀等的使用。各種試劑的配制。2、掌握以下各項生化實驗基本技術和基本原理蛋白質的顏色反應、比色分析法和

2、紫外分光光度法測定蛋白質的含量。血清-球蛋白提純（鹽析法、分子篩層析），醋纖膜電泳鑒定血清蛋白。聚丙烯酰胺凝膠電泳分離純化蛋白質，Western-blot鑒定蛋白質。瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白。DEAE-離子交換層析法分離血清蛋白質。各類常用生化指標的測定方法。酶促反應動力學有關方法（底物濃度、PH對反應速度的影響）。細胞核DNA、RNA的提取、純化和鑒定。3、熟悉生物化學實驗技術的有關理論分光光度法及比色分析法基本原理。離心理論。層析技術理論。電泳技術理論。核酸雜交、基因重組等部分分子生物學實驗技術理論。生物大分子分離、純化的一般實驗設計相關理論。實驗誤差、數據處理、有效數字相關理論。二、

3、主要儀器設備及現有臺套數722型分光光度計12臺水浴箱3臺電爐4臺試管及試管架2套/人離心機10臺電泳儀2臺吸量管2套/人層析缸70個微量注射器10把電泳槽8套三、實驗課程內容和學時分配序號實驗項目名稱目的要求實驗內容學時分配實驗類型每組人數必開、選開1基本操作法掌握吸量管、離心機、分光光度計的使用。了解實驗室基本操作和各項規章制度。正確使用吸量管、離心機、分光光度計。書寫實驗報告。4基礎性2必開2酶的特異性和影響酶活性的因素加深對酶的化學本質的認識；了解溫度、pH、無機離子對酶催化活性的影響。以唾液淀粉酶為例，通過不同的顏色反應來驗證其在不同溫度，pH值條件下，水解淀粉的活力大小，以及氯離子

4、銅離子對酶活力的提高和抑制作用。4基礎性2必開3血糖定量掌握鄰甲苯胺法測定血糖的原理及方法利用5-羥甲基-a-呋喃甲醛(羥甲基糖醛)與鄰甲苯胺縮合成藍色的醛亞胺的呈色反應，其顏色深淺與葡萄糖含量成正比, 繪制標準曲線并計算血樣葡萄糖的含量。4基礎性2選開4堿性磷酸酶的純化及比活性和Km值的測定熟悉從生物樣品中提取分離純化酶的一般方法；掌握堿性磷酸酶（AKP）比活性的測定原理和方法；學習作圖法求AKP的Km值。以堿性磷酸酶為例，掌握酶提取純化的方法和技術。并測定不同濃度底物時酶的活性，再根據雙倒數（Lineweaver-Burk二氏法）作圖，計算其Km值。8設計性2選開5家兔免疫血清球蛋白分離與

5、純度鑒定了解層析原理、掌握醋酸纖維素薄膜電泳操作技術。使用鹽析法分離家兔免疫血清球蛋白。用葡萄糖凝膠G25脫鹽法進行蛋白質的純化。 使用醋酸纖維素薄膜電泳法進行蛋白質的鑒定。8綜合性2必開6蛋白質的分離、提取、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳及Western印跡了解蛋白質的提取，掌握SDS-聚丙烯酰胺凝膠電法（SDS）測定蛋白質分子量及蛋白的鑒定方法。分離提取蛋白質，制作SDS-聚丙烯酰胺凝膠，應用Western印跡技術，分析經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并轉移到硝酸纖維素薄膜上的特定蛋白質成分。8綜合性2選開7高密度脂蛋白中膽固醇含量測定通過高密度脂蛋白（HDL）中膽固醇含量的測定，深入了解高密

6、度脂蛋白在脂類代謝中的作用。分離血清中的HDL， 用抽提液提取膽固醇。再用顯色液和濃硫酸與膽固醇作用生成紫紅色化合物，與同樣處理的標準液進行比色測其含量。4基礎性2必開8Folin-酚試劑法測定蛋白質Folin-酚試劑法測定蛋白質含量的原理和方法。利用蛋白質-銅絡合物還原Folin試劑，生成深藍色的化合物，且顏色深淺與蛋白質的含量成正比關系的關系，繪制標準曲線來測定樣品蛋白質含量。4基礎性2選開9乳酸脫氫酶(LDH)同工酶的分離掌握乳酸脫氫酶同工酶的分類，熟悉其顯色原理，了解各種乳酸脫氫酶同工酶的主要組織部位及臨床意義。提取大鼠臟器中乳酸脫氫酶，以瓊脂糖凝膠為支持物進行電泳分離乳酸脫氫酶同工酶

7、。4基礎性2選開10氨基酸的薄層層析熟悉用層析技術分離不同物質的原理；掌握薄層層析的基本操作方法。制備薄層板，并利用各種氨基酸結構和性質的不同，其在吸附劑表面的吸附能力的各異，分離氨基酸，并通過茚三酮反應顯色作鑒別。4基礎性2必開11細胞核的分離、純化及核酸含量的測定掌握細胞核的分離和純化的一般原理和操作方法。了解測定DNA和RNA含量的原理和方法。通過分別測定細胞質和細胞核中兩類核酸的含量，了解DNA和RNA在細胞中的分布。使用離心技術，從新鮮大鼠肝細胞中分離細胞質和細胞核。分別提取細胞質和細胞核水解液中的RNA和DNA，并繪制RNA和DNA的標準曲線，通過比色獲得細胞質和細胞核水解液中的R

8、NA和DNA的含量及比值。8綜合性2必開12實驗考試考查學生生化實驗基本操作技術和綜合分析能力。4基礎性1必開四、考核方式1、實驗報告：包括實驗名稱、日期、目的、要求、原理、操作、結果、分析、討論等。1）目的要求、原理及操作，應簡單扼要的敘述，但必須寫清楚操作的關鍵環節；2）一般實驗要有結論，扼要簡單的說明本次實驗獲得的結果；3）實驗數據結果，應歸納整理成各種圖表（如標準曲線圖、對照與實驗組的比較表等）；4）分析討論是對實驗方法、結果、異常現象的探討和評論及對實驗設計的認識、體會、建議，不是對結果的重述。5）書寫報告時應實事求是，字跡清楚、工整，杜絕抄襲。2、考核方式：實驗課成績占本課程總成績

9、的30%。由實驗理論卷面成績、實驗操作技能考核及實驗報告成績組成。對缺實驗成績者，本課程不予通過。五、實驗教材、參考書1、教材：生物化學與分子生物學實驗教程 、錢暉、周亞軍、徐嵐 科學出版社、2009年2月2、參考書：（1）藥立波主編. 醫學分子生物學技術. 第一版. 人民衛生出版社, 2002.（2）錢小紅, 賀福初主編. 蛋白質組學: 理論與方法. 第一版, 北京. 科學出版社，2003.（3）, 王武康, 王尉平主編. 生物化學與分子生物學實驗教程. 第一版, 蘇州. 蘇州大學出版社, 2001.（4）王文霞主編, 臨床生化檢驗技術. 第一版. 南京大學出版社, 1995.（5）姜泊主編

10、, 分子生物學常用實驗方法. 人民軍醫出版社, 1998.（6）顧曉松主編, 分子生物學理論與技術. 北京科學技術出版社, 2002.（7）藥立波主編, 分子生物學常用實驗技術. 人民衛生出版社, 2002.（8）(美) J.薩母布魯克, E.F.弗里奇, T.曼尼阿蒂斯著. 黃培堂等譯. 分子克隆實驗指南, 第三版. 科學出版社, 2002年.（9）盧圣棟主編. 現代分子生物學實驗技術. 高等教育出版社, 1993年.（10）邦哲主編. 生物化學與臨床醫學. 湖南科學技術出版社, 1993年.（11）李永明, 趙玉琪等編. 實用分子生物學方法手冊. 第11版, 北京: 科學出版社, 2000.（12）黃如彬主編. 生物化學實驗教程. 第2版, 北京: 世界圖書出版社, 1998.（13）張龍翔等主編. 生化實驗方法