1、單抗產(chǎn)品質(zhì)量控制策略和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立Monoclonal Antibody Product Quality Control Strategy and Setting SpecificationsConnie Lu,.DRoche, Global Biologic Quality ControlJuly 2, 2015大綱控制什么單克隆抗體結(jié)構(gòu)和變異體抗體質(zhì)量屬性如何確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)在哪里控制總體控制策略案例如何設(shè)置控制限臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2-Do Not Copy or Distribute Without Authorization單克隆抗體結(jié)構(gòu)輕鏈重鏈 二硫鍵Q = 谷

2、氨酸鹽K = 賴氨酸沒(méi)有轉(zhuǎn)譯后修飾沒(méi)有降解KK3-Do Not Copy or Distribute Without Authorization單克隆抗體變異體常見(jiàn)的轉(zhuǎn)譯后修飾C端賴氨酸被羧肽酶切除N端形成谷氨酸鹽= G0, G1, G2, SA, G0-F等的糖基化GGGGG= 糖化常見(jiàn)降解途徑D= 脫酰胺= 氧化SA聚合裂解DDDDK4-Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationYYY抗體產(chǎn)品質(zhì)量屬性5-Do Not Copy or Distribute Without Authorization產(chǎn)品相關(guān)屬性工藝相關(guān)屬性分子變異體電荷變異

3、體巰基/二硫醚變異體糖化變異體氧化變異體大小變異體序列變異體工藝相關(guān)雜質(zhì)宿主細(xì) 白宿主細(xì)胞DNA脫落蛋白A細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)雜質(zhì)(如：胰島素, 甲氨蝶呤，聚丙二醇與環(huán)氧乙烷加聚物，消泡劑）組份輔料 / 滲透壓蛋白濃度外觀微粒含水量 (凍干制劑)環(huán)境和外來(lái)因子細(xì)菌污染真菌污染支原體 內(nèi)毒素關(guān)鍵質(zhì)量屬性關(guān)鍵質(zhì)量屬性 (CQAs)?為了確保達(dá)到所需的產(chǎn)品質(zhì)量，而應(yīng)當(dāng)在合適的限度、范圍、分布內(nèi)的物理、化學(xué)、生物學(xué)或微生物學(xué)性質(zhì)或特性。”ICH Q8 R1如何確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性?表征和確認(rèn)知識(shí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估: 嚴(yán)重性 = 影響 x 不確定性- 如果某個(gè)質(zhì)量屬性的嚴(yán)重性分?jǐn)?shù) 12, 那么該屬性為CQA (方法).的6-

4、Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationCQA評(píng)估工具：影響度表PK：濃度/時(shí)間曲線下面積的藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)估。如果不能獲得某一變異體的PK數(shù)據(jù)，則使用相對(duì)FcRn結(jié)合測(cè)定法PD：如果有生物標(biāo)記物，則進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)估-Do Not Copy or Distribute Without Authorization影響&等級(jí)生物活性PK / PD增加的免疫原性風(fēng)險(xiǎn)安全性極高(20)變化100%PK有40%變化可檢出抗藥抗體（ATA），致使安全性受到限制不可逆的不良事件（AE）高(16)40%-100%變化20%-40%變化、對(duì)PD有影響可檢出ATA，

5、致使有效性受到限制可逆的AE中等(12)20%-40%變化20%-40%變化、對(duì)PD沒(méi)有影響可檢出ATA、但影響是可控的易控制的AE低(4)變化20%變化20%、對(duì)PD沒(méi)有影響可檢出ATA 、產(chǎn)生極小影響次要、一過(guò)性AE無(wú)(2)無(wú)變化對(duì)PK 或PD均沒(méi)有影響沒(méi)有檢出抗藥抗體、或檢出抗體但無(wú)相關(guān)體內(nèi)效應(yīng)無(wú)不良事件不確定性表-Do Not Copy or Distribute Without Authorization等級(jí)不確定性產(chǎn)品變異體與工藝雜質(zhì)7極高不了解（新變異體或?qū)傩裕?高有關(guān)相關(guān)分子變異體或?qū)傩缘膮⒖嘉墨I(xiàn)3中等此分子的非臨床或體外研究數(shù)據(jù)。相似類別分子的非臨床、體外研究或臨床研究數(shù)據(jù)2

6、低變異體已存在于臨床試驗(yàn)物質(zhì)中。1極低此分子特殊變異體的影響已在臨床試驗(yàn)中確立根據(jù)嚴(yán)重性分?jǐn)?shù)確定CQA影響 X不確定性 = 嚴(yán)重性低不確定性高高低嚴(yán)重性分?jǐn)?shù)表關(guān)鍵質(zhì)量屬性非CQA-Do Not Copy or Distribute Without Authorization12357202040601008011212122436608444812202822461014分子排阻色譜 (SEC)MainHMWS: 高分子量類型T=4T=0ks at 40CLMWS:低分子量類型HMWSLMWS00Time (min)10-Do Not Copy or Distribute Without Au

7、thorizationUV at 280 nmSEC用于檢測(cè)單抗分子量分布，并且能檢測(cè)出 HMWS和 LMWS由于高溫而發(fā)生的變化 - 具有穩(wěn)定性指針。實(shí)例：高分子量產(chǎn)物（HMWS）由于影響生物活性，通過(guò)SEC測(cè)得的HMWS為CQA另外，HMWS經(jīng)常被認(rèn)為具有免疫原性-Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationPK影響分?jǐn)?shù)很低（4），根據(jù)FcRn測(cè)定（73/80 = 91%）根據(jù)體外研究數(shù)據(jù)表明，不確定性分?jǐn)?shù)（3）為中等，復(fù)合：嚴(yán)重性分?jǐn)?shù)為12 (= 非CQA)影響分?jǐn)?shù)很高（16），因?yàn)樯锘钚越档?(46/103 = 45%)根據(jù)體外研究數(shù)

8、據(jù)，不確定性分?jǐn)?shù)（3）為中等，復(fù)合：嚴(yán)重性分?jǐn)?shù)為48 (= CQA)樣品效價(jià)FcRn結(jié)合SEC 分離前樣品10380主峰10487HMWS4673大綱在哪里控制總體控制策略案例12-Do Not Copy or Distribute Without Authorization總體控制策略通過(guò)檢驗(yàn)來(lái)控制“質(zhì)量”CQA工藝控制質(zhì)量屬性CQA評(píng)估“一致性”非CQA* PALM ：批準(zhǔn)后生命周期管理計(jì)劃-Do Not Copy or Distribute Without Authorization擴(kuò)展表征、可比性評(píng)估、 PALM 計(jì)劃（如：C端賴氨酸變異體）工藝表征、工藝驗(yàn)證、 PALM 計(jì)劃（如：宿

9、主細(xì)白）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：過(guò)程、 放行、 穩(wěn)定性在哪里需要檢測(cè)CQA?主要考慮:哪些工藝步驟影響這個(gè) CQA?這個(gè)CQA 在期間發(fā)生改變嗎?14-Do Not Copy or Distribute Without Authorization制劑放行制劑穩(wěn)定性原液放行原液穩(wěn)定性過(guò)程控制案例1 : HMWS的控制策略思考:哪些工藝步驟會(huì)影響HMWS?原液工藝的多個(gè)步驟制劑工藝步驟HMWS 在期間會(huì)發(fā)生變化嗎?是的, HMWS在調(diào)件和強(qiáng)制降解條件都會(huì)增加15-Do Not Copy or Distribute Without Authorization在原液和制劑的放行和穩(wěn)定性檢驗(yàn)中都檢測(cè)HMWS案例2 :

10、 宿主細(xì)白殘留的控制策略思考:白?哪些工藝步驟會(huì)影響宿主細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)條件會(huì)影響宿主細(xì)白水平DS生產(chǎn)的純化工藝會(huì)影響宿主細(xì)白殘留水平制劑過(guò)程不會(huì)影響宿主細(xì)白殘留水平期間會(huì)發(fā)生變化嗎？宿主細(xì)白殘留水平在不會(huì)16-Do Not Copy or Distribute Without Authorization在原液生產(chǎn)過(guò)程中需要測(cè)試宿主細(xì)白殘留在制劑放行和穩(wěn)定性中不需要測(cè)試宿主細(xì)白殘留案例2 : 宿主細(xì)白殘留的控制策略哪些步驟對(duì)檢測(cè)出HCP有最高的敏感性?HCP (ng/mg)8000004000200在超濾后測(cè)試HCP20101017-Do Not Copy or Distribute Without

11、 Authorization原液(150mg/mL)輔料超濾 (180mg/mL)ChP 2015:如驗(yàn)證結(jié)果證明工藝相關(guān)雜質(zhì)已得到有效的控制或去除，并達(dá)到可接受的水平，相關(guān)殘留物的檢定項(xiàng)目可不列入成品的常規(guī)放行檢定中柱3柱 2柱 1細(xì)胞培養(yǎng)收獲超濾物有最高的蛋白濃度在超濾步驟后宿主蛋白殘留不會(huì)在下降后加的輔料可能會(huì)影響宿主蛋白殘留的測(cè)定案例3: 凍干產(chǎn)品的裝量均一性 (i.e. 重量差異)哪些步驟會(huì)影響裝量均一性?- 根據(jù)ChP 2010 Vol. III 附錄IA測(cè)量5瓶的凍干干餅的最大重量差異固體: 活性藥品和輔料來(lái)源: 灌裝來(lái)源: 灌裝控制: 凍干控制: 灌裝量18-Do Not Co

12、py or Distribute Without Authorization液體: 水在凍干的干餅中?案例3: 凍干產(chǎn)品的裝量均一性 (i.e. 重量差異)過(guò)程中裝量會(huì)發(fā)生變化嗎?在藥品19-Do Not Copy or Distribute Without Authorization在過(guò)程中沒(méi)有任何變化沒(méi)有東西進(jìn)出無(wú)菌, 密封容器案例3: 凍干制品的裝量均一性 (即：重量差異)無(wú)菌灌裝及加塞最終的成品凍干無(wú)菌藥液灌入除熱源的瓶子中并半加塞軋蓋并2-8C在凍干并全壓塞QC 放行檢驗(yàn)過(guò)程控制裝量檢測(cè)每15分鐘人工檢測(cè)一次裝量直至灌裝到約2,000瓶, 然后每30分鐘檢測(cè)一次。 最終的檢測(cè)包括灌裝

13、的最后一瓶含水量20-Do Not Copy or Distribute Without Authorization解凍凍存原液解凍并在2-8C灌裝前除菌過(guò)濾的原液除菌過(guò)濾到灌裝儲(chǔ)罐中大綱如何設(shè)置控制限21-Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationQ6B：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：生物技術(shù)產(chǎn)品/生物制品的檢查方法和限度（ICH，1999）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是指一系列檢查、分析方法參考以及適當(dāng)限度，該限度包括所述檢查的數(shù)值限度、范圍或其他標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原料藥、制劑或其他生產(chǎn)階段的原料制定了一套標(biāo)準(zhǔn)，只有符合這些標(biāo)準(zhǔn)才可以認(rèn)為其適用于預(yù)期用途。II. 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定中考

14、慮的原則（2.0）A.B.C.D.E.F.鑒定（2.1）.分析考慮（2.2）方法及其準(zhǔn)確性工藝控制（2.3）工藝條件和限度藥典標(biāo)準(zhǔn)（2.4）日最大攝入量放行限度與有效期限度（2.5）貯藏期間的穩(wěn)定性統(tǒng)計(jì)學(xué)概念（2.6）數(shù)據(jù)分析-Do Not Copy or Distribute Without Authorization關(guān)鍵質(zhì)量屬性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和限度質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)類型：中間控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)原料藥和制劑的放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 原料藥和制劑的有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度：為了獲得批準(zhǔn)，放行和有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)必須包含限度。如果需要收集數(shù)據(jù)以探索關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）和限度，則可能需要“”。如果未制定有效期標(biāo)準(zhǔn)，則放行標(biāo)準(zhǔn)適用

15、于整個(gè)有效期。有效期標(biāo)準(zhǔn)必須包含預(yù)期在生產(chǎn)、貯藏、準(zhǔn)的執(zhí)行需要獲得充分的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。和處理期間發(fā)生的變化。有效期標(biāo)-Do Not Copy or Distribute Without Authorization大綱如何設(shè)置控制限臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)24-Do Not Copy or Distribute Without Authorization臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)I期研究階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)必須確保安全性基于假定的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（pCQA）pCQA 可能是CQA。oopCQA 。通過(guò)控制系統(tǒng)檢查或鑒定檢查基于臨床前數(shù)據(jù)，“目標(biāo)值”通常是指毒理學(xué)研究批次的數(shù)值。基于要求基于知識(shí)如果聚糖不參與藥物的

16、作用機(jī)制，則不放入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。效價(jià)測(cè)定法可以是結(jié)合測(cè)定法或基于細(xì)胞的測(cè)定法。由于穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)通常相同。25-Do Not Copy or Distribute Without Authorization臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)II期研究階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)下列方面，可能需要對(duì)I期研究階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作一些調(diào)整：I期研究和臨床前研究數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)結(jié)果生產(chǎn)能力/生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的評(píng)價(jià)結(jié)果穩(wěn)定性和鑒定數(shù)據(jù)生產(chǎn)工藝、處方或分析方法的任何計(jì)劃變更o o oo26-Do Not Copy or Distribute Without Authorization臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)II期研究階段的制

17、劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)變更舉例：制劑由瓶裝變更為預(yù)填充注射器：o增加注射器裝置放行和穩(wěn)定性檢查方法制劑裝量變更：oo改變內(nèi)毒素限度改變?nèi)萜鲀?nèi)體積限度增加一種新方法控制CQA：o 在CoA中增加檢查方法和限度27-Do Not Copy or Distribute Without Authorization臨床開(kāi)發(fā)階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)III期研究階段的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)必須接近質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)最終確定檢查方法，以用于上市后質(zhì)量控制檢查根據(jù)下列方面，予以完善II期研究階段質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：o oo產(chǎn)品知識(shí)生產(chǎn)一致性和生產(chǎn)能力知識(shí)盡可能以“限度”代替 “”28-Do Not Copy or Distribute Without Autho

18、rizationIII期研究階段原料藥的SEC主峰質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)舉例II期研究階段原料藥的SEC質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定為“主峰面積 95%”。工藝能力和方法變異性5次III期開(kāi)發(fā)中試批次分析結(jié)果5次II期GMP生產(chǎn)批次分析結(jié)果3次I期GMP生產(chǎn)批次分析結(jié)果共有13個(gè)數(shù)據(jù)（K = 4.044），SEC主峰面積的平均值為99.0%，SD為0.2%。 SEC主峰面積的95/99容許區(qū)間下限（TI95/99 = 平均值 - K x SD）為98.2%。o o o oo擬定原料藥放行標(biāo)準(zhǔn)為“主峰面積 97.0%”，以反映當(dāng)前的產(chǎn)品特征、生產(chǎn)變異性和方法變異性。II期研究批次的穩(wěn)定性研究SEC數(shù)據(jù)顯示，制劑在-20oC的

19、條件下保存2年后，未發(fā)生降解。在制定原料藥有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，擬定放行標(biāo)準(zhǔn)為“主峰面積 97.0%”。29-Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationIII期研究階段制劑的SEC主峰質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)舉例II期研究階段制劑的放行和有效期SEC質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均設(shè)定為“主峰面積 95%”。III期研究階段原料藥的有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)將為“主峰面積 97.0%”。II期研究批次的穩(wěn)定性研究SEC數(shù)據(jù)顯示，制劑在5oC的條件下保存1年半后，主峰面積百分比（%）大約降低0.2%。穩(wěn)定性研究SEC數(shù)據(jù)顯示，在25oC/60%RH的加速貯藏條件下保存6個(gè)月后，主峰百分比大約降低0

20、.3%。擬定制劑的放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為“主峰面積 96.0%”。擬定制劑的有效期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為“主峰面積 95.0%”。30-Do Not Copy or Distribute Without AuthorizationOutlineHow to Set Control LimitsSpecifications for BLA/MAA Filing31-Do Not Copy or Distribute Without Authorization大綱如何設(shè)置控制限產(chǎn)品的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)32-Do Not Copy or Distribute Without Authorization建立數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)庫(kù)：臨床前

21、和臨床用批次產(chǎn)生的數(shù)據(jù)生產(chǎn)一致性證明所用批次產(chǎn)生的數(shù)據(jù)生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，包括生產(chǎn)地點(diǎn)和時(shí)間、規(guī)模、工藝版本及其在相應(yīng)臨床研究中的應(yīng)用穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)相關(guān)的研發(fā)數(shù)據(jù)相關(guān)的分析方法性能數(shù)據(jù)信息如果從毒理學(xué)研究到生物制品申請(qǐng)中間檢查方法發(fā)生變更：使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的“商業(yè)化”方法重新檢驗(yàn)相關(guān)批次的保留樣品。-Do Not Copy or Distribute Without Authorization制定限度注：此圖例證說(shuō)明；具體時(shí)間、溫度和降解速率均取決于具體分子。-Do Not Copy or Distribute Without Authorization檢查結(jié)果時(shí)間（月）條件偏離，制劑在45下的降解制劑有效

22、期標(biāo)準(zhǔn)制劑放行標(biāo)準(zhǔn)室溫貯藏期間，制劑在30 下的降解原料藥有效期標(biāo)準(zhǔn)灌裝/檢查期間，原料藥液體在25下的降解原料藥放行標(biāo)準(zhǔn)加工期間，制劑在5下的降解在貯藏時(shí)-20下原料藥的降解全過(guò)程有效期模型：HP-SEC單體%制定SEC限度舉例原液生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)：SEC分析方法變異性 ：SD = 0.1%毒理學(xué)研究批次（主峰99.0% ）最高劑量是目標(biāo)值的3*倍含3% HMWS的產(chǎn)品安全含5% HMWS的產(chǎn)品安全知識(shí)*此數(shù)字會(huì)因產(chǎn)品而異。-Do Not Copy or Distribute Without Authorization原料藥的SEC主峰面積（%）放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： 97.0%批次總數(shù)（毒理學(xué)研究+ I/II/III期研究 + 一致性研究）15SEC主峰面積（%）的平均值：98.9主峰面積（%）的標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）：0.22容許系數(shù)（K）：3.878SEC主峰面積（%）最小值：98.6SEC主峰面積（%）最大值：99.395/99 TI 下限（平均值 K x SD）：98.095/99 TI上限（平均值+ K x SD）：99.8制定