1、實驗四 抗菌藥物敏感性試驗抗菌藥物敏感性試驗（antimicrobial susceptibility test，AST）1.概念： 簡稱藥敏試驗，是在體外測定抗菌藥物抑制或殺滅細菌的能力，是測定細菌對抗菌藥物敏感性的試驗。2二一紙片瓊脂擴散法稀釋法3一、實驗目的：1.掌握紙片擴散法藥物敏感試驗（K-B法）的原理、方法、結果判讀。2.了解K-B法的質量控制。3.熟悉肉湯稀釋法藥物敏感性試驗的原理、操作方法、結果判讀和臨床意義。 4二、試驗器材：1.菌種：大腸埃希菌18-24h培養物。2.MH平板、 MH肉湯。3.藥敏紙片、環丙沙星、無菌生理鹽水、無菌棉簽、刻度尺、 0.5麥氏比濁管、鑷子、天平

2、、無菌試管、無菌吸頭等。 5 將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，藥敏紙片中的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷向紙片周圍擴散形成遞減的梯度濃度，藥物形成類似于同心圓的等濃度圈，當某一圈的藥物濃度恰好剛剛能抑制細菌生長時，細菌僅能在此圈外面生長而形成藥敏紙片的抑菌圈。抑菌圈的大小反應細菌對藥物的敏感度，抑菌圈越大越敏感。（一）紙片瓊脂擴散法（disk diffusion method）6實驗方法：1.準備菌懸液：分別挑取臨床菌株和標準菌株，用生長肉湯或生理鹽水調整至0.5麥氏濁度標準。72.涂布平板：無菌棉簽在三個方向均勻抹瓊脂表面（每次轉60）使菌液均勻分布，最后沿平板內緣涂抹

3、一周。 8 3.貼含藥紙片：一旦紙片貼上，不能移動；各抗菌紙片中心距離應大于24mm，紙片距平板內緣應大于15mm。94. 孵育：放于35孵箱中，通常于16-18h后，測量抑菌環直徑。105. 與解釋標準核對得出結論 耐藥 (resistant, R)：所分離菌株能被測試藥物使用推薦劑量時在感染部位可達到的藥物濃度所抑制。敏感(susceptible, S)：所分離菌株不被測試藥物常規劑量可達到的藥物濃度所抑制。中介(intermediate, I)：抗菌藥物在生理濃集的部位具有臨床效果。11（二）稀釋法藥敏試驗稀釋法（dilution method）藥敏試驗指在體外定量檢測抗菌藥物對細菌抗菌

4、活性的方法，是測定抗菌藥物的最低抑菌濃度MIC。最低（小）抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC)：所測得的某抗微生物藥能抑制檢測菌肉眼未見生長的最低濃度。常量肉湯稀釋法、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法12常量肉湯稀釋法實驗材料：試管、MH肉湯培養基抗菌藥物溶液：儲存液濃度5120mg/L，或為最高測試濃度的10倍。分裝密封低溫儲存。測試時做系列倍比稀釋。接種物：菌液終濃度為5105CFU/ml：0.5McFarland標準菌液，1:100稀釋，與等量抗菌藥物混合；稀釋菌液劃線接種檢測純度。13抗菌藥物對倍稀釋抗生素移液管114另設測試菌生長對照管一支不含藥物。將已調節好的待測菌懸液1mL加入各含藥管內，使每mL含細菌約5105CFU/mL。各試管置35孵育1624h后觀察結果。質控菌對照按上述操作平行進行。結果報告：MIC的測定（mg/L）MIC小于或等于敏感解釋標準：敏感SMIC大于或等于敏感解釋標準：耐藥RMIC在