1、NC膜吸附蛋白的常見問題處理基于膜的檢測試劑研發(fā)人員應(yīng)該嚴格考慮影響蛋白質(zhì)在硝酸纖維素膜上結(jié)合眾多因素，其中包括原材料的固有屬性和處理過程等。隨著膠體金標記技術(shù)的發(fā)展、研發(fā)人員對膠體金快速檢測技術(shù)深入研究，市場上基于膜的快速免疫層析檢測產(chǎn)品的種類迅速增多。雖然免疫層析產(chǎn)品的包裝設(shè)計種類繁多，實際上目前主流的商品化檢測試劑盒主要下面兩種形式。最常用的檢測形式為側(cè)向?qū)游龌蛘邔游龆浚@種檢測形式通常應(yīng)用于診所或者由直銷客戶檢測。另一種檢測形式為豎向斑點滲濾，該檢測形式需要較強的操作技巧，僅限于研究使用。不管試劑采用那種檢測形式，靈敏、可重復(fù)的檢測試劑的生產(chǎn)需要試劑生產(chǎn)商采用有效的途徑制備檢測線工作

2、液。快速診斷試劑生產(chǎn)商經(jīng)常對如何優(yōu)化檢測線相關(guān)的文章非常感興趣。這些文章可以有助于研發(fā)人員涉及關(guān)于蛋白質(zhì)固著于硝酸纖維素膜基本原理的討論，并對研發(fā)人員在開發(fā)免疫層析試劑中面臨的常見問題給予強調(diào)。由于關(guān)于蛋白質(zhì)吸附于NC膜的問題普遍存在于側(cè)向?qū)游觯虼诉@篇文章重點討論這方面的問題。蛋白質(zhì)吸附的重要性圖1依靠在膜上適當?shù)慕Y(jié)合捕獲試劑，用試紙條檢測樣本可以獲得清晰、明顯的結(jié)果。在免疫層析檢測中，蛋白質(zhì)固著于NC膜作為待測樣本的捕獲試劑。由于檢測結(jié)果完全取決于捕獲試劑在膜上達到良好的吸附效果，因此蛋白質(zhì)在膜上均一、良好的吸附對檢測結(jié)果非常重要（見圖1）。自從NC膜第一次應(yīng)用于蛋白質(zhì)吸附以來，已有相當多

3、的關(guān)于蛋白質(zhì)吸附于NC膜的研究，但蛋白質(zhì)吸附于NC膜的確切作用機理仍然不能確定。雖然多種作用力在結(jié)合中起到作用，尤其比如疏水力、氫鍵、靜電作用，但是每種作用力的重要性和明確的效果仍然讓人難以琢磨。目前有兩種比較合理的作用模式。第一種模式認為，蛋白質(zhì)最初通過靜電作用被吸附到NC膜表面，而長期的結(jié)合作用是通過氫鍵和疏水作用完成的。雖然這一原理難以證明，但與已發(fā)表的文獻實驗結(jié)論一致，也是最為接受的作用機理。圖2本檢測結(jié)果中的捕獲線有代表性的反應(yīng)了蛋白吸附問題表2在這幾個例子中，樣品檢測結(jié)果的檢測線存在明顯的蛋白質(zhì)結(jié)合問題。第二種模式認為，蛋白質(zhì)首先通過疏水相互作用結(jié)合到NC膜上，通過靜電力牢固地與N

4、C膜結(jié)合則。該結(jié)合模式同大量已發(fā)表的文獻結(jié)果一致，然而靜電作用機理對于采用干燥或乙醇吸附方法到達的蛋白質(zhì)長期穩(wěn)定的吸附于NC膜上無法提高合理的解釋。不管蛋白質(zhì)結(jié)合的作用力如何達到平衡，研究人員在優(yōu)化蛋白質(zhì)吸附于特定的NC膜時，必須綜合考慮所有影響蛋白質(zhì)吸附的作用力。這一觀點不可避免的影響著試紙條板材的選擇及其處理工藝。例如，如果產(chǎn)品開發(fā)人員選用可以極度降低靜電相互作用或者疏水相互作用的緩沖液，那么蛋白質(zhì)的吸附能力則劇烈的降低。同理，蛋白質(zhì)點膜后充足地干燥對于確保蛋白質(zhì)長期穩(wěn)定地固著于NC膜非常重要。生產(chǎn)商選用的材料能夠有效地將蛋白吸附于NC膜上。影響蛋白質(zhì)吸附于NC膜的材料通常有3種類型：非特

5、異性的蛋白質(zhì)、影響靜電相互作用以及疏水相互作用的物質(zhì)。常見的能夠降低蛋白質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)包括競爭蛋白質(zhì)結(jié)合位點的其他蛋白，如BSA、動物血清，干擾氫鍵的形成物質(zhì)（如甲酰胺、尿素），影響疏水作用形成的物質(zhì)（如Tween、Triton、Brij）。人工合成的結(jié)合物比如聚乙烯醇、聚乙二醇以及聚乙烯吡咯烷酮也可以影響蛋白質(zhì)的結(jié)合，它們的作用機理可能是抑制一個或者多個蛋白質(zhì)與NC膜結(jié)合的共同作用的結(jié)果。如果NC膜上結(jié)合的蛋白量不足或者蛋白結(jié)合力不夠強，就會出現(xiàn)相當多的問題，在檢測結(jié)果的檢測線上非常明顯（見圖2）。如果膜上結(jié)合的蛋白量太低，那么在結(jié)果中檢測線顯色較弱而且檢測靈敏度降低（見圖3）。如果蛋白不能牢

6、固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前發(fā)生擴散,從而導(dǎo)致檢測線較寬、顯色較弱而不是鮮艷而清晰,使檢測結(jié)果難以解釋。在極端條件下，如果蛋白與NC膜的物理吸附作用太弱，流過的蛋白檢測物和表面活性劑溶液可能將固著的蛋白從NC膜上洗掉，從而顯示較寬或者根本不清晰的檢測線，難以解釋檢測結(jié)果。圖3弱的捕獲線反應(yīng)了吸附于膜上的蛋白量很低圖4流過的待檢蛋白和表面活性劑溶液洗掉NC膜吸附的捕獲蛋白導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)擴散的檢測線。體外診斷試劑研發(fā)人員經(jīng)常遇到上述問題，而且這些問題明顯地延長了免疫層析檢測試劑的研發(fā)周期。為了了解如何解決上述問題，研究人員首先應(yīng)該牢固的掌握影響蛋白與NC膜結(jié)合的各種因素，包括材料

7、的固有屬性及其檢測前的處理過程。本文的第一部分就這些問題進行討論，第二部分主要介紹在技術(shù)上如何解決這些問題（待發(fā)表于IVD技術(shù)雜志）。影響蛋白質(zhì)吸附的因素當研究蛋白質(zhì)捕獲劑結(jié)合于NC膜時,研發(fā)人員應(yīng)該考慮下面五個影響蛋白質(zhì)結(jié)合作用機理的每一個關(guān)鍵因素。0溶解捕獲蛋白的工作緩沖液；0用來固著捕獲蛋白的NC膜；0捕獲蛋白自身；0將捕獲蛋白點樣于NC膜的系統(tǒng)；0捕獲蛋白點樣時的環(huán)境濕度。雖然很多研發(fā)實驗室對于免疫層析檢測中使用的工作緩沖液和膜的特性進行了充分的研究，但他們不可能全面的研究或優(yōu)化他們使用的系統(tǒng)和捕獲試劑。這些忽略的步驟通常由于在開發(fā)之前就已經(jīng)考慮恰當，因此在開發(fā)中很少有機會進一步調(diào)整。

8、由于疏漏了對那些因素優(yōu)化，研發(fā)人員常常集中精力優(yōu)化他們認為必須優(yōu)化的方面。捕獲劑隨著檢測項目的不同，作為捕獲劑的蛋白質(zhì)各不相同。即便捕獲劑差異的稍微,也沒有一個捕獲劑與另外的捕獲劑完全相同。不同的蛋白捕獲劑對不同膜的吸附能力不同，或許這一因素至關(guān)重要（見圖5）。單克隆抗體作為較均一的蛋白捕獲劑，優(yōu)化與NC膜的結(jié)合過程較為簡單,而多克隆抗體由于含有針對大量不同的抗原決定簇的抗體，不同抗體的最佳結(jié)合條件可能稍微不同，從而導(dǎo)致蛋白與膜結(jié)合條件的優(yōu)化過程較為復(fù)雜。比如IgA、IgM存在結(jié)構(gòu)或者空間位阻等因素，其與膜結(jié)合條件的優(yōu)化過程較為困難。比如BSA、A蛋白以及G蛋白由于化學(xué)性質(zhì)或者分子太大較易吸附

9、于固相載體，從而非常難將其吸附于NC膜。HUtibtm.iilhIGon423-1七E.E4Mt富專E圖5IgG、白蛋白與不同廠家NC膜結(jié)合能力的比較。儀器設(shè)備捕獲劑噴涂系統(tǒng)仍然存在某些問題，大多數(shù)商品化可用的（捕獲劑噴膜、劃線）儀器設(shè)備各有利弊。其可變參數(shù)包括能否噴涂給定的體積，能否觸及條、墊或膜,噴涂速度以及噴涂后處理過程。體外診斷試劑生產(chǎn)商需要的最佳解決方案即為找到能夠最有效地解決實際生產(chǎn)過程中面臨的問題，比如原材料問題、生產(chǎn)能力問題。優(yōu)化其他因素也可以優(yōu)化特定的捕獲線噴涂設(shè)備。環(huán)境濕度點膜時的環(huán)境濕度嚴重影響捕獲線的質(zhì)量，尤其對噴膜系統(tǒng)影響嚴重。如果空氣濕度太低，則NC膜上聚集靜電荷，

10、從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)噴涂于NC膜表面時容易產(chǎn)生斑點，NC膜表面容易產(chǎn)生疏水斑。如果空氣濕度太高，導(dǎo)致NC膜對捕獲蛋白的毛細作用加強，從而容易引起捕獲線變寬或者擴散。通常情況下，最佳的點膜環(huán)境相對濕度應(yīng)保持在45-65%。為了確保原材料的均一性，點膜前應(yīng)根據(jù)相應(yīng)試驗確定的最佳平衡時間將NC膜在工作環(huán)境中平衡。工作緩沖液的優(yōu)化由于蛋白質(zhì)捕獲劑千差萬別，不同蛋白的最大結(jié)合量工作緩沖體系各不相同。影響點膜工作緩沖液的重要因素有兩個。0蛋白質(zhì)的可溶性（即用于吸附于NC膜的蛋白量）；0蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性（即傾向于聚集或溶于水）為了確保足夠的蛋白噴涂捕獲線，首先必須將捕獲蛋白溶解于點膜緩沖液，而點膜緩沖液維持一定

11、的離子濃度可以確保蛋白的可溶性。盡管點膜工作液具備一定的離子強度有助于控制捕獲劑的PH值，但也可以干擾蛋白質(zhì)結(jié)合的靜電相互作用。因此，確定維持足量的捕獲蛋白濃度的最低可能離子強度至關(guān)重要。如果特定濃度的蛋白質(zhì)分子在溶液中穩(wěn)定，那么就會溶解于溶液中。但是如果它的能量狀態(tài)有利于形成固體，那么吸附到NC膜上的蛋白量多于穩(wěn)定溶解在溶液里的蛋白量。采用破壞穩(wěn)定劑或者沉淀劑能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生這種能量狀態(tài)，但是如果誘導(dǎo)過度也可能引起其它的問題。如果蛋白在點膜以前沉淀，那么整個試劑系統(tǒng)就高度不穩(wěn)定且?guī)缀跬耆豢芍貜?fù)性，導(dǎo)致剩余的吸附到NC膜上的溶解蛋白量劇烈減少，而且沉淀物也可造成諸如堵塞噴涂設(shè)備管道或者NC膜微孔

12、等問題。在某種情況下，點膜過程中為了達到適量的蛋白吸附必須將蛋白質(zhì)處于不穩(wěn)定狀態(tài)，有些情況也有例外。上述分析表明，通過調(diào)整蛋白噴涂工作緩沖系統(tǒng)的屬性能夠改變蛋白質(zhì)與NC膜的結(jié)合作用，其中核心屬性涉及緩沖液的離子強度、酸度及所用沉淀劑濃度。離子強度在給定的離子強度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶解度隨著工作緩沖液中鹽濃度的增加按比例增加。為了降低溶液中捕獲蛋白分子的穩(wěn)定性，溶液的離子強度應(yīng)該盡可能低，這樣可以增加蛋白質(zhì)與NC膜結(jié)合的速度。同時，研發(fā)人員也應(yīng)該注意，高濃度鹽能夠引起蛋白沉淀，而且噴膜后的干燥過程中大量的鹽能夠干擾檢測試劑的穩(wěn)定性和靈敏度。酸度點膜工作液的PH值相當顯著的影響蛋白質(zhì)與NC膜的結(jié)合效果

13、。通常蛋白質(zhì)在等電點時的溶解度最低的。因此，研發(fā)人員為了降低溶液中捕獲蛋白分子的穩(wěn)定性，將捕獲蛋白的等電點作為理想的噴膜工作緩沖液的Ph值。共沉淀劑研發(fā)人員通常選擇添加不穩(wěn)定劑或共沉淀劑降低溶液中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性來調(diào)整噴膜工作緩沖液。IgG的Fc區(qū)和F(ab)區(qū)對共沉淀劑的穩(wěn)定性不同，而且Fc區(qū)結(jié)構(gòu)更可能被共沉淀劑降解,部分不穩(wěn)定的Fc區(qū)導(dǎo)致更多在正常情況下隱藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水基團暴露。因此，不管那種蛋白質(zhì)與NC膜的結(jié)合機理被接受，由于采用共沉淀劑增加的蛋白質(zhì)疏水性將提高蛋白質(zhì)與NC膜的結(jié)合能力。圖6采用不同緩沖液以lmg/ml鼠IgG劃線的檢測結(jié)果最常用的共沉淀劑時醇類，醇類有許多理由值得推

14、薦。醇類的存在有助于NC膜的重濕潤，減少NC膜可能帶有的靜電，而可以降低溶液中的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。在基于膜的免疫分析中，3-5%的甲醇可以極大地提高檢測性能。在幾年前，將醇類提高蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合性能應(yīng)用于ELISA微孔板生產(chǎn)中，而現(xiàn)在這方法已經(jīng)作為標準的操作規(guī)程。脂肪醇對NC膜結(jié)合蛋白的影響發(fā)表于1980年，加1%異丙醇作為固定劑在westernblotting實驗廣泛應(yīng)用。雖然其他物質(zhì)如硫酸銨等作為沉淀劑有時也有很好的效果，但是它們通常不如醇類，這類型的試劑濃度稍微的變化都會嚴重影響蛋白質(zhì)的沉淀效果。鑒于這種原因，通常不會使用醇類以外的其他共沉淀劑。綜上所述，新產(chǎn)品開發(fā)的噴膜工作緩沖液為：

15、10mMPH7磷酸緩沖液+3%甲醇。雖然這種緩沖液不是所有蛋白質(zhì)的最佳工作液，但它為開發(fā)過程提供了一個極好的起始點。膜對蛋白質(zhì)結(jié)合的影響在快速診斷檢測中，NC膜在三個方面顯著影響蛋白質(zhì)的結(jié)合。0NC膜的孔徑0膜的后處理0膜的類型由于作為捕獲劑的蛋白質(zhì)種類繁多，沒有一種NC膜作為最佳NC膜適合于任何快速檢測反應(yīng)。不同類型的NC膜與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力差別較大（見圖5）,這就意味著任何一個新產(chǎn)品的開發(fā)都必須重新篩選膜。另外，對膜等額外優(yōu)化可能會進一步提高快速檢測試劑的性能與重復(fù)性。孔徑研發(fā)人員在側(cè)向免疫層析中應(yīng)謹慎的對待NC膜供應(yīng)商提供的NC膜標稱孔徑。膜的實際孔徑取決于采用的測量方法，而不同膜生產(chǎn)商

16、采用不同的測量方法，因而兩個相同標稱孔徑的NC膜采用相同的測量方法檢測其實際孔徑差異顯著（圖7）。|hrinA*Dul白BaMiqCDtiini54521【ErhwHMrir-BdPJdM品齊圖7采用Coulter氣孔計檢測的NC膜孔徑數(shù)據(jù)通常在豎向過濾即根據(jù)NC膜的厚度檢測NC膜的孔徑，而豎向過濾測定的膜孔徑和類型與側(cè)向過濾測定的膜孔徑與類型沒有相關(guān)性。因此，在側(cè)向免疫層析中，常規(guī)方法測定的NC膜孔徑與實際孔徑有一定的差異。如果NC膜帶有塑料底襯，則無法用豎向過濾測定膜的孔徑。在這種情況下，供應(yīng)商提供的膜孔徑常常為基于側(cè)向毛細作用進行估計。研發(fā)人員也可以慎重地根據(jù)標稱孔徑區(qū)分同一廠家的NC膜

17、，但不推薦采用這種方法區(qū)分不同廠家生產(chǎn)的NC膜。尤其對于側(cè)向?qū)游鰜碚f，標稱孔徑不是NC膜蛋白質(zhì)結(jié)合能力的依據(jù)，建議研發(fā)人員進行新的研發(fā)項目前最好篩選最佳的NC膜。盡管標稱孔徑實際意義較小，但NC膜的側(cè)向孔徑和膜的結(jié)構(gòu)對于NC膜是否能應(yīng)用于側(cè)向?qū)游鲇兄匾挠绊憽Ｔ谝欢ǖ姆秶鷥?nèi)，NC膜的有效表面積隨著標稱孔徑的減小而增加，從而NC膜的蛋白結(jié)合能力隨之增加。不同孔徑NC膜的近似表面積可以通過各種材料的比表面積率（SAR）進行估計。比表面積率即NC比表面積率（SAR）表IWhatmanNC膜比表面積率檢測值（BET表面積檢測方法檢測數(shù)值）標定孔徑大小伽）1105812986663膜孔內(nèi)的有效表面積與膜

18、表面積的比率（表1）。另外一個重要的因素即為隨著NC膜孔徑減小，側(cè)向?qū)游龅拿氉饔靡步档停ū?）,從而由于待檢分析物與捕獲蛋白較長的反應(yīng)時間增加了側(cè)向免疫層析的檢測靈敏度。圖8后期處理過程中存在水，可能導(dǎo)致捕獲線存在條紋或產(chǎn)生嚴重的批間差異。上述兩種現(xiàn)象的綜合效應(yīng)即為采用較小孔徑的NC膜可以顯著提高檢測的靈敏度。作為常規(guī)的指導(dǎo)方針，如果研發(fā)人員比較關(guān)心最終檢測的靈敏度，則應(yīng)該選擇盡可能小孔徑的NC膜；如果研發(fā)人員比較關(guān)心側(cè)向?qū)游龅姆磻?yīng)速度，則應(yīng)該選擇較大孔徑的NC膜。在產(chǎn)品研發(fā)早期階段，無論需要什么種類的NC膜，研發(fā)人員最好應(yīng)該盡可能篩選最佳的NC膜。后處理NC膜生產(chǎn)后通常進行膜的后處理，可以

19、去掉膜表面的沒有聚合的單體分子或者改善NC膜的重濕潤性。另外，后處理可以為NC膜添加少量的化學(xué)試劑或其他物質(zhì)以進一步提高最終檢測試劑的性能。通常情況下，生產(chǎn)廠家應(yīng)該知道在NC膜上添加什么物質(zhì)，并掌握添加濃度和程序。在NC膜添加劑存以及NC膜結(jié)合一定蛋白質(zhì)的條件下，NC膜添加劑對膜爬行速率、老化情況的具有明顯的影響效果。在生產(chǎn)過程中，大量的企業(yè)為了保持NC膜的親水性而對其進行后處理。實際上，就捕獲線點膜于NC膜等生產(chǎn)流程以后或到達終端用戶以前是否對NC膜進行親水性處理意見不同。由于減少了側(cè)向免疫層析檢測試劑生產(chǎn)商必須的膜處理程序，購買的經(jīng)過預(yù)處理的NC膜擁有迷人的魅力。這種處理過的NC膜可以直接

20、現(xiàn)貨供應(yīng)，從而免除了購置蛋白質(zhì)噴膜后進行處理NC膜儀器設(shè)備的費用，并縮短的生產(chǎn)周期。在購買處理過的NC膜以前，研發(fā)人員應(yīng)該考慮下列可能不適應(yīng)生產(chǎn)的情況。NC膜的儲存超過使用效期，導(dǎo)致在捕獲蛋白噴膜以前NC膜的親水性添加劑從膜上脫落，這是使用處理后NC膜的主要缺憾。NC膜上親水性添加劑的濃度改變也會影響NC膜的蛋白結(jié)合能力、膜的親水性以及側(cè)向爬行速度。因此，檢測試劑的有效期取決于膜親水性添加劑的含量、從NC膜生產(chǎn)到檢測試劑生產(chǎn)的時間間隔以及檢測試劑進行測試時面臨的未知因素。另外，如果生產(chǎn)商購買后對NC膜進行后處理，研發(fā)人員應(yīng)記錄NC膜上親水性試劑濃度并對其進行充分的穩(wěn)定性研究，從而建立最佳的后處

21、理程序確保膜的使用和長時間儲存。未處理的NC膜的親水性與其孔徑直接相關(guān)，但親水性試劑處理的NC膜親水性則由其處理試劑決定。如果NC膜在儲存時處理試劑脫落或測試時被樣本沖走，那么膜的實際性能與其標稱性能相比發(fā)生劇烈的變化。通過原始質(zhì)控檢驗，生產(chǎn)商可以確定親水性處理和孔徑結(jié)構(gòu)對NC膜的綜合影響。如果親水性處理試劑老化或從NC膜上脫落，從而使NC膜的性能取決于膜孔徑的比例增加，導(dǎo)致原始質(zhì)控檢驗無效。研發(fā)人員通過采用孔徑結(jié)構(gòu)一致的不同批號且未經(jīng)親水試劑處理，以盡量確保產(chǎn)品的最小變異系數(shù)。表IIWhatman膜的典型層析率數(shù)據(jù)標定孔徑大小（Um）遷移至4.5cm時所需時間（sec）32453551852

22、58140201210020由于許多處理試劑都是水溶性的，噴涂捕獲線時，任何水的存在均可沖掉捕獲線處的處理試劑，導(dǎo)致膜上部分區(qū)域由于沒有親水性處理劑而高度疏水，使捕獲蛋白不能與待測樣本、膠體金結(jié)合物充分結(jié)合，嚴重影響試劑盒的敏感性和特異性。疏水斑點常常引起樣品不均一通過捕獲線，使檢測結(jié)果產(chǎn)生條紋或顯色深淺不一致（圖8），甚至檢測結(jié)果呈現(xiàn)白色條紋。如果在噴涂捕獲線后進行親水處理，則可避免這些缺陷。研發(fā)人員應(yīng)該根據(jù)時間、成本權(quán)衡處理過或者沒有采用表面活性劑處理的原料在確保試劑穩(wěn)定性與精密性上的優(yōu)勢。膜的類型不管膜的孔徑或者何種添加劑對其處理，NC膜的類型顯著影響著其蛋白結(jié)合的水平。圖5顯示不同制造

23、商生產(chǎn)的不同標稱孔徑NC膜對免疫球蛋白和白蛋白的不同結(jié)合水平比較。一系列的數(shù)據(jù)顯示了結(jié)合水平上的差異與NC膜標稱孔徑變化關(guān)系不大。通過對圖表比較表明，免疫蛋白結(jié)合最佳的膜對白蛋白結(jié)合不一定最佳。因此，相關(guān)蛋白結(jié)合水平不僅受NC膜設(shè)計形式的影響，還受到生產(chǎn)商原料來源的影響。對于有固定表面積的一系列NC膜來說，蛋白質(zhì)的結(jié)合水平是由NC膜的聚合物類型與影響膜表面能量的處理試劑共同作用的結(jié)果。生產(chǎn)NC膜的基本聚合物可以適用于許多商業(yè)途徑，而且不同使用途徑性能上都有稍微差別，況且不同NC膜生產(chǎn)商采用不同的處理方法。因此，建議研發(fā)人員通過試驗評價使用的NC膜及其對相關(guān)蛋白結(jié)合能力。NC膜的老化如果NC膜未

24、經(jīng)過親水性添加劑處理，新生產(chǎn)的NC膜將在其表面殘留約5-10%的濕氣。涉及NC膜老化的傳統(tǒng)觀念一致認為殘留的濕氣可以揮發(fā)掉，因此，隨著NC膜濕氣的揮發(fā)，NC膜漸漸變得疏水、聚集靜電荷和易脆。實際上，并非如此簡單。有些關(guān)于NC膜老化的研究認為，NC膜殘留的濕氣是可揮發(fā)的，而最近研究表明,NC膜在長期高相對濕度的儲存條件下，仍然保持疏水效果。經(jīng)過親水性試劑處理的NC膜穩(wěn)定性取決于親水性添加劑的性質(zhì)。儲存NC膜時，避免接觸容易引起NC膜產(chǎn)生疏水作用的有機溶劑和膜聚合物斷鏈的強光照射非常重要。目前，在正確的儲存條件下（45-55%相對濕度），NC膜至少穩(wěn)定儲存2年以上。噴涂捕獲線以后封閉的NC膜可以儲

25、存更長時間。NC膜爬行速度的優(yōu)化NC膜的爬行速度是影響免疫分析結(jié)果的關(guān)鍵因素之一。在NC膜、檢測線以及待測樣本濃度確定的情況下，檢測的靈敏度隨著爬行速度的下降而提高，即隨著NC膜爬行速度的下降，顯示的待測樣本濃度提高。表III有效的膜封閉材料材料Tween20TritonXTOOPVA(15kDa)PVP(33kDa)PEG(20kDa)Brij常用工作濃度(%)0.01-20.01-20.10-50.10-70.05-30.05-3兩者遵循一個與平方成反比的規(guī)律，即：顯示的待測樣本濃度a1/（層析速度）2因此，若NC膜爬行速度提高一倍則待檢樣本濃度顯示為原來濃度的1/4.封閉劑NC膜本身為疏水材料，而NC膜對水的層析作用主要由于其纖維間隙存在水份。NC膜的疏水作用主要由以下三個因素造成：0疏水待測物與NC膜非特異性反應(yīng)而產(chǎn)生的非特異性信號；0纖維間隙水份喪失引起的長期儲存困難；0快速檢測中的重潤濕速度、爬行速度太慢對噴涂捕獲線后的NC膜封閉處理可以減少或消除這些現(xiàn)象。在理論上，研發(fā)人員應(yīng)選擇有助于確保產(chǎn)品的穩(wěn)定性和可重復(fù)性的封