1、單克隆抗體藥物的制備本節(jié)聚焦1.了解動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗 體的原理和應(yīng)用.2.單克隆抗體的制備和應(yīng)用.有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如受精作用動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例1 受精作用動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例2 熒光標(biāo)記的鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合示意圖 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證實(shí)細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人-鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后有什么意義？一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.動(dòng)物細(xì)胞融合的過程請同學(xué)們閱讀課本P52動(dòng)物細(xì)胞融合 思考：1什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合？2動(dòng)物細(xì)胞融合的結(jié)果是什么？3細(xì)胞融合原理是什么？ 4促進(jìn)細(xì)胞融合的方法有哪些 ？不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)

2、行有絲分裂1 .過程一、動(dòng)物細(xì)胞融合2 .概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。3 .結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞4 .原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性5 .誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒6 .意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）7 .應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段.生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌雞原生質(zhì)體血紅細(xì)胞1975年人胡蘿卜腹水癌細(xì)胞原生質(zhì)體1976年人小鼠纖維肉瘤細(xì)胞畸胎瘤細(xì)胞1978年特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機(jī)體受抗

3、原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。單克隆抗體讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。單: 單個(gè)細(xì)胞 克隆: 無性繁殖 單克隆抗體:單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì) 單一特異性強(qiáng)的抗體 閱讀課本P52最后一段和P53的第一段，思考回答問題。抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.抗體是如何產(chǎn)生的？3.傳統(tǒng)制備抗體的方法是什么，及缺陷？4.B淋巴細(xì)胞有什么特點(diǎn)？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的

4、？2.抗體是如何產(chǎn)生的？知識回顧3.抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原 反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。4.B淋巴細(xì)胞有什么特點(diǎn)？ 動(dòng)物在免疫過程中產(chǎn)生的抗體種類可達(dá)百萬種每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體但是： 一個(gè)B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖. 提示1：對B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？ 提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。5.單克隆抗體的制備一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，

5、又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類型？培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？3種骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞- B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞5種B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞- B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞將不同雜交細(xì)胞分開，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體

6、的雜交瘤細(xì)胞。 該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高2.制備過程：誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞兩次篩選的原因單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？ 你學(xué)會(huì)了嗎？6.單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。“生物導(dǎo)彈” 單克隆抗體藥物 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，

7、形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。本節(jié)小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢重點(diǎn)1. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A BC D C達(dá)標(biāo)訓(xùn)練(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的 細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_類物質(zhì)。（2）d過程是一個(gè)_過程，該過程的進(jìn)行常用_或_的誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成 種類型的C細(xì)胞，因此需用_培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是 ，其特點(diǎn)是_。效應(yīng)B 抗原 細(xì)胞融合 聚乙二醇 滅活的病毒 3雜交瘤細(xì)胞選擇性 既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體 2.(4)在培養(yǎng)時(shí)通過