1、 CNAS-GL037 臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南Guidance on the Verification of QuantitativeMeasurement Procedures used in the ClinicalChemistry2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 1 頁 共 11 頁前言本文件由中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS）制定，是對CNAS-CL02醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則和 CNAS-CL02-A003醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明中有關(guān)臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序進(jìn)行

2、性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所做的具體解釋和指導(dǎo)，供醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室和評審員參考使用。本文件為首次發(fā)布。2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 2 頁 共 11 頁臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南1范圍本指南適用于申請認(rèn)可或已獲認(rèn)可的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室對臨床化學(xué)檢驗(yàn)程序進(jìn)行性能驗(yàn)證，也可供評審員在現(xiàn)場評審過程中參考使用。本指南主要適用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用的臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)方法，其他專業(yè)領(lǐng)域使用的定量檢驗(yàn)程序/方法可參考使用。臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序，也稱臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)方法，在本指南中統(tǒng)一稱為臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序（以下簡稱“檢驗(yàn)程序”）。本指南適用于實(shí)驗(yàn)室采用的經(jīng)

3、確認(rèn)的檢驗(yàn)程序。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本指南的應(yīng)用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，僅該版本適用于本指南。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）適用于本指南。GB/T 26124-2011臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）WS/T 408-2012臨床化學(xué)設(shè)備線性評價指南WS/T 416-2013干擾實(shí)驗(yàn)指南WS/T 420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證WS/T 492-2016臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證3術(shù)語和定義對于本指南，GB/T 29791.1-2013（ISO 18113-1：2009，IDT）中的定義適用。下列術(shù)語和定義適用

4、于本指南。3.1可報告范圍 reportable range體外診斷醫(yī)療器械性能特征已被驗(yàn)證的測量區(qū)間。GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：2009 3.46注14總則2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 3 頁 共 11 頁4.1性能驗(yàn)證的時機(jī)4.1.1檢驗(yàn)程序常規(guī)應(yīng)用前。4.1.2任何嚴(yán)重影響檢驗(yàn)程序分析性能的情況發(fā)生后，應(yīng)在檢驗(yàn)程序重新啟用前對受影響的性能進(jìn)行驗(yàn)證。影響檢驗(yàn)程序分析性能的情況包括但不限于：儀器主要部件故障、儀器搬遷、設(shè)施（如純水系統(tǒng)）和環(huán)境的嚴(yán)重失控等。4.1.3常規(guī)使用期間，實(shí)驗(yàn)室

5、可基于檢驗(yàn)程序的穩(wěn)定性，利用日常工作產(chǎn)生的檢驗(yàn)和質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，定期對檢驗(yàn)程序的分析性能進(jìn)行評審，應(yīng)能滿足檢驗(yàn)結(jié)果預(yù)期用途的要求。現(xiàn)用檢驗(yàn)程序的任一要素（儀器、試劑、校準(zhǔn)品等）變更，如試劑升級、儀器更新、校準(zhǔn)品溯源性改變等，應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證。4.2性能驗(yàn)證的參數(shù)臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序的分析性能參數(shù)一般包括：測量正確度、測量精密度（含測量重復(fù)性和測量中間精密度）、測量不確定度、分析特異性（含干擾物）、分析靈敏度、檢出限和定量限、線性區(qū)間（可報告區(qū)間）等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)不同檢驗(yàn)項(xiàng)目的預(yù)期用途，選擇對檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量有重要影響的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。4.3性能驗(yàn)證的判斷標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)臨床需求制定適宜的檢驗(yàn)程序分析性能標(biāo)準(zhǔn)

6、。實(shí)驗(yàn)室制定性能標(biāo)準(zhǔn)時宜考慮相關(guān)制造商或研發(fā)者聲明的標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)、公開發(fā)表的臨床應(yīng)用指南和專家共識等。實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證的結(jié)果應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)室制定的判斷標(biāo)準(zhǔn)。如果性能指標(biāo)的驗(yàn)證結(jié)果不符合實(shí)驗(yàn)室制定的判斷標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)分析原因，糾正后再實(shí)施驗(yàn)證。注：如果驗(yàn)證結(jié)果符合制造商或研發(fā)者聲明的性能指標(biāo)，但不滿足實(shí)驗(yàn)室制定的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果不可接受。5實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備5.1人員實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)熟悉方法原理與日常操作，包括樣本處理、校準(zhǔn)、維護(hù)程序、質(zhì)量控制等，確保檢測系統(tǒng)工作狀態(tài)正常。對于操作較簡單的檢測程序或儀器，建議操作人員的熟悉過程為 13天。對于操作較復(fù)雜的檢測程序或儀器，建議操作人員的熟悉

7、過程更長，如35天。2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 4 頁 共 11 頁5.2驗(yàn)證方案負(fù)責(zé)實(shí)施性能驗(yàn)證的人員應(yīng)了解驗(yàn)證方案，制定驗(yàn)證計(jì)劃，并組織實(shí)施。5.3儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)相關(guān)分析儀器及輔助設(shè)備的性能指標(biāo)（如加樣精密度、攜帶污染等）應(yīng)與標(biāo)稱值相符。5.4試劑和校準(zhǔn)品除特殊要求外，驗(yàn)證過程宜使用同一批號的試劑和校準(zhǔn)品。5.5質(zhì)量控制驗(yàn)證過程中應(yīng)使用適宜的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。6性能驗(yàn)證要求6.1正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室可采用偏倚評估、回收試驗(yàn)、與參考方法比對等方式進(jìn)行正確度的驗(yàn)證。6.1.1偏倚評估6.1.1.1樣本按照如下優(yōu)先順

8、序選用具有互換性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或基質(zhì)與待測樣本相類似的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：1)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM），包括國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如GBW）、國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如WHO、IFCC）、CNAS認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)者（RMP）提供的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、與我國簽署互認(rèn)協(xié)議的其他國家計(jì)量機(jī)構(gòu)提供的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如NIST、JSCC）等；2)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（RM），如廠商提供的工作標(biāo)準(zhǔn)品；3)正確度控制品；4)正確度驗(yàn)證室間質(zhì)評樣本，如CNAS認(rèn)可的PTP提供的正確度驗(yàn)證樣本。宜根據(jù)測量區(qū)間選用至少2個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本。6.1.1.2驗(yàn)證方法每個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本至少每天重復(fù)測定2次，連續(xù)測定5天，記錄檢測結(jié)果，計(jì)算全部檢測結(jié)果的均值

9、，并按公式（1）計(jì)算偏倚。2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 5 頁 共 11 頁偏倚 =結(jié)果均值 參考值(1)6.1.2回收試驗(yàn)6.1.2.1樣本臨床樣本（基礎(chǔ)樣本）和被測物標(biāo)準(zhǔn)品。6.1.2.2樣本配制通過稱重法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，在臨床基礎(chǔ)樣本中加入不同體積標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液體積應(yīng)少于總體積的 10%），制備至少 2個水平的樣本（樣本終濃度在測量區(qū)間內(nèi)）。6.1.2.3驗(yàn)證方法每個樣本重復(fù)測定3次或以上，計(jì)算均值濃度，按公式（2）計(jì)算回收率。R C (V0 V ) C0 V0100%V C S（2）式中： R回收率；V加入

10、標(biāo)準(zhǔn)液體積；V0基礎(chǔ)樣本的體積；C基礎(chǔ)樣本加入標(biāo)準(zhǔn)液后的測定結(jié)果（均值）；C0基礎(chǔ)樣本的測定結(jié)果；CS標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。6.1.3與參考方法比對6.1.3.1樣本適宜的臨床樣本，不少于8份，被測物濃度在測量區(qū)間內(nèi)均勻分布，并關(guān)注醫(yī)學(xué)決定水平。6.1.3.2參考方法公認(rèn)的參考方法，如CNAS認(rèn)可的參考實(shí)驗(yàn)室使用的參考方法。6.1.3.3驗(yàn)證方法按照制造商說明書或作業(yè)指導(dǎo)書規(guī)定的方法對實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行校準(zhǔn)/校準(zhǔn)驗(yàn)證，宜在相同時段內(nèi)完成對同一樣本的兩種方法平行檢測，每份樣本每個檢測方法重復(fù)檢測3次，計(jì)算每份樣本兩種方法檢測結(jié)果的均值，并按照公式（1）計(jì)算偏倚。2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年

11、 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 6 頁 共 11 頁6.2可比性驗(yàn)證當(dāng)實(shí)驗(yàn)室無法開展正確度驗(yàn)證時，可通過參加能力驗(yàn)證、比對試驗(yàn)等途徑，證明其測量結(jié)果與同類實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的一致性。如與 CNAS認(rèn)可的 PTP（或可提供靶值溯源性證明材料的PTP）提供的PT項(xiàng)目結(jié)果進(jìn)行比對，或與CNAS認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室使用的經(jīng)性能驗(yàn)證符合要求的在用檢測程序進(jìn)行比對。6.2.1樣本患者/受試者樣本不少于20份，被測物濃度、活性等在測量區(qū)間內(nèi)均勻分布，并關(guān)注醫(yī)學(xué)決定水平。使用PT樣本時應(yīng)不少于5份。6.2.2參比系統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)證分析性能符合預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)，日常室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評/能力驗(yàn)證合格的檢測系統(tǒng)。優(yōu)先選

12、用符合以上要求的CNAS認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室的檢測系統(tǒng)。6.2.3驗(yàn)證程序按照WS/T492-2016規(guī)定的方法進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)均值與參比系統(tǒng)均值的差異在可接受范圍內(nèi)。檢測PT樣本時，每個樣本應(yīng)重復(fù)測定不少于3次。6.3精密度驗(yàn)證精密度驗(yàn)證應(yīng)包括重復(fù)性和中間精密度。6.3.1樣本可采用新鮮或凍存的樣本。當(dāng)樣本中待測物不穩(wěn)定或樣本不易得到時，也可考慮使用基質(zhì)與實(shí)際待檢樣本相似的樣本，如質(zhì)控品。應(yīng)至少評估2個水平樣本的不精密度。當(dāng)2個水平樣本的不精密度有顯著差異時，建議增加為3個水平。所選樣本的被測物水平應(yīng)在測量區(qū)間內(nèi)，適宜時，至少有1個樣本的被測物水平在醫(yī)學(xué)決定水平左右。注1：通常較高值樣本的不精密度較

13、小，較低值樣本的不精密度偏大。對低值有臨床意義的檢測項(xiàng)目，宜評估有判斷價值的低水平樣本的不精密度。注2：如檢測結(jié)果沒有明確的醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度，再根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的特點(diǎn)在測量區(qū)間內(nèi)選擇另一個濃度。注3：如與廠商或文獻(xiàn)報導(dǎo)的不精密度比較，所選樣本水平宜與被比較的樣本水平接近。2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 7 頁 共 11 頁6.3.2重復(fù)性驗(yàn)證6.3.2.1試劑和校準(zhǔn)品應(yīng)使用同一批號的試劑和校準(zhǔn)品，如適用，只進(jìn)行一次校準(zhǔn)。6.3.2.2驗(yàn)證方法對樣本進(jìn)行至少10次重復(fù)測定，計(jì)算均值、SD和CV。6

14、.3.2.3質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)至少檢測一個質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控結(jié)果失控時，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)以取得全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。6.3.2.4數(shù)據(jù)收集在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中的離群值。任何結(jié)果與均值的差值（離均差）超過4SD時，可認(rèn)為是離群值。進(jìn)行重復(fù)性評估實(shí)驗(yàn)時，若離群值數(shù)量1，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致，解決問題后再進(jìn)行新的評估實(shí)驗(yàn)。6.3.2.5數(shù)據(jù)分析依據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。6.3.3同時驗(yàn)證重復(fù)性和中間精密度6.3.3.1驗(yàn)證方法每天檢測 1個分析批，每批檢測 2個水平的樣本，每個樣本重復(fù)檢測 35次，連續(xù)檢測5天。在每一批次測量中，應(yīng)同時測量質(zhì)控品。

15、6.3.3.2數(shù)據(jù)收集在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，可參考WS/T 492-2016，檢查數(shù)據(jù)中由偶然誤差引起的離群值。6.3.3.3數(shù)據(jù)分析 =1 1()2批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差批間方差= （3）（4）1)2 = =1( )212實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差1 = 12 +（5）2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 8 頁 共 11 頁式中： D實(shí)驗(yàn)天數(shù)n每天重復(fù)次數(shù)xdi第d天第i次重復(fù)結(jié)果d天所有結(jié)果的均值所有結(jié)果的均值6.4線性區(qū)間驗(yàn)證6.4.1樣本樣本基質(zhì)應(yīng)與待檢臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含

16、有某些特定藥物的樣本。在已知線性區(qū)間內(nèi)選擇57個濃度水平，應(yīng)覆蓋定量限（低限和高限）。6.4.2樣本準(zhǔn)備可將高濃度樣本與低濃度樣本按預(yù)定比例進(jìn)行稀釋得到系列樣本。如果高/低濃度樣本的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個血清的相對濃度。對于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)（如 1、2、3、4與 5）代表連續(xù)樣本。進(jìn)行數(shù)據(jù)處理時，可用樣本號代替濃度值。示例：下表中描述的樣本制備過程是按照等濃度間隔的設(shè)計(jì)進(jìn)行的，每個濃度水平的樣本量為1.00ml。表：5個濃度水平的樣本制備樣本號12345低濃度血清(ml)1.000.000.750.250.500.500.250.750.001.00高濃度血清(m

17、l)6.4.3驗(yàn)證方法每個濃度水平的樣本重復(fù)測定 34次。所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測定，最好在1天之內(nèi)完成。6.4.4數(shù)據(jù)分析分別計(jì)算每個樣本檢測結(jié)果的均值，排除離群值。6.4.5多項(xiàng)回歸分析2019 年 02 月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 9 頁 共 11 頁對數(shù)據(jù)組進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析，得到一階、二階或三階多項(xiàng)式。一階多項(xiàng)式為直線，二階多項(xiàng)式表示上升曲線或下降曲線，三階多項(xiàng)式表示S形曲線（在測量范圍兩端具有明顯的非線性）。多項(xiàng)式方程如下：階數(shù)一階多項(xiàng)式回歸自由度（Rdf）Y = a + b1X234二階Y = a

18、 + b1X + b2XY = a + b1X + b2X22三階+ b3X36.4.6線性檢驗(yàn)多元回歸方程中以 bi表示的系數(shù)為回歸系數(shù)。在二階與三階方程中，b2與b3為非線性系數(shù)。對回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)就是對每個非線性系數(shù)作t檢驗(yàn)，判斷非線性系數(shù)與0是否有顯著性差異。b1不反映非線性，故不對其進(jìn)行檢驗(yàn)。對b2與b3的檢驗(yàn)方法可參考WS/T 408-2012，5.2.2。6.4.7判斷標(biāo)準(zhǔn)線性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為一階方程式為線性，檢測樣本的最低值和最高值之間為線性區(qū)間，應(yīng)滿足4.3的要求。6.5可報告范圍驗(yàn)證定量分析方法的可報告范圍是臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)出檢驗(yàn)報告的依據(jù)之一，可報告范圍的驗(yàn)證包括可報告低限

19、（定量下限）與可報告高限（定量上限樣本最大稀釋倍數(shù)）。6.5.1樣本宜選擇與待測樣本具有相同基質(zhì)的樣本。6.5.2樣本準(zhǔn)備以血清樣本為例。低值樣本準(zhǔn)備：將待測樣本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物濃度水平較低）或 5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進(jìn)行稀釋，產(chǎn)生接近于方法測量區(qū)間低限（定量下限）濃度水平的樣本，通常為 35個濃度水平，濃度間隔應(yīng)小于測量區(qū)間低限的20%。高值樣本準(zhǔn)備：使用混合血清或 5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本（必要時可添加被分析物，并計(jì)算出理論值）進(jìn)行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用3個高2019 年 02

20、月 15 日發(fā)布2019 年 02 月 15 日實(shí)施 CNAS-GL037:2019第 10 頁 共 11 頁濃度樣本，稀釋倍數(shù)應(yīng)為方法性能標(biāo)明的最大稀釋倍數(shù)并適當(dāng)增加或減小稀釋比例。6.5.3驗(yàn)證方法在一次運(yùn)行中將每個低值樣本重復(fù)測定510次，每個高值樣本重復(fù)測定3次。6.5.4數(shù)據(jù)分析分別計(jì)算每個低值樣本的均值、SD、CV值。對高值樣本，計(jì)算乘以稀釋倍數(shù)后的還原濃度和相對偏差。6.5.5可報告范圍的確定6.5.5.1可報告范圍低限（定量下限）以方法性能標(biāo)示的總誤差或不確定度為可接受界值，從低值樣本結(jié)果數(shù)據(jù)中選取總誤差或不確定度等于或小于預(yù)期值的最低濃度水平作為可報告范圍低限。部分檢驗(yàn)項(xiàng)目，如促甲狀腺激素（TSH）、肌鈣蛋白（TnI），在低濃度水平具有重要臨床意義，在驗(yàn)證可報告范圍低限（定量下限）時，應(yīng)特別關(guān)注其結(jié)果與預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)的符合性。6.5.5.2可報告范圍高限選取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法預(yù)期偏倚值時的最大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍數(shù)，測量區(qū)間的高限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報告范圍的高限?？蓤蟾娣秶呦薜拇_定應(yīng)考慮臨床需求。注：超出可報告范圍時，實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果不能滿足其預(yù)期總誤差或不確定度的要求。6.6分