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文檔簡介

1、實驗十二 氨基酸的薄層層析7/20/20221一、實驗目的 掌握氨基酸的薄層層析的方法和原理，學會分析未知樣品的氨基酸成分。二、原理 濾紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析，濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機溶劑為流動相。有機相流經(jīng)固定相支持物時，與固定相之間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。溶質(zhì)在濾紙上的移動速度用Rf值表示： Rf 物質(zhì)結(jié)構(gòu)、溶劑系統(tǒng)的物質(zhì)組成等因素都會影響Rf值。 原點到層析斑點中心的距離原點到溶劑前沿的距離7/20/20222三、試劑和器材 1. 試劑 0.5%茚三酮溶液、標準氨基酸溶液 溶劑系統(tǒng)： 正丁醇88甲酸水(15：3：2，V/V)

2、 2. 器材 層析缸、毛細管、電吹風四、操作步驟 如下頁所示。7/20/20223操作流程：點樣層析顯色濾紙一邊1.5厘米處劃線，在線上等距離劃6個點毛細管吸樣品（約2cm高）點樣，直徑小于0.5cm，電吹風吹干，重復一次。干燥后將濾紙卷成圓形，縫合濾紙，注意兩邊緣不能接觸。酸層析液放入培養(yǎng)皿中，將濾紙垂直放置在培養(yǎng)皿中，蓋緊缸蓋。 層析紙2/3-3/4處取出濾紙，電吹風吹干，劃前沿線。噴霧器均勻噴上茚三酮溶液，電吹風熱風吹干至看到AA彩色斑點。用鉛筆將圖譜上的斑點圈出，測Rf相關(guān)值。7/20/20224五、注意事項 1. 為了防止濾紙被手上的汗液污染，應盡量在操作時帶手套。 2. 重復點樣時可用吹風機的冷風吹干樣品，噴了茚三酮后的顯色則要用熱風吹干濾紙。六、思考題 1、如何用紙層析法對氨基酸進行定性和定量的測定？ 2、紙

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