1、實驗一 葡萄球菌屬Staphylococcus 溫州醫科大學附屬第一醫院 醫學檢驗中心 微生物室 徐春泉 生物安全1、進入實驗室必須穿白大褂，離室時脫下反折；2、長發的同學，一定要把頭發扎起來，不能散發；3、不必要物品勿帶入實驗室，不允許帶課本到微生物實驗室,不得將實驗室內任何物品（特別是菌種）帶出室外。4、實驗室內禁止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨便走動。5、需培養的物品應做好標記放在指定地點。用過的有菌器材必須放在消毒缸內，小心處理傳染材料、培養物和污染的物品。6、避免任何有菌材料的濺出，若不甚污染工作臺、手、眼、衣服和地面等處，應立即報告老師及時適當處理。7、實驗完畢后物歸原處，并清潔

2、桌面；肥皂洗手，關閉水、電、和門窗方可離開實驗室。回顧復習革蘭染色的步驟細菌的分離培養 革蘭染色法（Gram染色）染液組成： 結晶紫染液、盧戈碘液、95乙醇、稀釋石炭酸復紅染色方法：結晶紫 初染盧戈碘液 媒染95乙醇 脫色稀釋石炭酸復紅 復染1分鐘30S1min1分鐘30S平板細菌接種的基本程序滅菌接種環沾取標本接種滅菌接種環殺滅接種環沾染的細菌，以免污染標本殺滅接種環沾染的細菌，以免污染環境 分區劃線法 用接種環先將標本涂布在平板第一區并作數次劃線，再在二、三、四區依次用接種環劃線。每劃一個區域，應將接種環燒灼一次，待冷卻后再劃下一區域。每一區域應接觸上一區域的接種線3-5次，使菌量逐漸減少

3、，以形成單個菌落。回顧復習1.葡萄球菌屬的主要生物學特性2.葡萄球菌屬內主要菌種的鑒定和鑒別3.主要鑒定試驗的方法和原理 觸酶試驗 血漿凝固酶試驗 DNA酶試驗 葡萄糖氧化發酵試驗 新生霉素敏感試驗 1)觸酶試驗:2)血漿凝固酶:判斷標準(葡萄球菌屬)：在短時間內(10s)出現大量、洶涌氣泡者為陽性。出現顆粒狀凝集為陽性。3)葡萄糖OF試驗：4)DNA酶試驗：左側為產堿型中間為發酵型右側為氧化型1mol/L鹽酸覆蓋平板，5分鐘后觀察結果，菌落周圍出現透明環者為陽性。5)新生霉素敏感試驗:新生霉素敏感試驗(S16mm)實驗目的 了解葡萄球菌的形態及染色特性.熟悉葡萄球菌的培養及生化特性.掌握葡萄

4、球菌與微球菌的區別要點.學習金黃色葡萄球菌的鑒定及其與表皮,腐生葡萄球菌的區別 實驗器材 菌種：每組1套 金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 微球菌培養基： 平板：血平板,普通營養瓊脂平板,M-H平板,DNA酶瓊脂平板 生化反應管：葡萄糖OF管,甘露醇氧化發酵管 試劑：新生霉素紙片(NV5ug/片),新鮮兔血漿,革蘭染液,1N HCl 實驗內容一、形態與染色特點(顯微鏡：4B211)二、分離培養 普通營養瓊脂平板(四種菌，1只/每人） 血瓊脂平板(四種菌，1只/每人） 三、生化反應和其他鑒定試驗 葡萄糖氧化發酵試驗(四種菌，1份/每人） 甘露醇氧化發酵試驗(四種菌，1份/每人） DNA

5、酶試驗(四種菌，2只/每組） 新生霉素敏感試驗(四種菌，1只/每組） 觸酶試驗(四種菌） 血漿凝固酶試驗 玻片法注：玻片、平板瓊脂面、玻璃試管做好標記！ 有菌意識，無菌操作！注意酒精量！ 實驗報告書寫（兩份）1.實驗題目 2.實驗目的3.實驗原理 4.實驗材料 （菌種、培養基、試劑）5.實驗方法 （步驟） 6.實驗結果（現象、結果：表格用三線表描述） 7.結果分析（實驗體會，總結，與理論不符分析）8.思考題實驗結果記錄方法(三線表示例)*實驗結果記錄注:菌名必須寫全稱(或中或英)結果觀察1、血平板、MH平板： 觀察，記錄菌落的形態、大小、表面、邊緣、色素、透明度、出現單個菌落區域及多少；并用量尺測量新生霉素抑菌圈直徑。(S16mm，R16mm.)2、 DNA瓊脂平板：取出滴加1層1N的HCl，5分鐘后觀察記錄結果。菌落周圍出現透明環為陽性。3、葡萄糖OF,甘露醇OF管： 發酵型：不加石蠟管、加石蠟管均變黃色 氧化型：不加石蠟管變黃色，加石蠟管不變色（紫色） 產堿型：不加石蠟管及加石蠟管均不變色觸酶試驗取營養瓊脂平板上的單個菌落于玻片上，再滴加1d3%過氧化氫酶并記錄結果。(注意順序!)判斷標準(葡萄球菌屬)：在短時間內(10s)出現大量、洶涌氣泡者為陽性。取生理鹽水各一滴于玻片的兩端，挑取細菌與上述生理鹽水中制成菌懸液，在其中一測加入新鮮兔血漿并混勻，若血漿出現顆