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文檔簡介
1、區分沙門氏菌和金黃色葡萄球菌1目的:用革蘭氏染色法區分金黃色葡萄球和沙門氏菌2原理: 通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。3藥品
2、:金黃色葡萄球菌,沙門氏菌;草酸銨結晶紫,番紅水溶液,碘液,95%乙醇, 儀器: 載玻片,接種環,酒精燈,打火機,吸水紙,顯微鏡,香柏油,擦鏡紙,廢水缸4操作步驟:1)涂片:取滅過菌的載玻片于實驗臺上,把沙門氏菌和金黃色葡萄球菌分別涂在兩個載玻片的中央,用燒紅冷卻后的接種環將液滴涂布成一均勻的薄層,涂布面不宜過大52)干燥:將標本面向上,手持載玻片一端的兩側,小心地在酒精燈上高處微微加熱,使水分蒸發,但切勿緊靠火焰或加熱時間過長,以防標本烤枯而變形63) 固定:固定常常利用高溫,手持載玻片的一端,標本向上,在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次,共約2-3秒種,并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚,不
3、覺過燙為宜(不超過60),放置待冷后,進行染色。74) 初染:在涂片薄膜上滴加草酸銨結晶紫1-2滴,使染色液覆蓋涂片,流水沖洗媒染:將碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆蓋涂片,流水沖洗吸 脫色:斜置載玻片,滴加95%乙醇脫色,至流出的乙醇不現紫色為止,大約需時20-30S,隨即水洗8 復染:在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min。 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止9 5)干燥、觀察:用吸水紙吸掉水滴,待標本片干后置顯微鏡下,用低倍鏡觀察,發現目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油鏡觀察沙門氏菌和金黃色葡萄球的形態及顏色。10結果:金黃色葡萄球菌被染成紫色為革蘭陽性菌,沙門氏菌被染成紅色為革蘭陰性菌11注意事項:1選用活躍生長期菌種染色,老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。2.涂片不宜過厚,
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