1、Designed by Danny 葛根芩連湯抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）增殖的初步研究學生姓名：王蕾學生姓名：王蕾學號：學號：222012602033235指導老師：宋振輝指導老師：宋振輝選題依據、研究現狀選題依據、研究現狀中藥制備及細胞活性測定中藥制備及細胞活性測定工作進展及安排工作進展及安排研究意義研究內容研究進度Contents研究意義研究意義1.在抗生素被廣泛應用的今天，病毒性疾病對動物機體健康的危害就上升為所有感染性疾病中最重要的一類。而天然藥物具有許多化學藥物所不具備的優點，而中藥是其中十分重要的組成部分。2.研究表明，中藥復方抗病毒感染臨床應用廣泛，具有療效肯定、不良反應少

2、、價格低廉等特點。3.近年來也有一些關于葛根芩連湯抗病毒的研究，并且也得到證實葛根芩連湯是具有抗病毒的作用的，對許多可引起腹瀉性的疾病有治療作用，但對豬病的研究不多。4.多年來，豬的傳染性胃腸炎（TGE)都對我國的養豬業造成很大的經濟損失（豬傳染性胃腸炎(TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的豬的一種高度接觸性消化道傳染病），并且該疾病至今也沒有找到很好的方法進行防治，因此進行葛根芩連湯抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）增殖的初步研究，以證實葛根芩連湯是否能防治豬傳染性胃腸炎。研究內容（中藥制備）研究內容（中藥制備） 葛根黃芩上四味，以水八升，先煮葛根，減兩升，內諸藥，煮取二升，去滓。

3、黃連 甘草研究內容（細胞活性測定方法）研究內容（細胞活性測定方法）一、細胞病變法（一、細胞病變法（CPECPE） 以CPE（在體外實驗中，通過細胞培養和接種殺細胞性病毒，經過一定時間后，可用顯微鏡觀察到細胞變圓，壞死，從瓶壁脫落等現象，稱之細胞病變作用）為指標，方法簡便，能夠對多數藥物抑制病毒增殖的效果進行測定與評價。一般以加號表示細胞病變程度：（1）細胞病變75%為+研究內容（細胞活性測定方法）研究內容（細胞活性測定方法）二、二、 噻唑藍（噻唑藍（MTTMTT）染色法染色法 MTT可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成紫色不溶性結晶（顆粒）并沉積在細胞內或細胞周圍，而死細胞則無此功能。二甲基

4、亞砜（DMSO）或酸化異丙醇能溶解細胞中的紫色不溶性結晶物，用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光密度值（OD），可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶物形成量與細胞數成正比，因此可用于抗病毒藥物的活性篩選。研究內容（細胞活性測定方法）研究內容（細胞活性測定方法） 三、蝕斑減少法三、蝕斑減少法 實驗證明，將病毒接種于單層培養細胞，數天后固定細胞并染色，因病毒感染而導致變性的細胞不被染色，形成蝕斑（空斑）。蝕斑降低法以此為基礎，利用蝕斑的形成，以接種病毒后，在為添加試驗藥物的培養基上形成的蝕斑數為100%對照，通過計算添加試驗藥物的培養基上形成的蝕斑減少率，來研究試驗藥物的抗病毒活性。通常用于對照的蝕斑數為50100個。超過該范圍，藥物的感受性即降低，且會影響實驗結果。另外蝕斑縮小也是抗病毒活性的指標。因此，蝕斑降低法是一種定量測定法。理論上一個蝕斑代表一個有感染性顆粒。藥物處理后，蝕斑數減少，表示病毒復制受到抑制，子代毒粒產生減少。蝕斑降低法定量準確，結果可靠。用一系列藥物濃度，可得到劑量反應曲線，適用于不同藥物抑制強度的比較。研究進度研究進度2015年年56月做試驗的前期準備，試驗設計，查閱文獻；月做試驗的前期準備，試驗設計，查閱文獻； 2015年911月