1、香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化構成的影響設計者和執行者：陳超 陳小羽 江澤紅 刁燕 杜圣富 孫永珍香榧子油簡介n榧子為紅豆杉科Taxaceae植物榧樹To肼eyagrand括ForteX Lindl的枯燥成熟種子，始載于，歷版中國藥典均收載，具有殺蟲、消積、潤腸、通便之效果。其栽培種類香榧To用eya grandis CVmerriUii是我國特有經濟樹種之一。其種子俗稱香榧子，為我國珍貴的干果，炒熟后香酥甘醇，風味獨特，質量甚佳，營養豐富香榧子油的藥理作用香榧子油香榧子油 。降血脂和降低血清膽固醇作用調理老化的內分泌系統的療效軟化血管，促進血液循環但未見有關香榧子油對預但未見有關香榧子油對預防

2、動脈粥樣硬化構成的實防動脈粥樣硬化構成的實驗研討報道驗研討報道動脈粥樣硬化的發病機制動脈粥樣硬化的發病機制1.脂質的作用：高膽固醇血癥引起內皮功能脂質的作用：高膽固醇血癥引起內皮功能妨礙，妨礙， 通透性添加通透性添加2.內皮損傷：各種要素對動脈內皮的損傷，內皮損傷：各種要素對動脈內皮的損傷，導致動脈壁的慢性炎癥應對，逐漸構成粥導致動脈壁的慢性炎癥應對，逐漸構成粥樣斑塊，是動脈粥樣硬化的始動要素樣斑塊，是動脈粥樣硬化的始動要素 3.巨噬細胞和平滑肌細胞的作用巨噬細胞和平滑肌細胞的作用主要內容：實驗目的實驗目的實驗設計實驗設計 預測結果預測結果 4123實驗假設實驗假設實驗目的：實驗目的：n從血脂

3、從血脂,斑塊面積內膜面積、內膜厚度、內斑塊面積內膜面積、內膜厚度、內膜厚度中膜厚度膜厚度中膜厚度,巨噬細胞和平滑肌源性泡巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞等方面研討香榧子油對實驗性動脈粥沫細胞等方面研討香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化構成的影響樣硬化構成的影響. 研討方面：研討方面：研討香榧子油對研討香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化實驗性動脈粥樣硬化構成的影響構成的影響脂質脂質斑塊面積內膜面積斑塊面積內膜面積、內膜厚度、內膜厚度、內膜厚度中膜厚度內膜厚度中膜厚度巨噬細胞和巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞平滑肌源性泡沫細胞實驗假設：n香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化構成能夠有預防作用 實驗儀器實驗儀器 實驗試劑實驗試

4、劑 實驗方法實驗方法及步驟及步驟 實驗對象實驗對象 M1M2M4M3實驗設計:1實驗儀器:n電子稱，試管，離心管，冰箱，手術器材，一次性塑料注射器，圖像分析儀n島津UV3000型紫外分光光度計，刖一182放射免疫卜計數儀。2實驗試劑：n根底飼料小麥粉根底飼料小麥粉392、玉米粉、玉米粉151、大、大米米105、豆粕、豆粕151、魚粉、魚粉151、酵母、酵母粉，粉，38、魚肝油、魚肝油07及精鹽及精鹽05,高高脂飼料脂飼料(根底飼料根底飼料825、膽固醇、膽固醇20、膽酸、膽酸鈉鈉05、蛋黃粉、蛋黃粉50及豬油及豬油10),香榧子油香榧子油飼料飼料(在高脂飼料的根底上添加香榧子油在高脂飼料的根底

5、上添加香榧子油(自提自提)，其量占飼料的其量占飼料的2)。生理鹽水、蒸餾水、乙醚。生理鹽水、蒸餾水、乙醚。蘇丹蘇丹染液，蘇木素依紅染液，蘇木素依紅(HE)、間苯二酚品紅染、間苯二酚品紅染色色(ET+VG),2戊二醛溶液戊二醛溶液,P0wervision一一Pv6002試劑盒試劑盒3實驗對象：n30只安康家兔4實驗方法和步驟：1.計算斑塊面積內膜面積比計算斑塊面積內膜面積比2.計算內膜厚度中膜厚度比計算內膜厚度中膜厚度比3.計算巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞陽性百分數計算巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞陽性百分數采用采用SPSS80統計軟件進展數據統計軟件進展數據的分析處置的分析處置 1.動物按體重隨

6、機分動物按體重隨機分3組組2.建立高膽同醇飲食并免疫損傷誘建立高膽同醇飲食并免疫損傷誘導動脈粥樣硬化模型導動脈粥樣硬化模型 實驗分組與模型建立實驗分組與模型建立n1.動物按體重隨機分3組，即正常對照組(根底飼料組)、高脂對照組和香榧子油實驗組，每組10只動物。2. 模型組和香榧子油組建立高膽同醇飲食并免疫損傷誘導動脈粥樣硬化模型2高膽固醇飼料每只每日100克喂養，兩周后靜脈注射牛血潔白蛋白250 mgkg(以生理鹽水制成10溶液注射)每周1次，共3次；正常組注射等量生理鹽水，每周1次，共3次。同時香榧子油組予灌胃法給藥香榧子油4 rag(kgd)，相當于75 mgd的l臨床劑量，共12周，正常

7、組和模型組灌等量蒸餾水。每周丈量體重。實驗步驟：1.在實驗分組與模型建立根底上第4、8、12周時取尾血，取血前12小時禁食。2.第12周末取尾血后，乙醚麻醉，剖開胸腔心臟取血。3.所取尾血置于干凈試管中后，2500 rmin離心5 min，取血清分裝于34支15ml塑料尖底離心管中于0.30度冰箱保管，用酶學法測血清TC膽固醇、TG甘油三酯及HLD-C高密度脂蛋白膽固醇。4.處死動物，取自動脈剝離外膜脂肪組織，縱行剖開置于4多聚甲醛中保管。大體標奉行蘇丹染色后攝像圖像分析儀測定斑塊面積和內膜面積，計算斑塊面積內膜面積比。n5.于胸自動脈上段(第4肋問動脈處)和腹自動脈上段(腹腔動脈處)各取材5

8、 mm，常規石蠟包埋，延續切片，制成4 m厚橫截面切片，分別行蘇木素依紅(HE)、間苯二酚品紅染色(ET+VG)染色。將動脈等距分成5點(包括內膜最厚處)，利用圖像分析儀丈量內膜厚度、中膜厚度，計算內膜厚度中膜厚度，最后將兩段組織的目的加以平均。每組取2例動物胸自動脈上段組織放人2戊二醛溶液中固定，掃描和透射電鏡察看超微構造改動。n6.另取4m厚胸自動脈上段組織(第4肋間動脈處)橫截面切片用小鼠抗兔一巨噬細胞單克隆抗體RAM 1 1和小鼠平滑肌細胞單克隆抗體-aelin進展常規免疫組織化學染色，特異性鑒定巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞，采用P0wervision一Pv6002試劑盒，以EnVis

9、ion復合物為二抗，設替代對照(PBS替代一抗)，胞漿內棕黃色顆粒狀產物為陽性標志。采用顯微一微機圖像分析系統計算陽性細胞百分數。用酶學法測血清TC、TG及HLD-C，計算AI香榧子油組的血清香榧子油組的血清TC、TG及及AI比正常組高，比模比正常組高，比模型組低；血清型組低；血清HDL-C比正比正常組低，比模型組高常組低，比模型組高香榧子油對斑塊面積內香榧子油對斑塊面積內膜面積、內膜厚度、內膜膜面積、內膜厚度、內膜厚度中膜厚度都比正常厚度中膜厚度都比正常組大，比模型組小組大，比模型組小香榧子油組斑塊中巨噬細胞香榧子油組斑塊中巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞含量和平滑肌源性泡沫細胞含量比正常組大，

10、比模型組小比正常組大，比模型組小丈量內膜厚度、中膜厚度，計算內膜厚度中膜厚度計算斑塊中巨噬細胞和平滑肌源性泡沫細胞陽性細胞百分數丈量結果丈量結果預測結果預測結果統計學分析數據：n采用SPSS80統計軟件進展數據的分析處置，一切數據均用均數規范差表示，多組間比較用方差分析，兩組間比較用檢驗，P005為差別有顯著性。 四、預測結果:香榧子油對大香榧子油對大鼠鼠TC、TG和和HLD-C的影響的影響 香榧子油對斑塊面積香榧子油對斑塊面積內膜面積、內膜厚內膜面積、內膜厚度、內膜厚度中膜度、內膜厚度中膜厚度的影響厚度的影響 香榧子油對斑塊香榧子油對斑塊部位免疫組化結部位免疫組化結果的影響果的影響 香榧子油

11、對實驗性動脈粥樣硬化構成有預防香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化構成有預防作用作用預期結果預期結果五、參考文獻n1.陳振德等榧屬植物的研討進展國外醫藥植物學分冊，2019，11(4)：150n2.韓琴琴等運用國產酶試劑測定血清膽固醇的方法上海第一醫學院學報，1984，11：181n3.張蚰美,魏欣冰動脈粥樣硬化模型的病理形狀學察看 2019n4.蔡海江,朱敏天,李子行免疫性損傷對家兔實驗性動脈粥樣硬化的影響 1979n6 .Tsukada T，Rosenfeld M，Ross R，etal. Immunocytochemical analysis of cellular components in athemsclerotie lesions：use of monoelonal anlIbodies with the Watanabe and fatfed rabbit Arteriosclerosis，19866：601613n7. Fukumoto Y，Libby P，llabkin E、et m Stabns alt