1、分子遺傳學名詞解釋細胞分裂中期骨架(metaphasescaffold)有絲分裂中期供染色質環附著形成染色體的蛋白網絡結構?利用肝素或硫酸葡萄糖處理中期染色體,去除組蛋白和非組蛋白后,染色體形態不變兩種蛋白(170和135kD)構成中期骨架供DNA環(長1030卩m釣35100kb)所附著？端粒(telomere)真核生物細胞中線狀DNA分子構成的染色體末端結構？端粒DNA一般為順接重復序列，具有富含G的單鏈末端，折疊后與核蛋白(即55和26Kd的端粒蛋白)形成復合體防止染色體末端的融合?重組與降解的發生?端粒DNA中富含G堿基的3末端叫G鏈,其互補鏈為C鏈?衛星DNA(satelliteDN

2、A)可重復數千甚至更高次數的高度重復序列都是一些簡單序列，它們與細胞中其他DNA序列的組成不同，通過氯化銫密度梯度離心可將兩種DNA片段分離開成為DNA主帶的一種附屬帶，通常稱這種DNA為衛星DNA?ACAAACT?ATAAACT和，是著絲粒特異性結合蛋白著絲粒區包含三種衛星DNA，三者高度相似的序列組成分別為ACAAATT?衛星DNA不轉錄，但能為DNA聚合酶識別而迅速復制有關的結構區域;它不能與組蛋白結合，但與多種蛋白質結合成動粒(kinetochore)?染色體RNA(chromosomalRNA):染色質中與組蛋白相復合的RNA，其主鏈長為4060核苷酸，二氫嘧啶含量高達11.3%，是

3、獨特的，有基因調控和催化作用的RNA?非組蛋白(nonhistoneprotein,NHP):是細胞核中另一類具有組織特異性？與DNA結合并對轉錄作用專一性很重要的蛋白質?它包括核膜酸性蛋白(8%)?核仁酸性蛋白(19%)?不均一核蛋白(hnRNP,30%)?染色質非組蛋白(40%)以及組織專一性蛋白(10%)?它們大多溶于堿，一部分可溶于酸，種類多達500余種，分子量15100KD?主要在細胞中期骨架構成?維持染色質與染色體的空間結構以及轉錄調控中起作用?復制原點(replicationorigin):真核生物染色體上多個復制泡所具有的固定的起點？真核生物的復制原點無固定的DNA序列模式，但

4、大多包含一個富含AT的序列和一個可能的特異性蛋白結合位點?2. 復制元(replicon):復制單元，即一個復制原點所起始的復制過程所進行的范圍，相當于一條新合成的DNA片段?復制元的大小不均一，從13kb900kb不等?不同物種或同一物種的不同生長時期，復制元的大小也不相同?植物:雙子葉2030卩m(700100kb)單子葉520卩m(1770kb；哺乳動物50100kb?與DNA環相當?3.復制元簇(repliconcluster):鄰近的幾個復制元組成的結構單元(2250個)？不同復制元簇復制啟始時間有先后，而同一復制元簇中復制元基本同步?端粒酶(telomerase):由RNA和蛋白質

5、構成的只參與端粒DNA合成的核蛋白復合體？即一種以酶內RAN為模板的逆轉錄酶?端粒酶是一種能將真核生物染色體末端DNA加以延伸的酶，它是一種核酸蛋白質復合物?目前認為端粒酶是由端粒酶RNA組分，端粒酶相關蛋白和端粒反轉錄酶催化亞基三部分組成的蛋白質復合物?端粒酶結構中的核酸部分為RNA，又分為模板區與非模板區，模板區決定所合成端粒的特異性，非模板區具有酶與底物的結合位點?模板區的長度一般為端粒重復序列長度的11.5倍，不同物種端粒酶RNA部分的核苷酸組成存在差異?TATA框(Goldberg-Hongnessbox)由RNA聚合酶II識別的一段富含AT堿基的高度保守的DNA序列(TATAA/T

6、AA/T)?其是大多真核生物蛋白質基因的一種定位因子，控制轉錄機器在其下游30bp處啟始RNA的合成?啟始子(initiator，Inr):在無TATA框時，精確啟始轉錄的DNA序列?鼠類TdT基因Inr為-6GCCCTCATTCTGGAGAC+11帽子位點(capsite)就是轉錄的啟始位點，其堿基大多為A(mRNA的5末端)？例如人體血紅蛋白基因的帽子位點序列為ACATTTG?CAAT框(CAATbox)位于轉錄起點上游-75附近的另一種結構保守序列(GGC/TCAATCT)?其普遍存在，可能控制著轉錄啟始的頻率?其他上游啟動子成員：CCPuCCC(SV40?糖蛋白D基因等);ATTTGC

7、AT(免疫球蛋白基因家族)；熱激蛋白基因?座位控制區(locuscontrolregion,LCR)座位控制區又稱顯性控制區(dominantcontrolregion)或座位活化區(locusactivatingregion)，具有穩定開放染色質，使其鄰近的基因或基因簇不依賴于所在基因組中的位置而獨立轉錄的作用?NTS(NontranscribedSpacer):所謂不轉錄的間隔區是RNA聚合酶I啟動子和終止子(GACTTGC)的所在區域?瘋牛病(MadCowDisease最早在1985年4月英國的阿什福特農場出現可疑病例，1986年11月對病牛作了病理組織學檢查，發現腦組織被侵蝕產生許多海

8、綿樣小孔，定名為牛海綿狀腦病(BovineSpongiformEncephalopathy,BSE),并確診此病為牛的一種新病，在1987年由Wells等首次報道?朊病毒病,也稱傳染性海綿狀腦病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSEs),包括克-雅氏疾病？庫魯病(Kuru)?瘋牛病？羊的搔癢癥等，在臨床上表現為神經紊亂？腦部出現海綿？淀粉狀沉淀，以及神經元丟失？1991年Prusiner發現，此類疾病是由人和動物自身體內常見的朊病毒蛋白(prionprotein)病原體引起，并沒有核酸參與?RNAi(RNAinterference)1998年F

9、ire在線蟲(Caenorhabditiselegans)中發現，隨后證實是生物界的普遍現象?siRNA(smallinerferingRNA)由生物體內的雙鏈RNA斷裂而成(21-25核苷酸)，在胞質中與互補mRNA結合，并降解之;在核中使轉錄基因中的同源DNA序列甲基化而觸發后成的基因沉默(epigeneticgenesilencing)?即轉錄后基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing)或RNA沉默?RNAi是后成的?遺傳的基因表達控制模式，對性狀的遺傳變異及發育進程起著重要作用，但不涉及基因突變，因而稱之為后成遺傳學(epigenetics)或表觀遺傳

10、學基因表達型式改變的規律?SSR(SimpleSequenceRepeats,簡單重復序列)又稱微衛星DNA(MicrosatelliteDNA),是Weber(1990)在報道人類DNA存在短小重復序列時給出的名稱？由2-5個核苷酸為重復單位串聯而成長達幾十個核苷酸的序列?具有多態性高?分布于整個基因組重復性好?呈共顯性等特點?SSR技術操作程序為：(1)建立生物基因組DNA的質粒文庫(2)設計并合成寡聚核苷酸探針，以菌落原位雜交篩選重組克隆(3)對陽性克隆的DNA插入序列測序?(4)根據SSR兩側保守序列設計和合成引物?(5)以基因組DNA為模板，用這些合成引物進行PCR擴增反應擴增時，摻

11、入同位素對擴增產物進行標記?(6)變性測序凝膠電泳分離?凝膠干制后，進行放射自顯影?(7)根據X-光片分析樣本間的多態性，或在擴增時不加同位素，擴增產物在高濃度瓊脂糖凝膠或非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，硝酸銀或EB染色后直接觀察?AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,擴增片斷長度多態性)是1993年由荷蘭科學家Zabeau和Vos.Pieter發展起來的一種檢測DNA多態性的一種新技術?95年以前因受專利保護，發表的論文不多?但實際上已有很多人從事這方面的研究?AFLP基本技術包括：(1)對生物基因組DNA進行雙酶切，以產生比較小的DNA片斷;(2)將

12、酶切形成的大小不等的隨機限制性片斷兩端連接上特定的接頭(oligonucleotideadapters寡聚核苷酸接頭)，形成擴增反應的模板;(3)通過接頭序列和AFLP引物3末端的特異核苷酸序列的識別，對限制性片斷進行選擇性擴增？(4)5-6%變性聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳分離擴增產物，形成DNA指紋?(5)凝膠經干燥放射自顯影進行結果分析？三?大豆對SMV抗病基因分子標記研究抗SMV大豆種質資源的篩選1. 大豆對SMV抗性的遺傳研究抗感組合配置與遺傳分析2. 抗病基因的分子標記?材料準備及DNA提取?等基因池(isogenicpools制備?RAPD反應?RAPD標記與Ra和Rc的連鎖分

13、析?RAPD分子標記OPL072000在親本和部分F2代抗感單株上的表現?OPL-072000和OPW-O5660的克隆?測序結果?SCAR標記引物設計與擴增反應體系?共顯性標記SCW-05在親本？F1?F2代以及抗感大豆品種中的表現四?1.基因克隆的基本程序1?創建分離群體2?構建分子遺傳圖譜3?尋找標記精細定位4?構建基因文庫(cDNA,Cosmid?BAC?YAC等基因組文庫)5?篩庫獲得陽性克隆6?構建同源重疊連鎖群(Contig)7?染色體步移逼近(ChromosomeWalking)8?DNA序列分析(Sequencing)9?植物轉化載體的構建10?遺傳轉化功能檢測11?遺傳穩定性分析表4.四種常用分子標記的比較特征RFLPRAPDSSRAFLP分布普遍存在普遍存在普遍存在普遍存在遺傳穩定共顯性穩定大多數顯性穩定共顯性穩定顯性多態性程度中等高高很高等位基