1、園藝植物育種學(xué)2實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)適用專業(yè)：園藝齊齊哈爾大學(xué)2014年4月實(shí)驗(yàn)一園藝植物花器構(gòu)造及開(kāi)花習(xí)性調(diào)查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .花是有性雜交的主要材料，了解不同園藝植物開(kāi)花習(xí)性的特點(diǎn)，是準(zhǔn)確選擇雜交用的花朵和決定采集花粉，去雄、授粉時(shí)間的主要依據(jù)。2 .掌握?qǐng)@藝植物花開(kāi)花習(xí)性的主要觀察項(xiàng)目和觀察方法。二、實(shí)驗(yàn)原理不同園藝植物因自身的發(fā)育特點(diǎn)不同其花器構(gòu)造及開(kāi)花習(xí)性也不相同。此項(xiàng)調(diào)查可作為識(shí)別品種，制定雜交計(jì)劃的主要依據(jù)，如準(zhǔn)確選擇雜交用的花朵和決定采集花粉，去雄、授粉時(shí)間。主要包括花期、花型、花性、花梗、花托、萼片、花朵、雄蕊以及雌蕊等調(diào)查項(xiàng)目，如花梗的長(zhǎng)短、花托的形狀、萼筒的顏色和形狀、花瓣的顏色、

2、大小、形狀、雄蕊的數(shù)量和形狀以及雌蕊的數(shù)量和形狀等，同時(shí)還可以根據(jù)花器特征來(lái)確定其傳媒類型。三、材料每人選取3種不同園藝植物（連翹、榆葉梅、黃刺玫、丁香、繡線菊、番茄、李、蘋果等），每種園藝植物選取木本植物2株，草本植物要選取5株作為觀察材料。四、用具放大鏡、銀子、卷尺、記錄本等。五、方法步驟觀察項(xiàng)目主要包括：1 .園藝植物種類、科屬及觀測(cè)地點(diǎn)2 .花芽的類型純花芽、混合花芽純花芽?jī)?nèi)只有花器官，芽萌發(fā)后，只開(kāi)花結(jié)果，不抽生枝條，多數(shù)花卉屬于此類；混合花芽在芽?jī)?nèi)除有花器官外，還存在枝葉或葉的原始體，開(kāi)花的同時(shí)可抽生枝條，如懸鈴木等。統(tǒng)計(jì)花芽的類型。3 .花型或花序類型包括單瓣、重瓣，大花、小花等

3、?；ㄐ偷谋憩F(xiàn)對(duì)于植物的傳粉和結(jié)實(shí)會(huì)產(chǎn)生影響。統(tǒng)計(jì)花型，指出是單花還是花序。4 .花性（性型）：包括雌雄異株、雌雄同株異花和雌雄同花（兩性花）。有些植物在一個(gè)植株上既有兩性花又有單性花；還有些植物盡管具有兩性花，但表現(xiàn)為雄蕊或雌蕊退化。統(tǒng)計(jì)花性（性型）。5 .花瓣：花瓣的顏色、形態(tài)等表現(xiàn)往往與植物的傳粉方式和授粉習(xí)性有較大的關(guān)系。如開(kāi)花時(shí)花瓣緊閉者（金魚(yú)草等）一般采用自花授粉。統(tǒng)計(jì)花瓣的顏色、形態(tài)、花瓣數(shù)目、花冠直徑、花蕾顏色。6 .雄蕊和雌蕊：雄性和雌蕊的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、著生方式與植物的授粉特點(diǎn)、結(jié)實(shí)能力等有很大的關(guān)系，觀察記錄雄性和雌蕊的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、雄蕊和雌蕊的顏色、著生方式測(cè)定花柱長(zhǎng)度、花

4、絲長(zhǎng)度、花絲數(shù)目、花柱數(shù)目、花柱是否開(kāi)裂（幾裂）。7 .花梗：花梗長(zhǎng)度、花梗顏色、等。再隨機(jī)選取5株未開(kāi)放的花序進(jìn)行標(biāo)記，觀察開(kāi)放順序和計(jì)算開(kāi)花天數(shù)（包括單花時(shí)間、全花序時(shí)間、全株時(shí)間）,并計(jì)算花序花朵數(shù)的平均值。同時(shí)記錄叢現(xiàn)蕾期到盛花期的花藥變化、子房狀態(tài)、胚囊及散粉孔變化等。8 .花期：開(kāi)花物候期調(diào)查不同的園藝植物其開(kāi)花時(shí)間差異較大，如梅花、玉蘭、連翹等在早春開(kāi)花，懸鈴木、牡丹、芍藥等春季開(kāi)花，荷花夏天開(kāi)，菊花秋天開(kāi)，蠟梅則怒放于冬季，而月季、矮牽牛、四季桂等一年四季均能開(kāi)花。止匕外，不同品種的始花期、盛花期、終花期及整個(gè)開(kāi)花過(guò)程的長(zhǎng)短也不相同。通過(guò)觀察明確不同植物及品種的花期和開(kāi)花規(guī)律對(duì)

5、于人工雜交具有重要的指導(dǎo)意義。1）觀察開(kāi)放順序和計(jì)算開(kāi)花天數(shù)（包括單花時(shí)間、全花序時(shí)間、全株時(shí)間）2）每組同學(xué)吸輪流每天對(duì)植株進(jìn)行觀察，記載當(dāng)天開(kāi)放的花朵數(shù)以及天氣和溫度。3）統(tǒng)計(jì)初花期（花開(kāi)放約5%）、盛花期（花開(kāi)放25-75%）、末花期（部分花朵脫落）4）在盛花期，從早上7時(shí)30分到晚上6時(shí)30分，每隔2h觀察一次，開(kāi)放的花朵數(shù)和溫度，統(tǒng)計(jì)1d內(nèi)何時(shí)開(kāi)花最多。注意：保護(hù)樹(shù)木，不許攀折六、作業(yè)1 .繪制所調(diào)查的3種園藝植物的花蕾和花朵的形態(tài)特征圖。2 .自制表格進(jìn)行花器構(gòu)造觀察描述記載。3 .設(shè)計(jì)開(kāi)花物候期觀察記載表，內(nèi)容包括種類、露瓣期、始花期、盛花期、末花期及1d內(nèi)開(kāi)花做多的時(shí)間和最早開(kāi)

6、花的部位。實(shí)驗(yàn)二花粉收集、貯藏及花粉生活力測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .掌握鮮花粉收集、儲(chǔ)藏的方法及原理。2 .觀察花粉在人工配制的培養(yǎng)基上的萌發(fā)情況，認(rèn)識(shí)花粉萌發(fā)形成花粉管的外形和伸長(zhǎng)過(guò)程，為理解植物的生殖過(guò)程奠定基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)原理花期不遇，給雜交工作造成困難，有的樹(shù)木和園藝植物可通過(guò)延長(zhǎng)花期解決，有的不得不進(jìn)行花粉儲(chǔ)藏，花粉貯藏對(duì)某些園林植物雜交育種具有重要的意義。通過(guò)花粉貯藏，它可以使一些遲開(kāi)花的園林植物和早開(kāi)花的園林植物進(jìn)行雜交，或到較遠(yuǎn)的地方給母本授粉，花粉的貯藏與運(yùn)輸可以打破雜交育種中雙親時(shí)間上和空間上的隔離，擴(kuò)大育種的范圍。花粉在貯藏期間的穩(wěn)定性，與花粉壁外層（外壁）的性質(zhì)和貯藏期間花粉

7、原生質(zhì)的代謝有關(guān)。在貯藏期間代謝調(diào)較少可溶性糖類和有機(jī)酸的花粉能夠在較長(zhǎng)期間保持其活力?；ǚ圪A藏的原理在于創(chuàng)造一定的條件，使花粉降低代謝強(qiáng)度，延長(zhǎng)花粉的壽命。花粉壽命的長(zhǎng)短，因植物種類不同而異。在自然條件下，大多數(shù)植物的花粉從花藥散出后只能存活幾小時(shí)，幾天或幾個(gè)星期。如一般木本植物花粉壽命很長(zhǎng)，如在干燥涼爽的條件下，柑橘花粉能存活4050d,根樹(shù)45d,蘋果1070d,櫻桃30100d,麻林一年，葉培忠教授試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉屬花粉采下后24h存活只有65%,超過(guò)24h很少存活；多數(shù)禾本科植物的存活時(shí)間不超過(guò)一天，如玉米12d,水稻花粉在田間條件下3min就

8、有50%喪失生活力，5min后幾乎全部死亡，是壽命最短的例子。一般在自然條件下自花授粉植物花粉壽命比常異花、異花授粉植物為短?；ǚ鄣念愋秃蜕盍σ脖憩F(xiàn)了相關(guān)性，通常三胞花粉的壽命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物為三胞花粉，壽命都是比較短的?；ǚ蹓勖拈L(zhǎng)短除了上述因種遺傳性的差異以外，還與溫度、濕度有密切的關(guān)系。通常高溫高濕下花粉呼吸旺盛，會(huì)很快失去生命力，但在極干燥的條件下，花粉失去水分，也不利于保存。據(jù)亞達(dá)姆斯試驗(yàn)，蘋果花粉在干燥狀態(tài)下，可保存3個(gè)月；如放在28C,濕度80%的條件下，經(jīng)過(guò)5個(gè)星期即失去生活力。維霍夫試驗(yàn)中，丁香的花粉貯藏在干燥器中，15d以后發(fā)芽率降到50%;至20d時(shí)，

9、僅有個(gè)別花粉發(fā)芽；到30d時(shí)，即全部死亡。因此，暫時(shí)不用的花粉，應(yīng)立即在適宜的條件下貯藏，妥善保存。為保持花粉生活力則人為采取減低其代謝強(qiáng)度，保持其純潔性，將其貯存于低溫、干燥、黑暗，并較為穩(wěn)定的環(huán)境條件下，以保持其活力。近年來(lái)，在貯藏花粉方面利用超低溫（-192C的液態(tài)空氣或-196C的液氮）、真空或降低氧分壓以及快速冷凍干燥等方法，延長(zhǎng)花粉生活力取得良好的效果及應(yīng)用。了解花粉的生活力對(duì)于農(nóng)林生產(chǎn)和育種工作具有重要意義。在生產(chǎn)和雜交工作中需要進(jìn)行的人工輔助授粉的雜交授粉，都需要收集和貯藏具有生活力的花粉，花粉的生活力除受植物本身的遺傳決定外，同時(shí)受環(huán)境影響。不同來(lái)源的花粉生活力高低存在很大差

10、異，花粉生活力的大小是保證雜交成功的關(guān)健。在有性雜交育種中，常因父母本花期的不同，作為父本的花粉必須經(jīng)過(guò)貯藏直到母本植株開(kāi)花時(shí)在植株開(kāi)花時(shí)在用于授粉；為了避免雜交工作失誤，在使用遠(yuǎn)地寄來(lái)的花粉或一段時(shí)間儲(chǔ)藏的花粉之前，必須對(duì)花粉生命力進(jìn)行鑒定，以便對(duì)雜交成果進(jìn)行分析與研究。通?；ǚ鄣男螒B(tài)、花粉中酶的活性以及積累淀粉(淀粉質(zhì)花粉)的多少與花粉生活力密切相關(guān)，因此可以利用花粉的形態(tài)觀察，過(guò)氧化物酶、脫氫酶的活性高低，淀粉的含量以及在人工培養(yǎng)基上花粉管萌發(fā)的情況作為確定花粉生活力高低的標(biāo)準(zhǔn)。三、實(shí)驗(yàn)材料、主要試劑及儀器(一)各種園藝植物花粉如榆葉梅、黃刺玫、丁香、等植物的花粉(二)主要儀器載玻片、蓋

11、玻片、凹玻片、解剖針、毛筆、棉球、干燥器、硫酸紙級(jí)硫酸紙袋、曲別針、小指形管、標(biāo)簽、標(biāo)記筆、顯微鏡、脫脂棉、花粉篩、冰箱、顯微鏡、恒溫溫箱、瓷盤、銀子、培養(yǎng)皿、玻璃棒、玻璃鉛筆、凡士林(三)主要試劑硫酸HSO(相對(duì)密度1.45)、無(wú)水氯化鈣、硅膠、碘碘化鉀、氯化三苯基四氮口坐、聯(lián)苯胺、a-蔡酚、NaHPO2HOKHPO、蔗糖或葡萄糖溶液、HBO、Ca(NO)2、MgSOKNQ酒精、碳酸鈉、過(guò)氧化氫四、實(shí)驗(yàn)要求1、查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，根據(jù)所學(xué)知識(shí)，就實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)出可行的實(shí)驗(yàn)方案，設(shè)計(jì)方案包括：(1)花粉收集方法(2)花粉采集時(shí)間(3)花粉采集部位(4)花粉貯藏條件(5)花粉生活力測(cè)定方法

12、2、實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改，和指導(dǎo)教師商討后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。3、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案前要多查閱文獻(xiàn)資料。4、實(shí)驗(yàn)完成后，要認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，總結(jié)實(shí)驗(yàn)成敗的因素，寫(xiě)出2000字以上研究小論文五、實(shí)驗(yàn)方法與步驟(一)收集花粉選擇健壯的植株上正常的花朵，在開(kāi)花前一大套硫酸紙袋，下口用曲別針別好以免混入其他花粉，第二天花藥開(kāi)裂后收集花粉；或采集開(kāi)花前一天的花粉，第二天進(jìn)行必要的加溫處理，使花藥開(kāi)裂后收集花粉；或采集開(kāi)花前一天的花蕾，第二天進(jìn)行必要的加溫處理，使花藥開(kāi)裂后搜集花粉。注意一定要采集花藥開(kāi)裂前后的新鮮花粉，對(duì)不成熟的幼嫩花藥的花粉，成熟過(guò)頭的花粉被雨露粘濕的花粉，有疑問(wèn)的花粉基雜質(zhì)要除去。（二）干燥及貯

13、藏花粉采集后置于清潔的環(huán)境，以免菌類侵入引起發(fā)霉影響生命力，并及時(shí)干燥，可放在散光下晾干、陰干或放入盛有CaCl2（HSO、硅膠、醋酸鉀飽和液、NaOH等）的干燥器中干燥，一般以花粉由相互粘結(jié)至極易分散象水一樣不粘玻璃壁為度，用花粉篩篩去雜質(zhì)，根據(jù)使用的次數(shù)將其分裝于數(shù)個(gè)指形管中，避免因啟封而使溫度、濕度劇變?cè)斐苫ǚ凵盍︿J減。一般以1/5或更少為宜，管口用脫脂棉塞好，活用雙層的干凈紗布扎好，有利于氣體交換和過(guò)濾氣體，貼好標(biāo)簽，表明植物品種名稱、采集日期、地點(diǎn)、貯藏條件（濕、溫條件）即統(tǒng)一編號(hào)。然后放入無(wú)水氯化鈣或不同濃度的HSO控制的一定濕度的干燥器中，最后把干燥器置于02c或0c以下的冰箱

14、中貯存。同時(shí)設(shè)對(duì)照，在室內(nèi)自然溫度、濕度及陽(yáng)光條件下，個(gè)一定時(shí)間進(jìn)行花粉生活力測(cè)定，比較其差異性。（三）花粉生活力測(cè)定鑒定花粉生活力的方法有很多，概括起來(lái)不外下列幾種：一是將待測(cè)花粉直接授粉，最后計(jì)算結(jié)實(shí)數(shù)和結(jié)籽數(shù)；二是將花粉授到柱頭上，隔一定時(shí)間切下柱頭，在顯微鏡下觀察花粉萌發(fā)情況，測(cè)定萌發(fā)率；三是形態(tài)觀察；四是染色觀察；五是在人工培養(yǎng)基上播種花粉，觀察萌發(fā)率。以后三種為主介紹花粉生活力測(cè)定的具體方法。1 .形態(tài)觀察法一般把具有品種典型性的花粉（指具有該品種花粉粒的大小、形態(tài)色澤等）作為具有生活力的花粉，把小型的、皺癟的、畸形的作為無(wú)生活力的花粉。形態(tài)觀察的具體方法是：首先將花粉置于載玻片上

15、，在顯微鏡下查看5個(gè)視野，要求被檢查的花粉?？倲?shù)達(dá)100粒以上，計(jì)算正?；ǚ哿Ｕ伎倲?shù)的比率。此法簡(jiǎn)便易行，但準(zhǔn)確性差，通常只用于測(cè)定新鮮花粉的生活力。2 .染色觀察法（1）碘碘化鉀染色法。先稱取0.3g碘和1.3g碘化鉀溶于100ml的蒸儲(chǔ)水中，即成碘-碘化鉀溶液。取少量花粉振播到用棉球擦凈的普通載玻片上，然后加水一滴，使花粉散開(kāi)，再加一滴碘-碘化鉀溶液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察不同的5個(gè)視野，凡花粉粒被染成藍(lán)色的表示具有生活力，呈黃褐色為缺少生活力的花粉（遇碘變藍(lán)是淀粉的特性）。（2）氯化三苯基四氮唾（TTC法。凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用中都有氧化還原作用，而無(wú)生活力的花粉則無(wú)此反

16、應(yīng)，因此當(dāng)TTC滲入有生活力的花粉時(shí)其脫氫酶在催化去氫過(guò)程中與TTCg合，是污水的TTC變成TTF而成紅色。磷酸鹽緩沖液的配置：在100ml的蒸儲(chǔ)水中溶解0.832g的NaHPO2HO和0.273g的KHPO,調(diào)整pH值為7.17。TTC溶液配置：取0.020.05g的TTC溶解于10ml磷酸緩沖液中，放于棕色瓶中，置于暗處。取少量花粉于凹玻片的凹槽內(nèi)或直接放于普通載玻片上，滴入0.5%TTC溶液一兩滴，用銀子攪拌均勻，蓋上蓋玻片，將此片置于3540c下1520min,在顯微鏡下觀察不同的5個(gè)視野，反被染成紅色的均為有生活力的花粉。(3)a-蔡酚法配制藥液A.將0.20g聯(lián)苯胺溶于100ml的

17、50%的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗處備用。B.0.15克久-蔡酚溶于100ml的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗處備用。C.0.25克碳酸鈉溶于100ml蒸儲(chǔ)水中，盛入白色瓶中備用。D.將以上三種溶液等量混合，即成“甲液”，盛如棕色瓶中。E.將3%氧化氫，臨用前用蒸儲(chǔ)水稀釋成0.3%溶液，即成“乙液”，隨配隨用。制片取花粉少許，撒入凹型載玻片的凹點(diǎn)內(nèi)，滴入“甲液”，片刻后在滴入“乙液”，35min后，在顯微鏡下觀察不同的5個(gè)視野。凡有生活力的花粉為紅色或玫瑰紅色。黃色的(不著色的)，為無(wú)生活力的花粉。3.發(fā)芽實(shí)驗(yàn)法此法受花粉萌發(fā)的培養(yǎng)基限制。若有適宜的培養(yǎng)基能精確測(cè)定出具有生活力并能夠萌發(fā)的花粉粒的

18、個(gè)數(shù)，還能看到花粉粒發(fā)芽的真實(shí)情況。(1)懸滴液發(fā)芽法把供試花粉播種在一定濃度的培養(yǎng)液液面上，使其花粉真實(shí)地發(fā)芽，以測(cè)定生活力高低的一種方法。培養(yǎng)液一般都是用蔗糖或葡萄糖溶液，濃度因物種而不同，差別很大。糖液濃度高低是為了調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，防止供試的花粉在溶液中發(fā)生破裂。適合多數(shù)園林植物花粉的發(fā)芽，通用培養(yǎng)基配方如下：蔗糖10%加HBO100mg/L,Ca(NO)22300mg/L,MgS4200mg/L,KNOI00mg/L,可配成母液，用時(shí)稀釋，母液放在冰箱中保存。具體操作方法：配制10%蔗糖溶液，滴一滴于凹玻片上，取少量花粉置于滴液中，用大頭針攪拌均勻，然后將凹玻片放在培養(yǎng)皿加蓋放到2

19、0-25C溫箱中。加蓋2h后花粉即開(kāi)始萌發(fā)，24h后在顯微鏡下檢查發(fā)芽花粉的百分率。不同物種的花粉發(fā)芽所需的時(shí)間不同，如牡丹花粉用15%蔗糖溶液在室溫條件下，接種后一小時(shí)即可觀察?；ǚ郯l(fā)芽檢查在低倍鏡下進(jìn)行，花粉的長(zhǎng)度為花粉粒直徑2倍以上才算發(fā)芽，一倍以上者算萌芽。(2)培養(yǎng)基發(fā)芽法培養(yǎng)基的制備：在250ml的燒杯中加入90ml蒸儲(chǔ)水，再加入1g的瓊脂，在酒精燈上加熱，使之完全溶解，然后加入定量蔗糖，制成不同濃度(5%10%15%20%的蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(分組加，每組制成一個(gè)濃度)，為了防止水分蒸發(fā)，配制加熱的燒杯應(yīng)加蓋。先把水在酒精燈或電爐上加熱煮開(kāi)，倒入瓊脂，使之融化，然后倒入蔗糖，用玻璃棒

20、不斷攪拌，呈透明狀即可。為保持培養(yǎng)的濃度，可在燒杯上液面處貼上紙條或用玻璃鉛筆沿液面劃線標(biāo)記，當(dāng)液面在熬制過(guò)程中因水分蒸發(fā)下降時(shí)應(yīng)及時(shí)添加蒸儲(chǔ)水，以保持液面的穩(wěn)定和培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)濃度，并將熬制好的培養(yǎng)基溶液連同燒杯放入盛有35c熱水的容器中，防止冷卻凝固，以備隨后使用，即配成5麻度的培養(yǎng)基。同法配成10%15%20麻度的培養(yǎng)基。用品消毒：發(fā)芽實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的載玻片、凹玻片、銀子等都要在消毒柜中消毒或在100c條件下煮沸20min,冷卻后取出用酒精棉球擦干放在大培養(yǎng)皿中備用，經(jīng)過(guò)消毒過(guò)的載玻片使用時(shí)要盡量減少和手指接觸的面積，以減少污染?；ǚ鄣牟シN與檢查：用玻璃棒蘸取培養(yǎng)基溶液，立即滴一滴于蓋玻片的中

21、央（直徑1.5-2.0mm）,使成為一表面完整的球面（球面越薄越好，否則透光性差，影響在顯微鏡下觀察），當(dāng)凝固后再進(jìn)行花粉的播種。播種花粉時(shí)，用經(jīng)過(guò)酒精消毒過(guò)的發(fā)絲蘸取花粉（若所用花粉為陳花粉或過(guò)于干燥的花粉時(shí)，可在播種前取出一部分在濕氣大的培養(yǎng)皿中密閉15-30min后在行播種），輕輕震動(dòng)（風(fēng)媒花）或涂抹（蟲(chóng)媒花）在培養(yǎng)基表面。一要注意發(fā)絲不能過(guò)重地接觸培養(yǎng)基表面，避免破壞培養(yǎng)基的表面；二是要注意花粉的分布要松散、均勻，不能密集成堆，；三要注意適宜的播種數(shù)量。經(jīng)驗(yàn)證明，花粉太稀，影響發(fā)芽，播種太稠也影響發(fā)芽，一般情況下，一個(gè)顯微鏡視野以分布20-50?；ǚ蹫橐恕２ズ煤髮⑸w玻片翻轉(zhuǎn)，置于載玻片

22、上的小玻璃環(huán)上，小玻璃環(huán)上下涂上凡士林，環(huán)內(nèi)加1第水用于保濕。濕室密封后，應(yīng)在載玻片上用玻璃鉛筆標(biāo)號(hào)，并進(jìn)行記錄，記錄內(nèi)容包括花粉種類、培養(yǎng)基的糖液濃度、采粉時(shí)間，播種時(shí)間、濕室中滴水的多少。然后全組集中放在一個(gè)大的瓷盤中，用紗布覆蓋后加蓋，放于15-25C的溫箱內(nèi)24h后進(jìn)行檢查。如果時(shí)間允許，最好播后每隔2-3h檢查一次，直至花粉粒發(fā)芽數(shù)不再增加為止，記載花粉發(fā)芽數(shù)，以明確不同花粉的發(fā)芽的速度和發(fā)芽進(jìn)程。牡丹花粉接種后1h即可觀察?；ǚ郯l(fā)芽檢查在低倍鏡下進(jìn)行，花粉的長(zhǎng)度為花粉粒直徑2倍以上算發(fā)芽，一倍以上者算萌芽。每片應(yīng)觀察5個(gè)視野花粉數(shù)不少于100粒以上，計(jì)算發(fā)芽率，此法每人做3片，選發(fā)

23、芽情況最好的一片進(jìn)行發(fā)芽情況的檢查。五、思考題1 .詳細(xì)記載花粉采集及貯存的日期、花粉名稱、花粉收集方法及過(guò)程、花粉貯藏方法。2 .通過(guò)實(shí)驗(yàn)總結(jié)所采集貯藏的花粉種類的特點(diǎn)。3 .用染色法計(jì)算花粉生活力（5個(gè)視野）。用發(fā)芽法計(jì)算花粉生活力（5個(gè)視野）。4 .繪一幅花粉粒發(fā)芽形態(tài)圖。附表5 10C條件下控制各種濕度所需HSO的百分比濃度相對(duì)濕度0（極干燥）10253550657090HbSQ%9563.154.148.143.134.829.417.8表2幾種物質(zhì)在一定條件下所控制的相對(duì)濕度物質(zhì)溫度保持相對(duì)濕度/%CaCl20C32HSO（相對(duì)密度1.45）4C30硅酸5醋酸鉀飽和液22表3花粉生

24、活力測(cè)定統(tǒng)計(jì)表測(cè)定方法花粉種類培養(yǎng)基的糖液濃度采粉時(shí)間播種時(shí)間濕室中滴水的多少有生活力的花粉/觀察花粉總數(shù)花粉生活力/%12345總計(jì)碘-碘化鉀染色法氯化二苯基四氮口坐(TTQ法0(-蔡酚懸滴液發(fā)芽法培養(yǎng)基發(fā)芽法實(shí)驗(yàn)三有性雜交技術(shù)一、目的和要求園藝植物有性雜交是創(chuàng)造樹(shù)新類型的主要方法之一，本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)品種間雜交的實(shí)際操作，掌握有性雜交技術(shù)。二、材料和用具材料：葡萄用具：鑲子、小剪刀、紙牌、透明紙袋、授粉器或毛筆、細(xì)棉紗線或回形針、干燥器、指形管、棉花、酒精(70%)、紅漆。三、有性雜交技術(shù)葡萄1.花器結(jié)構(gòu)及開(kāi)花習(xí)性大多數(shù)葡萄的栽培品種是完全花，花很小，著生在復(fù)總狀花序上(圓錐花序)，花冠綠色。

25、上部合生，開(kāi)花時(shí)下部與子房分離，向外卷曲成帽狀脫落，雄蕊56個(gè)。在栽培品種中，除了完全花品種外，還有“雌能花”品種。這種花的雌蕊完好，有正常受精能力，而它的雄蕊花粉通常是不育的，沒(méi)有受精能力。葡萄花芽為混合芽，著生在結(jié)果母枝的葉腋，枝條的中下部葉腋芽能形成花芽，但以基部38節(jié)形成的花芽最佳，在結(jié)果枝上應(yīng)選擇下部的花序供雜交用。新梢下部的花序比上部花序開(kāi)放早?；ɡ僖话阍谏衔?11時(shí)開(kāi)放，以910時(shí)開(kāi)放最多，一個(gè)花序的花期約35天，柱頭花蕾開(kāi)放后46天內(nèi)有受精能力。2.雜交技術(shù)(1)花粉的收集和貯藏一般收集葡萄花粉是在晴天的早上，采摘?jiǎng)傞_(kāi)而未經(jīng)昆蟲(chóng)訪問(wèn)過(guò)的父本花序，在室內(nèi)用銀子取下花藥，這種方法對(duì)

26、花的收集較為經(jīng)濟(jì)，但較費(fèi)事；另一方法是用透明紙袋直接套在未開(kāi)的父本花序上，待花盛開(kāi)時(shí)，用手多次震動(dòng)花序，花藥，花粉即落至透明紙袋內(nèi)?；ǚ凼占院?，將它們放在吸水能力強(qiáng)的紙上，清除其中的花絲，待花藥稍干后，再將它們倒入小瓶或指形管中，用棉花塞好瓶口，貼上注明品種和采收日期的標(biāo)簽，放在干燥器內(nèi)，置于0c10c的低溫條件下保存。(2)去雄和套袋供雜交用的花序應(yīng)選擇發(fā)育良好，著生位置適中的花序。通常在一個(gè)發(fā)育充實(shí)的結(jié)果枝上生長(zhǎng)著兩個(gè)以上的花序，最好選用枝條下部發(fā)育良好的花序，除去上部花序。由于葡萄是無(wú)限花序，一個(gè)花序上的花數(shù)一般可達(dá)2001500朵。因此，一穗上開(kāi)花前后不一致增加了雜交的困難，影響果實(shí)

27、發(fā)育，所以在選定花序后，一般剪去整個(gè)花穗尖的1/4和付穗，每個(gè)花序保留100150個(gè)花蕾供雜交用，修剪花序后，當(dāng)有少數(shù)花已開(kāi)放，要進(jìn)行疏花疏蕾工作，留下那些大致能在同一天開(kāi)放的花蕾。疏穗后應(yīng)隨即去雄。最適去雄時(shí)間是開(kāi)花前23天，這時(shí)花蕾已互相分離而肥大。顏色為黃綠色?；ò旰突ūP已完全分離，只用銀子在花蕾的頂端一夾，花瓣和花藥即可除去。去雄后，應(yīng)檢查有無(wú)遺漏的花蕾或殘存的花藥，然后套上準(zhǔn)備好的透明紙袋，扎緊捆綁在結(jié)果枝上。套袋用的透明紙袋大小一般長(zhǎng)26厘米，寬14厘米。(3)授粉去雄后23天即可進(jìn)行授粉，這時(shí)母本花序的柱頭上分泌有大量的粘液，表示子房已能接受花粉，而且給花粉創(chuàng)造了良好的發(fā)芽條件，是授粉的最適時(shí)機(jī)。授粉宜在晴朗無(wú)風(fēng)的上午810時(shí)進(jìn)行。少量花序授粉可用授粉器或毛筆蘸花粉授粉；大量花序進(jìn)行授粉時(shí)可將花粉放在透明紙袋內(nèi)，套到去雄的花序上，用手指