真核細胞RNA的制備和逆轉錄PCR-毛宇彬_第1頁
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文檔簡介

1、實驗五實驗五 真核細胞真核細胞RNA的制備的制備和和n RNARNA通常以單鏈形式通常以單鏈形式存在，但也可形成局部存在，但也可形成局部的雙螺旋結構。的雙螺旋結構。n RNARNA分子的種類較多，分子的種類較多，分子大小變化較大，功分子大小變化較大，功能多樣化。能多樣化。RNA的種類、分布、功能的種類、分布、功能核核蛋蛋白白體體RNA信信使使RNA轉轉運運RNA核核內內不不均均一一RNA核核內內小小RNA胞胞漿漿小小RNA 細細胞胞核核和和胞胞液液線線粒粒體體功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA

2、核核蛋蛋白白體體組組分分蛋蛋白白質質合合成成模模板板轉轉運運氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前體體參參與與hnRNA的的剪剪接接、轉轉運運rRNA的的加加工工、修修飾飾蛋蛋白白質質內內質質網網定定位位合合成成的的信信號號識識別別體體的的組組分分核核仁仁小小RNA核核蛋蛋白白體體RNA信信使使RNA轉轉運運RNA核核內內不不均均一一RNA核核內內小小RNA胞胞漿漿小小RNA 細細胞胞核核和和胞胞液液線線粒粒體體功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA 核核蛋蛋白白體體組組分分蛋蛋白白質質合合成成模模板

3、板轉轉運運氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前體體參參與與hnRNA的的剪剪接接、轉轉運運rRNA的的加加工工、修修飾飾蛋蛋白白質質內內質質網網定定位位合合成成的的信信號號識識別別體體的的組組分分核核仁仁小小RNAn掌握逆轉錄聚合酶鏈反應的基本原理、實驗基本條件n熟悉PCR反應條件的優化和注意事項，PCR引物設計的基本原則，定量PCR的原理和用途。組織細胞：新鮮動物肝臟塑料制品： 盡可能使用無菌、一次性塑料制品，已標明 RNase-Free 的塑料制 品，如沒有開封使用過通常沒有必要再次處理。對于國產塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理步驟如下： 1在玻璃燒杯中注入去離子水，加入 DEPC

4、（焦碳酸二乙酯） 使 DEPC 的終濃度為 0.1%。注意：DEPC 為劇毒物，活性很強，小心在通 風柜中使用。2處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中，注入 DEPC 水溶液， 使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3在通風柜中室溫處理過夜。 4將 DEPC 水溶液小心倒到廢液瓶中，用鋁箔封住DEPC 水處理 過的塑料制品的燒杯，7080烘拷干燥，高溫高壓蒸氣滅菌至少 30 分鐘。 5烘箱用合適的溫度（7080）烘拷至干燥。置于干凈處備用。 玻璃和金屬物品：250 烘烤3小時以上或180烘烤8小時。 其它試劑：無水乙醇、氯仿 、DEPC處理過的水、75%乙醇（用DEPC處理水 配制）、0.5%（m/V）SDS（DEPC處理）三、方法和步驟三、方法和步驟四、注意事項瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠

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