1、微生物實驗室操作規程SOP?細菌室工作守則（微生物室SOP之一）?細菌室消毒隔離措施（微生物室SOP之二）?微生物實驗室安全與防護（微生物室SOP之三）?細菌室內質控制度（微生物室SOP之四）?細菌室操作技術規范（微生物室SOP之五）?無菌間規章制度（微生物室SOP之六）?菌（毒種）管理辦法（微生物室SOP之七）?細菌室儀器維護保養及質控措施（微生物室SOP之八）?標準菌株保存及使用（微生物室SOP之九）?細菌室內務管理規定（微生物室SOP之十）?標本采集及保存要求（微生物室SOP之H一）?室內質控失控處理程序（微生物室SOP之十二）?標本拒收標準（微生物室SOP之十三）?溫度失控處理措施（微

2、生物室SOP之十四）?超凈工作臺作業指導（微生物室SOP之十五）?標本的接種和移種法（微生物室SOP之十六）細菌室工作守則（微生物室SOP之一）1。每日工作前用紫外線照射實驗室半小時以上。2。入室前應穿工作服，并做好實驗前的各項準備工作。3.實驗室內應保持肅靜，不準吸煙、吃東西及用手觸摸面部。盡量減少室內活動，以免引起風動，無關人員禁入。4,非必要物品禁止帶入實驗室，必要資料和書籍帶入后，應遠離操作臺。5。做好標本的登記、編號及試驗記錄。未發出報告前，請勿丟棄標本.6。標本處理及各項試驗應在操作間進行，接種環用完后應立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應浸泡在消毒液內.7.實驗時手部污染，應立即

3、用過氧乙酸消毒或浸于3%來蘇兒溶液中510分，再用肥皂洗手并沖洗干凈；如誤入口內，應立即吐出，并用1:1000高鎰酸鉀溶液或3%X氧水漱口，根據實際情況服用有關藥物。8。實驗過程中，如污染了實驗臺或地面，應用3%來蘇兒覆蓋其上半小時，然后清洗；如污染工作服，應立即脫下，高壓滅菌。9,若出現著火情況，應沉著處理，切勿慌張，立即關閉電閘，積極滅火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醍和丙酮等）必須遠離火源，妥善保存。10。工作結束時檢查電器、酒精燈等是否關閉，觀察記錄培養箱、冰箱溫度及工作情況，用有消毒液的抹布將操作臺擦拭干凈，并將試劑、用具等放回原處，清理臺面，未污染的廢棄物扔進污物桶，有菌廢棄物應送

4、高壓滅菌后處理。11.離室前工作人員應將雙手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗凈。12。愛護儀器設備，經常清潔，注意防塵和防潮.細菌室消毒隔離措施（微生物室SOP之二）1。每天工作前用消毒液消毒工作臺，上班前、下班后開紫外燈（最少半小時）進行空氣消毒。2。非必要品禁止帶入實驗室，必要資料和書籍帶入后，應遠離操作臺。3.使用后的載玻片、蓋片、平皿、試管等用消毒液浸泡，經煮沸后清洗或丟棄。4。試驗后的血液標本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于試驗的反應板、吸頭等用消毒液浸泡（至少24小時以上）后清洗或丟棄。5。所有微生物培養物（細菌、支原體、真菌等培養物），不管標本陽性或陰性均用消毒液浸泡后，經煮沸消毒

5、，才能清洗或丟棄。6。取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均應徹底消毒.7 .用于浸泡各種器械如刮菌刀、持物鉗、鐐子等的消毒液要定期更換。8 .不慎發生臨床標本或培養物污染工作臺，不要立即用水沖洗，應先用紙巾、布等敷料加上消毒液（如5%石炭酸、3麻蘇兒等）消毒30分鐘以上，然后再清洗.如污染工作服，應立即脫下，高壓滅菌。9。實驗時手部污染，應立即用肥皂洗手并沖洗干凈，再外用消毒藥水，如誤入口內，應立即吐出，并用1:1000高鎰酸鉀溶液或3%又氧水漱口，必要時根據實際情況服用有關藥物。微生物實驗室安全與防護（微生物室SOP之三）1 .在工作區內禁止飲食，吸煙和存放食物及使用

6、化妝品.2 .實驗室里應保持整潔，不存放與工作無關的雜物.3 .工作臺每天至少用消毒劑清潔一次，在溢滲傳染物后要立即消毒、清洗；進入無菌室必須穿工作服，戴口罩、帽子.4 .在各種操作進程中均應盡量避免或減少氣溶膠產生.5 .實驗工作區禁止無關人員出入，尤其要嚴禁兒童進入。6 .工作人員在處理傳染性物質或動物之后，以及在離開實驗室時要洗手。7 .凡發生溢漏事故或接觸傳染性物質后，均應立即報告實驗室監督員或實驗室主任，并做好書面記錄及采取相應措施.8 .結核桿菌的培養及標本涂片務必在生物安全柜里操作。9 .有涉及感染性材料的操作應在生物安全柜中進行，如結核桿菌培養、感染性組織等。10。工作人員在進

7、入實驗室工作區前，應在專用的更衣室（或緩沖間）穿著背開式工作服或其它防護服。工作完畢后必須脫下工作服，不得穿工作服離開實驗室。可再次使用的工作服必須先消毒后清洗.11 .工作時必須戴手套（兩副為宜）。一次性手套必須先消毒后丟棄。12 .在實驗室中必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水，且易于取用。可配備應急藥品。細菌室內質控制度（微生物室SOP之四）1、每位工作人員必須加強質控意識，以質量控制工作為核心，認真做好各項質控試驗和記錄。2、加強質量控制和專業理論知識的學習，規范操作，正確分析處理結果.3、一旦發現失控，及時采取相應措施，糾正失控結果.4、每天觀察培養箱、冰箱的溫度，并做好記錄.

8、5、無菌間每周監測一次，紫外線消毒滅菌情況，并做好記錄。6、每月對高壓蒸汽滅菌器、干熱鼓風干燥箱進行一次滅菌效果監測。生物檢驗室操作技術規范（微生物室SOP之五）1、微生物檢驗室工作人員均應具備細菌傳染、消毒、滅菌知識。2、微生物檢驗專業人員不斷更新知識，了解微生物檢驗新進展。3、每次發出的微生物報告應認真復審，分析報告、評價報告.4、工作人員加強有菌觀念，無菌操作。5、當工作環境被細菌污染，必須立即消毒處理，報告主管人員，采取必要措施。6、工作人員被細菌培養物污染應消毒處理，必要時給予藥物治療，并向主管負責人報告，采取特殊措施。無菌間規章制度（微生物室SOP之六）1、每一個工作人員必須樹立無

9、菌觀念，嚴格進行無菌操作.在無菌室內必須戴帽子、口罩，進行無菌操作。2、每天用紫外線消毒，每月檢查一次紫外燈的無菌效果。3、無菌室內各種廢棄物品必須消毒。4、實驗完畢后，用含氯制劑1000mg/L消毒桌面、地面。菌（毒種）管理辦法（微生物室SOP之七）1.菌種保管應有專人負責，保存于冰箱中，房門專人加鎖，確保菌種安全.保管人員變動時，必須嚴格交接手續.2、菌種應有嚴格的登記，包括形態，分離日期，鑒定日期，簽發者，主要鑒定性能（包括形態、染色、抗原結構、動物致病力等），并注明使用、轉移、銷毀情況及原因.3、各種菌種應按規定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發現

10、變異時，應及時更換。4、菌種保存范圍及向外單位轉移，應按國家衛生部規定執行。5、所有存在菌種應具備清單。細菌室儀器維護保養及質控措施（微生物室SOP之八）我室主要儀器為BacT/Alert120、BACTEC9050培養儀和Vitek32、BD鳳凰全自動細菌鑒定和藥敏分析儀，為了使儀器能夠高質量的運行,使儀器報告的結果準確可靠，特制定以下儀器維護、保養和質控措施。一、BacT/Alert120、BACTEC9050培養儀的維護、保養和質控措施1,每天上班開始工作前和下班離開前要檢查儀器的工作狀態是否正常，儀器培養箱溫度的報告里外是否一致.2。每天用中性的清潔液將儀器表面擦拭干凈3,每天先做質控

11、。4。一個月至少做一次全程定標5.儀器檢測數據每周星期六做備份。6。儀器每一個月做一次徹底的清潔保養，包括清潔外殼、瓶孔、濾網等7.儀器每年請工程師做一次檢定工作。二、Vitek32、BD鳳凰全自動細菌鑒定和藥敏分析儀的維護、保養和質控措施1.每天上班開始工作前和下班離開前要檢查儀器的工作狀態是否正常。2。每天用中性的清潔液將儀器表面擦拭干凈3。購買的新批號的試劑都必須先做質控，質控合格后才能用于臨床檢測.4。儀器檢測數據每周星期六做備份。5.儀器每一個月做一次徹底的清潔保養，包括清潔外殼、卡片架、濾網等6。儀器每年請工程師做一次檢定工作。標準菌株保存及使用（微生物室SOP之九）概述：標準菌株

12、是細菌室室內質控工作必不可少的、重要的生物資源，我室的標準菌株主要來自省臨檢中心的發放和從衛生部臨檢中心以及國家菌種保存中心購買所得，為了讓標準菌株能夠得到合理的應用，特制定以下規定.1 .對每批購買的標準菌株要做好登記，包括菌種的菌名、編號、購買時間、保存地點、記錄人等2 .每次使用標準品都應作好使用記錄，包括標準品的名稱、編號、使用時間等。3 .購買的標準品初次使用時，應大量增殖，然后分裝在含10-15%甘油的胰蛋白月東肉湯中，20c以下保存.4,新的標準菌株復蘇最多不得超過三次，如超過三次將不在視為標準菌株使用。5。標準菌株保存管一經溶化使用后，不得再次凍存。細菌室內務管理規定（微生物室

13、SOP之十）1。細菌室崗位分工與職責管理規定1。1概述鑒于細菌室工作瑣碎煩雜且千頭萬緒，為了使細菌室的工作能夠保質保量地順利完成，特將細菌室暫定為兩個崗位，以明確工作范圍、增強責任心、便于日常工作的完成,當然由于細菌室不同崗位工作量的隨機性較大，故我室要求大家發揚既分工，又協作的精神，共同完成細菌室工作.1。2崗位職責各崗位工作人員要求嚴格按照作業指導書進行操作，高質量的完成本崗位工作，如遇到問題須提出經討論解決。1。3崗位分工崗位I：完成細菌培養標本（n號菌培養除外）的結果觀察處理及報告發放。崗位n:完成儀器的維護、保養和質控工作等。2.細菌室記錄內容明細2。1環境條件室內溫度、濕度，每天一

14、次，上午記錄.2。2恒溫設備2.3孵箱、普通冰箱，每天一次，上午記錄。2。3分析儀器常規每日保養一次，發現問題隨時詳細記錄；質控按要求測試完畢后,及時手工記錄.2。4標本與結果不合格標本記錄、危急值報告記錄、結果記錄.2.5 崗位記錄（附表：細菌室崗位記錄表）2.6 其它記錄，如交班記錄等。3。細菌室室內環境條件控制范圍溫度1828C,濕度2080%.標本采集及保存要求（微生物室SOP之H一）1總則：用于細菌培養的標本在收集時應注意嚴格無菌操作和及時送檢，檢測后標本應妥善保存.2。臨床標本的采集2。1下呼吸道分泌物（痰液）令患者早上起床后用清水獺口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在

15、無菌塑料痰盒中，及時送檢。2。2尿液（中段尿）護理人員協助采取中段尿約3ml入無菌試管中，及時送檢.2。3糞便：取有粘液、膿血部分的糞便置玻璃大便專用管中，如為稀水便，可直接收集于玻璃管中，及時送檢。2。4眼、耳、鼻、喉拭子：將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌試管內，及時送檢。2。5膿液：用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌試管中，及時送檢。2。6血液：2。6。1凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養時,應盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應盡量選擇抗菌素在體內濃度最低時采

16、血,應在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養標本.當然在病人發熱或寒顫時采集也可。2。6。2成人每次采血510ml,小兒采血23ml;2.6.3嚴格消毒病人采血部位和血培養瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養瓶內，輕輕搖勻，2。6.4從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時要及時送檢。2。7穿刺液：胸腹水、心包液、關節腔液、鞘膜積液：嚴格無菌抽取后，注入含肝素抗凝的無菌試管中，輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養瓶內及時送檢。2.8 膽汁：由專科醫生以無菌方法取引流液10ml注入無菌試管。2。9腦脊液：以無菌方法取腦脊液35ml,置無菌試管內，常溫保

17、存送檢，如只做培養可直接無菌注入血培養瓶內，及時送檢.2。10生殖器官標本：陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應由醫師采集，收集于無菌試管內送檢。如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養檢查時，采集的標本應床旁接種并及時放入孵箱培養.2.11 燒傷標本：以無菌棉拭子直接采取多個部位創面的膿汁分泌物放入無菌試管中。2。12支原體（解月尿、人型）培養+藥敏的標本采集2.12 。1。支原體對干、熱抵抗力差，標本采集后應盡快接種支原體運送培養基送檢。2。12.2男性：用細的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內253cmi3。臨床標本的保存細菌室標本原則上要求及時送檢、及時處理，不得保存。室內質控失控處理程序（微生物室

18、SOP之十二）一、BacT/Alert120血培養儀室內質控處理程序1 .當BacT/Alert120血培養儀質控失敗時，儀器會提示你對該瓶孔進行定標，通常定標都能通過，只要定標過了，儀器就能正常工作。如儀器定標不能通過，就要請廠家工程師對儀器進行檢測，并對儀器的有關參數進行調整，直到儀器合格后才能進行日常工作并填寫失控報告。2 .每批新購買的試劑必須進行室內質控，當質控結果不能符合要求時，應通知組長協助處理，進行失控原因分析.2.1 失控的原因分析2。1。1自身原因2。1.1。1質控菌株、卡片、無菌鹽水等出現質量問題.2。1.1。2質控菌株不符合所檢測卡片的要求。2.1.1。 3上卡操作中出

19、現問題，如菌液濃度不準等2.1。 1。4儀器工作是否正常.2。1。1。5室溫是否符合分析要求。2。2失控的處理2。2。1操作不規范時應嚴格按作業指導書重新檢測一次。仍失控進行下一步。2.2。 2檢查質控菌株及卡片是否在有效期內，質量如何？無菌鹽水是否被污染以及標準菌株是否符合卡片的要求等。在保證質控菌株、卡片、無菌鹽水等符合要求的情況下仍失控則進行下一步.2.2.3做可能影響檢測的儀器相應部分保養，仍失控進行下一步.2。2。4請儀器工程師分析，寫失控報告。直到質控在控后重新檢測.標本拒收標準（微生物室SOP之十三）1。支原體培養、鑒定、計數、藥敏操作：若送檢標本不是運送培養基送檢則為不合格標本

20、.2。找抗酸桿菌：穿刺液標本如發現嚴重凝固則拒收。3。腦脊液培養：如標本為非無菌管采集則拒收.4.中段尿培養：如標本為非無菌管采集則拒收。5。下呼吸道標本培養：挑取痰標本直接涂片鏡檢，WBQ10/LP,上皮細胞25/LP不適合做細菌培養。6.膿液及創傷分泌物培養：如標本為非無菌管采集則拒收。7。穿刺液培養：如標本為非無菌管采集則拒收。8.生殖道分泌物培養：如為淋球菌培養沒有直接接種到淋球菌培養基上則拒收.9。各類培養標本原則上都要求無菌采集并及時送檢、及時接種、及時培養，不能保存.除非特殊情況可置于冰箱保存，對分離怕冷的細菌時，應注意標本的保暖溫度失控處理措施（微生物室SOP之十四）1。每天上

21、班記錄培養箱、冰箱的溫度于溫度記錄本上，如發現普通培養箱的溫度超過37c（不包括37C）或低于34c（不包括34C）;真菌培養箱溫度超過31c（不包括31C）或低于25C（不包括25C）;冷藏冰箱的溫度超過8c（不包括8C）或低于2c（不包括2C）;冷凍冰箱的溫度超過10C（不包括10C）或低于30c（不包括30C）,應立即追溯其失控的時間和原因。1。1如失控的原因可以馬上糾正（如冰箱斷電、冰箱門未關好、溫控調節器未正確控制、冰箱嚴重結霜、溫度計損壞等），則由本室人員馬上糾正并填寫失控報告。1.2如冰箱、培養箱本身出現機械故障，本室人員應馬上通知維修部或維修商，同時根據排除故障時間的長短是否會

22、對其中的物品質量造成影響而采取相應的措施（如把里面的物品轉移到能滿足需要條件的環境中），并填寫失控報告單.2 .培養箱中的培養物應全部拿到工作臺，檢查培養物的生長情況。2.1 。如果培養基的菌落生長良好，則按常規程序進行檢驗。2.2 .如果培養基的菌落生長受抑制，則取標本重新接種，如標本確實無法再次接種，則應與臨床醫生聯系、解釋并請醫生重新采集標本送檢。2.3 .如有細菌生長，則應補做藥敏試驗，并填寫遲發報告單記錄表，并寫明原因。3 .故障處理過程中應及時貼上紅色標識，并在溫度記錄本上用紅筆記錄失控的溫度度數，故障處理后應利用培養箱、冰箱的溫度調節器把溫度調回到規定范圍的中值，并把專業人員的檢

23、查的結果記錄在儀器檔案袋中。另外還需填寫內部質量控制失控報告單，當溫度再次是失控時，再次記錄溫度的讀數，并且上報負責人.超凈工作臺作業指導（微生物室SOP之十五）1。目的規范凈化工作臺操作與維護工作，確保儀器正常運作。2。適用范圍：本實驗方法適用于微生物檢驗中凈化工作臺操作與維護管理。3.檢驗人員職責：負責此儀器操作和維護管理4。操作及維護規程4.1操作規程4。1。1使用工作臺時，應提前50分鐘開機，同時開啟紫外殺菌燈,處理操作區內表面積累的微生物，30分鐘后關閉殺菌燈（此時日光燈即開啟），啟動風機。4。1.2對新安裝的或長期未使用的工作臺，使用前必需對工作臺和周圍環鏡先用超靜真空吸塵器或用不產生纖維的工具進行清潔工作，再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進行滅菌處理。4。1。3操作區內不允許存放不必要的物品，保持工作區的潔凈氣流流型不受干擾。4。1。4操作區內盡量避免作用明顯擾亂氣流流型的動作。4.1 。5操作區的使用溫度不可以超過60Co4.2 維護規程及維護方法4。2。1根據環境的潔凈程度，可定期（一般23個月）將粗濾布（滌綸無紡布）拆下清洗或給予更換。4。2.2定期（一般為一周）對環境周圍進行滅菌工作，同時經常用紗布沾酒精或丙酮等有機溶劑將紫外線殺菌燈表面擦干凈，保持表面清潔，否則會影響殺菌效果.4。2。3當加大風機電壓已不能使風速