1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 血涂片的制造及免疫血涂片的制造及免疫 細(xì)胞的形狀察看細(xì)胞的形狀察看一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)掌握血涂片制備和染色方法學(xué)習(xí)掌握血涂片制備和染色方法; 比較察看各種免疫細(xì)胞的形狀。比較察看各種免疫細(xì)胞的形狀。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 血涂片是血液學(xué)研討中的最根本技術(shù)。血涂片是血液學(xué)研討中的最根本技術(shù)。將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本。為察將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本。為察看細(xì)胞內(nèi)部構(gòu)造，識別各種細(xì)胞，血涂片必看細(xì)胞內(nèi)部構(gòu)造，識別各種細(xì)胞，血涂片必需進(jìn)展染色。血涂片的各種染色方法大多是需進(jìn)展染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏羅氏WrightWright染色法衍變來的。目前常用

2、染色法衍變來的。目前常用瑞特氏染色法。瑞特氏染色法。 瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成有復(fù)合染料。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，組成有復(fù)合染料。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。對各種染料的親和力也不一樣。 因此，經(jīng)瑞氏染液染色后，不同免疫細(xì)胞中的因此，經(jīng)瑞氏染液染色后，不同免疫細(xì)胞中的顆粒可以呈現(xiàn)不同的顏色。根據(jù)細(xì)胞中顆粒的顏色、顆粒可以呈現(xiàn)不同的顏色。根據(jù)細(xì)胞中顆粒的顏色、大小及多少，再結(jié)合細(xì)胞的大小及細(xì)胞核的形狀，大小及多

3、少，再結(jié)合細(xì)胞的大小及細(xì)胞核的形狀，就可以將免疫細(xì)胞進(jìn)展分類計(jì)數(shù)。就可以將免疫細(xì)胞進(jìn)展分類計(jì)數(shù)。 三、實(shí)驗(yàn)用品三、實(shí)驗(yàn)用品l實(shí)驗(yàn)資料：實(shí)驗(yàn)資料：l 酒精棉球、載玻片、眼科鑷、眼科剪等。酒精棉球、載玻片、眼科鑷、眼科剪等。l試劑：試劑：l 瑞氏瑞氏WrightWright染液。染液。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟. .預(yù)備干凈玻片兩張，一張用于推片，另一張用預(yù)備干凈玻片兩張，一張用于推片，另一張用于固定標(biāo)本。于固定標(biāo)本。. .剪斷小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻剪斷小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制備血涂片，自然枯燥。片上涂血膜制備血涂片，自然枯燥。涂片涂片 將一滴血置于載玻片的一端

4、，再取另一張將一滴血置于載玻片的一端，再取另一張邊緣光滑的載玻片，斜置于血涂片的前緣，先邊緣光滑的載玻片，斜置于血涂片的前緣，先向后稍挪動(dòng)悄然觸及血滴，使血液沿玻片端展向后稍挪動(dòng)悄然觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀，兩玻片的角度以開成線狀，兩玻片的角度以30-4030-40度為宜角度度為宜角度過大血膜較厚，角度小那么血膜薄，悄然將過大血膜較厚，角度小那么血膜薄，悄然將載玻片向前推進(jìn)，即涂成血液薄膜如圖，載玻片向前推進(jìn)，即涂成血液薄膜如圖，推進(jìn)時(shí)速度要一致，否那么血膜成波浪形，厚推進(jìn)時(shí)速度要一致，否那么血膜成波浪形，厚薄不勻。薄不勻。3 3瑞氏染色瑞氏染色待涂片在空氣中完全枯燥后，滴加數(shù)滴瑞氏

5、待涂片在空氣中完全枯燥后，滴加數(shù)滴瑞氏染液蓋滿血膜為止，染色染液蓋滿血膜為止，染色1min1min。染染1 1分鐘后，再加等量的緩沖液或蒸餾水于分鐘后，再加等量的緩沖液或蒸餾水于染色液上，吹勻染色液上，吹勻, ,浸染約浸染約8-108-10分鐘。分鐘。用蒸餾水迅速?zèng)_洗。待自然枯燥后或用吸水用蒸餾水迅速?zèng)_洗。待自然枯燥后或用吸水紙吸干紙吸干, ,即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)展鏡檢即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)展鏡檢脫色：用脫色：用20%20%鹽酸甲醇脫色，肉眼察看玻片鹽酸甲醇脫色，肉眼察看玻片呈粉紅色為宜，顯微鏡下察看結(jié)果。省呈粉紅色為宜，顯微鏡下察看結(jié)果。省略略4 4察看察看分別用低倍、高倍鏡察看血涂片

6、，分分別用低倍、高倍鏡察看血涂片，分辨不同的血細(xì)胞類型。辨不同的血細(xì)胞類型。 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 顆粒細(xì)胞嗜酸性、嗜堿性、嗜中性顆粒細(xì)胞嗜酸性、嗜堿性、嗜中性 單核細(xì)胞單核細(xì)胞 紅細(xì)胞與血小板紅細(xì)胞與血小板五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖并比較幾種免疫細(xì)胞的形狀特征。繪圖并比較幾種免疫細(xì)胞的形狀特征。 紅細(xì)胞血小板未成熟中性粒細(xì)胞大淋巴細(xì)胞成熟的中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞單核細(xì)胞血涂片血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染粉紅色稱為酸性物質(zhì)；血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染粉紅色稱為酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞漿為酸性細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞漿為酸性, ,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合, ,染藍(lán)色或紫色稱為嗜堿染藍(lán)色或紫色稱為嗜堿性物質(zhì)；性物質(zhì)；中性顆粒成等電形狀與伊紅和美藍(lán)均