1、會(huì)計(jì)學(xué)1單基因病致病基因的鑒定單基因病致病基因的鑒定2第1頁(yè)/共29頁(yè)3第2頁(yè)/共29頁(yè)4第3頁(yè)/共29頁(yè)5第4頁(yè)/共29頁(yè)6第5頁(yè)/共29頁(yè)7功能克隆：功能克隆：從蛋白質(zhì)著手進(jìn)行基因克隆的策略。從蛋白質(zhì)著手進(jìn)行基因克隆的策略。定位克隆定位克隆：在蛋白質(zhì)產(chǎn)物未知的情況下進(jìn)行基因克隆的在蛋白質(zhì)產(chǎn)物未知的情況下進(jìn)行基因克隆的策略。策略。蛋白蛋白酶消化、分離酶消化、分離氨基酸序列測(cè)定氨基酸序列測(cè)定設(shè)計(jì)合成寡核苷酸設(shè)計(jì)合成寡核苷酸篩選篩選cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)不同多肽片段不同多肽片段家系資料家系資料連鎖分析連鎖分析獲得差異片段獲得差異片段染色體異常染色體異常篩選篩選cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù) 克隆全長(zhǎng)

2、基因克隆全長(zhǎng)基因精細(xì)定位精細(xì)定位消減克隆消減克隆第6頁(yè)/共29頁(yè)8第7頁(yè)/共29頁(yè)9第8頁(yè)/共29頁(yè)10第9頁(yè)/共29頁(yè)11甲甲 型型 血血 友友 病病遺傳方式：遺傳方式：XRXR發(fā)病率：發(fā)病率：1/10,0001/10,000（男）（男）病因：病因：FF基因遺傳性缺陷基因遺傳性缺陷 ( (缺失、點(diǎn)突變、插入、重復(fù)、倒位缺失、點(diǎn)突變、插入、重復(fù)、倒位) ) 基因定位：基因定位：Xq28Xq28 基因全長(zhǎng)基因全長(zhǎng)186kb186kb，含，含2626個(gè)外顯子個(gè)外顯子 臨床表現(xiàn)：外傷后出血不止，關(guān)節(jié)血腫臨床表現(xiàn)：外傷后出血不止，關(guān)節(jié)血腫第10頁(yè)/共29頁(yè)12 F F因子基因的功能克隆因子基因的功能克

3、隆功能克隆是從功能克隆是從蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)著手進(jìn)行基因克隆的策略。著手進(jìn)行基因克隆的策略。因子因子 多肽多肽 不同多肽片段不同多肽片段蛋白酶消化蛋白酶消化分離分離氨基酸序列測(cè)定氨基酸序列測(cè)定設(shè)計(jì)合成寡核苷酸設(shè)計(jì)合成寡核苷酸篩選篩選cDNA文庫(kù)文庫(kù)第11頁(yè)/共29頁(yè)13通過(guò)動(dòng)物模型鑒定疾病基因通過(guò)動(dòng)物模型鑒定疾病基因第12頁(yè)/共29頁(yè)14第13頁(yè)/共29頁(yè)15第14頁(yè)/共29頁(yè)16第15頁(yè)/共29頁(yè)17基于染色體異常的基因定位基于染色體異常的基因定位第16頁(yè)/共29頁(yè)18連鎖分析連鎖分析第17頁(yè)/共29頁(yè)19確定致病基因確定致病基因o突變篩查：在家系中該突變與表型共分離是最主要的證據(jù)o表型拯救：有些

4、導(dǎo)致疾病的突變通常引起基因功能的喪失，而且其表型是可逆的。如果從一個(gè)患者的細(xì)胞中能夠發(fā)現(xiàn)基因突變的表型，我們就可以檢測(cè)轉(zhuǎn)染了候選基因野生型等位基因的表達(dá)載體是否能夠“拯救”突變并恢復(fù)正常的表型o建立疾病的小鼠模型：如果能夠在某一家系中確定一個(gè)致病基因，但又無(wú)法利用更多的無(wú)關(guān)患者來(lái)驗(yàn)證，通過(guò)構(gòu)建小鼠模型來(lái)驗(yàn)證。對(duì)于功能喪失性突變導(dǎo)致的表型可以通過(guò)制作基因敲除（knock-out）小鼠。對(duì)于功能獲得性突變導(dǎo)致的表型或者突變效應(yīng)不清楚的表型，可以制作突變基因敲入（knock-in）模型第18頁(yè)/共29頁(yè)20第19頁(yè)/共29頁(yè)21Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良型肌營(yíng)養(yǎng)不良（ Duchenne muscu

5、lar dystrophy, DMD）n遺傳方式：遺傳方式： XRn發(fā)病率：發(fā)病率：1/3400（男）（男）n臨床表現(xiàn)：雙下肢臨床表現(xiàn)：雙下肢肌無(wú)力、肌無(wú)力、Gower征、腓腸征、腓腸肌假性肥大、進(jìn)行性肌萎縮（一般肌假性肥大、進(jìn)行性肌萎縮（一般20歲）。歲）。n病因：病因：DMD基因突變，基因突變，抗肌萎縮蛋白（抗肌萎縮蛋白（dystrophin）。n基因定位：基因定位：，全長(zhǎng)，全長(zhǎng)2,400kb，含，含79個(gè)外顯子，個(gè)外顯子，是已知最大的致病基因。是已知最大的致病基因。第20頁(yè)/共29頁(yè)22Gower綜合征綜合征第21頁(yè)/共29頁(yè)23 DMD DMD基因的定位克隆基因的定位克隆定位克隆是在定位克隆是在蛋白質(zhì)產(chǎn)物蛋白質(zhì)產(chǎn)物未知的情況下進(jìn)行基因克隆的策略未知的情況下進(jìn)行基因克隆的策略。家系資料家系資料 精細(xì)定位精細(xì)定位 消減克隆消減克隆連鎖分析連鎖分析獲得差異片段獲得差異片段染色體異常染色體異常篩選篩選cDNA文庫(kù)文