1、 2002年年12月月30日，日， 兩場籌備了兩場籌備了10年的年的“太太空婚禮空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞植物細胞“新人新人”黃花煙草黃花煙草和和革新一號煙草革新一號煙草葉肉細胞葉肉細胞原原生質體生質體，動物細胞動物細胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴細胞淋巴細胞和和骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞，兩批新人同時在，兩批新人同時在 “產房產房”電融電融合儀內孕育新生命。合儀內孕育新生命。“太空婚禮太空婚禮”植物體細胞雜交技術植物體細胞雜交技術動物細胞融合技術動物細胞融合技術(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細胞雜交過程示意圖A細胞細胞B細胞細胞人工誘導人工誘

2、導1.11.1動物動物細胞融合的概念細胞融合的概念雜交細胞雜交細胞 動物細胞融合（也稱細胞雜動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指交）：是指兩個或多個細胞兩個或多個細胞融融合形成一個合形成一個單核細胞單核細胞的過程。的過程。一、動物細胞融合一、動物細胞融合閱讀課本P52及識圖2-23，思考以下問題：1.1.動物細胞融合原理？動物細胞融合原理？2.2.動物細胞融合誘導的手段？動物細胞融合誘導的手段？3.3.動物細胞融合融合后細胞的類型？動物細胞融合融合后細胞的類型？4.4.動物細胞融合中動物細胞融合中ABAB雜種細胞遺傳物質雜種細胞遺傳物質有什么特點？有什么特點？5.5.意義？意義？細胞膜的流動性細

3、胞膜的流動性滅活病毒、滅活病毒、PEGPEG、電激等、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞形成完整的雜交細胞誘導的手段？誘導的手段？融合后細胞的類型？融合后細胞的類型？ABAB雜種細胞遺傳物質雜種細胞遺傳物質有什么特點？有什么特點？三種三種AAAA、ABAB、BBBB（A A、B B）含兩種生物的遺傳物質含兩種生物的遺傳物質1.21.2動物細胞融合過程動物細胞融合過程原理？原理？1.21.2動物細胞融合過程動物細胞融合過程 為什么滅活的病為什么滅活的病毒能作誘導劑毒能作誘導劑？滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性因為滅活的病毒能使細因為滅

4、活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融胞膜打開，細胞發生融合合用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞細胞核核滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞膜連接細胞融合，形成雜交細胞細胞融合，形成雜交細胞（細胞膜具有一定的流動性）（細胞膜具有一定的流動性）1.31.3動物動物細胞融合技術的意義和應用細胞融合技術的意義和應用比較項比較項目目細胞融合細胞融合的原理的原理細胞融合的細胞融合的方法方法誘導手

5、段誘導手段用途用途植物體植物體細胞雜細胞雜交交細胞膜的細胞膜的流動性流動性纖維素酶、纖維素酶、果膠酶果膠酶去除去除細胞壁后誘細胞壁后誘導原生質體導原生質體融合融合離心、電刺離心、電刺激、振動、激、振動、聚乙二醇聚乙二醇克服遠源克服遠源雜交不親雜交不親和，獲得和，獲得雜種植株雜種植株動物細動物細胞融合胞融合細胞膜的細胞膜的流動性流動性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使細胞分散使細胞分散后誘導細胞后誘導細胞融合融合除應用植物除應用植物細胞雜交手細胞雜交手段外，段外，還有還有滅活病毒滅活病毒獲得雜種獲得雜種細胞、細胞、制備制備單克隆抗單克隆抗體體1.4 1.4 比較動、植物細胞雜交技術比較動、植物細胞雜交技術【

6、例例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是能使動物細胞融合的特有的誘導因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動振動【例例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質有何特點（融合后的雜交細胞的遺傳物質有何特點（ ）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息 B.能無限增殖能無限增殖 C.可形成新個體可形成新個體 D.培養過程會貼壁培養過程會貼壁【例例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（動物細胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠源雜交不親和克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育新物種 D.生產雜種細胞生產雜種細

7、胞 BBA抗體：能夠與抗原發生特抗體：能夠與抗原發生特異性結合的異性結合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產生抗體的細胞是能產生抗體的細胞是漿細漿細胞（即效應胞（即效應B細胞）。細胞）。二、單克隆抗體二、單克隆抗體抗體的傳統生產方法抗體的傳統生產方法抗原抗原 反復注射動物反復注射動物從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點：該法制備抗體的缺點：產量低、純度低，且抗產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度體的特異性差、靈敏度低。低。讀下面一段資料，讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念 人們發現，在動物發生免疫反應的過程中，體內的人們發現，在動物發生免疫反應的過程

8、中，體內的B B細胞細胞可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B B細胞只細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個單一抗體，必須用單個B B細胞進行無性繁殖，即克隆。細胞進行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆單克隆抗體：單個抗體：單個B B細胞克隆產生的細胞克隆產生的化學化學性質單一、特異性強性質單一、特異性強的抗體的抗體提示提示1 1：對：對B B細胞進行細胞培養可行嗎？細胞進行細胞培養可行嗎？提示提示2 2：我們所學的哪種

9、細胞是可以無限增殖的？：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：問題：如何大量生產單克隆抗體？請嘗試設如何大量生產單克隆抗體？請嘗試設計一個方案。計一個方案。2.2單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養技術動物細胞培養技術設計方案：設計方案：動物細胞融合技術動物細胞融合技術單克隆單克隆抗體抗體 既能產生特異性抗體，既能產生特異性抗體， 又能大量增殖的細胞又能大量增殖的細胞為什么給小鼠注射特定的為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 會有幾種融合方式？會

10、有幾種融合方式？ 雜交瘤細胞是如何篩選出雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？來的？有何特點？ 是否所有的雜交瘤細胞都是否所有的雜交瘤細胞都能產生專一性抗體？能產生專一性抗體？ 如何大規模進行培養得到如何大規模進行培養得到大量的單克隆抗體？大量的單克隆抗體？BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養基擇性培養基：只有只有雜交瘤雜交瘤細胞細胞才能存才能存活活獲得產生相應獲得產生相應抗體的抗體的B B細胞細胞（二選）：篩（二選）：篩選獲得產生所選獲得產生所需抗體的雜交需抗體的雜交瘤細胞瘤細胞單抗制備過程分哪幾步？單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克

11、隆抗請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？序是？ 2.3單克隆抗體的應用單克隆抗體的應用診斷試劑診斷試劑最廣泛應用最廣泛應用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優點：單克隆抗體最主要的優點：特異性強，靈敏特異性強，靈敏度高，并能大量制備。度高，并能大量制備。“生物導彈生物導彈” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 單抗導向，藥物為彈頭單抗導向，藥物為彈頭主要用于治療主要用于治療癌癥治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成癌藥物，形成“生物導彈生物

12、導彈”，準確殺傷癌變細胞。準確殺傷癌變細胞。【例例4 4】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經培養可產生大量的單合，得到雜交細胞，經培養可產生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（ ）A.A.經過免疫的經過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 C.C.經過免疫的經過免疫的T T淋巴淋巴細胞細胞B.B.不經過免疫的不經過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.不經過免疫的不經過免疫的B B淋淋巴細胞巴細胞【例例5 5】單克隆抗體是由下列哪種細胞產生的單克隆抗體是由下列哪種細胞產生的 （ ）B B淋巴細胞淋巴細胞 B BT

13、 T淋巴細胞淋巴細胞 C C骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 D D雜交瘤細胞雜交瘤細胞AD【例例6】用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中列實驗步驟中錯誤錯誤的是（的是（ ）A A將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的B B淋淋巴細胞巴細胞B B用纖維素酶處理用纖維素酶處理B B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C C用聚乙二醇作誘導劑，促使能產生抗體的用聚乙二醇作誘導劑，促使能產生抗體的B B淋淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D D篩選雜交細胞，并從中選出能產生所需抗體的篩選雜交細胞，并

14、從中選出能產生所需抗體的細胞群，培養后提取單克隆抗體細胞群，培養后提取單克隆抗體B兩個過程兩個過程動物細胞培養過程動物細胞培養過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導細胞融合的新方法一個誘導細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優勢單克隆抗體特異性一個優勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優勢強、靈敏度高的優勢(1)(1)若若A A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B B細胞是取自小鼠細胞是取自小鼠體內的體內的 細胞，細胞，從小鼠體內提取分離該細胞之從小鼠體內提取分離該細胞之前，應給小鼠注射前，應給小鼠注射_類物質。類

15、物質。（2）d過程過程是一個是一個_過程，該過程的進過程，該過程的進行常用行常用_或或_的誘導。的誘導。(3)(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成 種種類型的類型的C C細胞，因此需用細胞，因此需用_培養基篩選出培養基篩選出D D細細胞用于培養，胞用于培養，D D細胞的名稱是細胞的名稱是 ，其特點，其特點是是_。效應效應B抗原抗原細胞融合細胞融合聚乙二醇聚乙二醇 滅活的病毒滅活的病毒選擇性選擇性 3既能無限增殖又能產生特異性抗體既能無限增殖又能產生特異性抗體雜交瘤細胞雜交瘤細胞(4)(4)在培養時通過在培養時通過_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D

16、 D細細胞體外培養需要注意的條件是（要求答胞體外培養需要注意的條件是（要求答5 5項）項）_。（5 5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規抗體相比，其特點是，與常規抗體相比，其特點是_。特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高無菌、無毒的環境；充足的營養；適宜的溫度和無菌、無毒的環境；充足的營養；適宜的溫度和pHpH；適宜的氣體環境適宜的氣體環境1515、（1）單克隆抗體是指）單克隆抗體是指 。（2 2）制備單克隆抗體的步驟：）制備單克隆抗體的步驟：將將_注入小鼠體內，從小鼠脾臟中獲得淋巴細注入小鼠體內，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少胞，其中

17、至少1 1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。將步驟獲得的將步驟獲得的B B淋巴細胞與步驟培養的骨髓瘤細胞淋巴細胞與步驟培養的骨髓瘤細胞在在_的誘導下融合。的誘導下融合。將誘導后產生的多種細胞，放在將誘導后產生的多種細胞，放在_培養基的多孔培養基的多孔培養板上培養，篩選。培養板上培養，篩選。這樣獲得的雜交瘤細胞既具有這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B B淋巴細胞淋巴細胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本領。的本領。檢測和分離帶有抗檢測和分離帶有抗X X抗體的陽性細胞，培養板中每孔放抗體的陽性細胞，培養板中每孔放一個細胞進行培養。一個細胞進行培養。將陽性細胞進行增殖，從而制備

18、出大量抗該抗原的單克將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。隆抗體。化學性質單一，特異性強的抗體化學性質單一，特異性強的抗體抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇選擇性選擇性無限增殖無限增殖產生專一抗體產生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養法，可獲得體外培養法，可獲得10 g/mL的抗體；的抗體；動物體內動物體內誘生法可獲得誘生法可獲得520mmg/mL的抗體。你選擇的方法及原的抗體。你選擇的方法及原因是因是 。（4 4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的為它是用小鼠的_細胞制備的，其化學本質是細胞制備的，其化學本質是_，應用于人體，會作為，應用于人體，會作為 產產生生 ，解決這個問題的方法是，解決這個問題的方法是_。大量生產選，小規模生產選大量生產選，小規模生產選效應效應B蛋白質蛋白質異物異物免疫反應免疫反應采用人的效應采用人的效應B細胞制備細胞制備15、右圖為某同學根據雜交瘤技術、右圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌抗的方法，設