1、實驗二蛋白質的呈色反應，沉淀反應實驗人：劉彥汶 學 號：20100331024 班 級：針外2010七同組人：曲 暢 試驗日期：2012年3月15日 指導老師：路雪雅一 實驗目的1 了解蛋白質的性質。2 掌握蛋白質的鑒定方法。3 理解蛋白質呈色反應和沉淀反應原理。二 實驗內容1 蛋白質的呈色反應。2 蛋白質的沉淀反應。三 實驗器材水浴鍋（100攝氏度），試管（若干），燒杯，一次性滴管，酒精燈，漏斗，火柴，濾紙四 實驗試劑11：10雞蛋白溶液 210%NaOH 31%硫酸銅 4尿素 501%茚三酮乙醇液 6025%丙氨酸溶液 7飽和硫酸銨溶液 8固體硫酸銨 905%NaOH1005%硫酸鋅 11

2、10%磺基水楊酸 1210%Hcl 131%HAc 1410%HAc15.無離子水五 實驗原理及操作步驟（一） 蛋白質的呈色反應蛋白質的呈色反應是蛋白質中某些氨基酸特殊基團與一定的化學試劑作用而呈現的各種顏色反應，可作為檢查蛋白質是否存在的參考。另外，不同的蛋白質中氨基酸的種類及含量各不相同，而在某些蛋白質內還可能缺乏呈某種顏色反應的氨基酸。因此不但不同蛋白質呈色反應的強度不同，而且某些呈色反應在某種蛋白質可能不存在。本實驗操作兩種呈色反應：雙縮脲反應與茚三酮反應，用以比較和鑒別不同的蛋白質。1 雙縮脲反應【實驗原理】在濃堿液中，雙縮脲能與硫酸銅結合生成紫色或紫紅色的復合物，這一呈色反應為雙縮

3、脲反應，凡含有兩個及多個肽鍵（酰胺鍵）的化合物都可能發生此反應，故蛋白質及二肽以上的物質都有此反應，但除肽鍵外，有些基團如CSNH，C（NH2）NH等也有雙縮脲反應，因此，一切蛋白質或多肽都有雙縮脲反應，但有雙縮脲反應的不一定都是蛋白質或多肽。【操作】（1） 取小試管一支，加1：10雞蛋白液2滴，10%NaOH溶液5滴及1%硫酸銅溶液2滴，混勻，可見 溶液變成紫色。（2） 另取一小試管，加一小匙尿素（綠豆大小），小火加熱至熔，嗅其氣味為（臭雞蛋味）。繼續加熱使之凝固，這固體是（雙縮脲），加水10滴，10%NaOH溶液5滴，1%硫酸銅溶液2滴，可見 白色固體溶解，后溶液變紫色。實驗結論在過堿條件

4、下，蛋白質可以和硫酸銅發生雙雙縮脲反應，但有雙縮脲反應的不一定都是蛋白質或多肽。2 茚三酮反應【實驗原理】凡含有自由氨基的化合物例如蛋白質，多肽，各種氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸例外）和其它伯胺化合物（包括氨）與茚三酮共熱時，能生成紫藍色化合物，這種反應即茚三酮反應。【操作】注意：用酒精燈加熱時，酒精燈不要隨便移動，加熱試管口不能對著人，不能用吹氣的方式熄滅酒精燈，以免出現危險情況。大試管121：10雞蛋白溶液/滴60丙氨酸溶液/滴06蒸餾水/滴101001%茚三酮乙醇液/滴66混勻，水浴鍋加熱約5分鐘，待冷卻后觀察結果結果溶液變成淡紫色溶液變成紫色實驗結論1號試管中，蛋白質與茚三酮共熱時，發生茚

5、三酮反應；2號試管中，由于丙氨酸含有自由氨基，而發生茚三酮反應，由此得出，含有自由氨基的化合物與茚三酮共熱時能發生茚三酮反應。（二） 蛋白質的沉淀反應當維持蛋白質膠體溶液的穩定因素（水化膜和電荷）遭到破壞時，蛋白質析出。如果是非變性沉淀，例如加入中性鹽或者在低溫下加入有機溶劑脫水，則除去沉淀劑后，蛋白質仍可溶解，此即可逆的沉淀反應。如果是變性沉淀，例如加入重金屬鹽類，生物堿試劑或加熱，則沉淀劑不易除去，沉淀常不能再溶解，此即不可逆的沉淀反應。1. 蛋白質的鹽析【實驗原理】水溶液中的蛋白質在高濃度的中性鹽硫酸銨，硫酸鎂，氯化鈉等中析出的現象，稱為鹽析作用。鹽析作用包括兩種過程：1）大量電解質破壞

6、了蛋白質的水化膜從而出現沉淀。2）電解質中和了蛋白質分子所帶的電荷而沉淀。中性鹽能否沉淀各種蛋白質常決定于中性鹽的濃度，蛋白質的種類，溶液的pH值以及蛋白質的膠體顆粒。顆粒大者比顆粒小者容易沉淀，如球蛋白多在半飽和的硫酸銨溶液中析出，而清蛋白常在飽和的硫酸銨溶液中析出。【操作】（1） 取5ml雞蛋白溶液于大試管中，加入等量飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置20分鐘后，觀察現象是 溶液中有少量的白色沉淀。（2） 過濾，收集透明濾液，濾液中會有清蛋白，若溶液混濁，須重復過濾至透明為止。（3） 取1ml濾液加固體硫酸銨（0.5g）使達到飽和，邊加邊振搖到溶液出現混濁，再向混濁液加1.5-2.0ml水,觀察現

7、象是 先產生明顯的白色沉淀加水后沉淀逐漸溶解溶液變澄清實驗結論第一步產生的沉淀為球蛋白，第三步中產生的沉淀為清蛋白。水溶液中的蛋白質可在高濃度的中性鹽中析出，而蛋白質的膠體顆粒的大小不同，則析出所需的中性鹽的濃度也不同。2重金屬鹽類沉淀蛋白質【實驗原理】蛋白質在堿性溶液中帶有較多負電荷，當它與帶正電荷的重金屬離子結合時即可生成不溶解的沉淀，重金屬鹽類沉淀蛋白質能引起蛋白質的變性，而中性鹽類即使加入量很多也不改變蛋白質原來的性質。【操作】試管121：10雞蛋白溶液/ml1105%NaOH/滴1010%Hcl/滴0105%ZnSO4/滴66現象溶液變渾濁溶液無明顯變化實驗結論在堿性溶液中，帶負電荷

8、的蛋白質與帶正電荷的重金屬離子結合而生成不溶解的沉淀，而酸性條件下，帶負電荷的蛋白質與帶正電荷的重金屬離子則不會產生沉淀。（三） 蛋白質變性與沉淀【實驗原理】由于溫度升高破壞了蛋白質分子內部的化學鍵，引起蛋白質變性，因此幾乎所有蛋白質都可因加熱而凝固。蛋白質在其等電點時不帶電荷，或帶等量的正負電荷，此時若溫度升高則容易出現沉淀。在酸性或堿性溶液中，蛋白質分子帶有正或負電荷，較為穩定。如果過酸或過堿則易變性，此時若溫度升高，雖變性卻不沉淀。在冷卻后加酸或加堿調節PH值達蛋白質等電點時則有沉淀析出。【操作】（1）取4支試管，編號，按下表加入試劑試劑（滴）/管號12341：10雞蛋白溶液202020

9、201%醋酸010010%醋酸0010005%NaOH0005將4支試管同時放在沸水浴中加熱5分鐘，觀察并記錄各管蛋白質出現的現象，解釋變化原因現象溶液變渾濁溶液變渾濁，較試管一更明顯無變化無變化原因溫度升高破壞了蛋白質分子內部的化學鍵，引起蛋白質變性因為溶液中加入1%的醋酸后更接近等電點，所以沉淀現象更明顯因為溶液過酸則使其易變性，溫度升高，雖變性卻不沉淀因為溶液過堿則使其易變性，溫度升高，雖變性卻不沉淀（2）取出試管，冷卻后于第3管中慢慢滴入10% NaOH溶液，觀察現象是溶液先變渾濁，然后渾濁慢慢溶解，其原因是 加入堿溶液后使得溶液PH值達到蛋白質的等電點，所以有沉淀析出，加入過量的堿溶液使溶液偏離等電點，沉淀溶解。（3）向第4管中慢慢滴入10%醋酸，觀察現象為 溶液先變輕微的渾濁，然后渾濁慢慢溶解，其原因是 加入酸溶液后使得溶液PH值達到蛋白質的等電點，所以有沉淀析出，加入過量的酸溶液使溶液偏離等電點，沉淀溶解。實