1、實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)，沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)人：劉彥汶 學(xué) 號(hào)：20100331024 班 級(jí)：針外2010七同組人：曲 暢 試驗(yàn)日期：2012年3月15日 指導(dǎo)老師：路雪雅一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解蛋白質(zhì)的性質(zhì)。2 掌握蛋白質(zhì)的鑒定方法。3 理解蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)原理。二 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)。2 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。三 實(shí)驗(yàn)器材水浴鍋（100攝氏度），試管（若干），燒杯，一次性滴管，酒精燈，漏斗，火柴，濾紙四 實(shí)驗(yàn)試劑11：10雞蛋白溶液 210%NaOH 31%硫酸銅 4尿素 501%茚三酮乙醇液 6025%丙氨酸溶液 7飽和硫酸銨溶液 8固體硫酸銨 905%NaOH1005%硫酸鋅 11

2、10%磺基水楊酸 1210%Hcl 131%HAc 1410%HAc15.無離子水五 實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟（一） 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)是蛋白質(zhì)中某些氨基酸特殊基團(tuán)與一定的化學(xué)試劑作用而呈現(xiàn)的各種顏色反應(yīng)，可作為檢查蛋白質(zhì)是否存在的參考。另外，不同的蛋白質(zhì)中氨基酸的種類及含量各不相同，而在某些蛋白質(zhì)內(nèi)還可能缺乏呈某種顏色反應(yīng)的氨基酸。因此不但不同蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)的強(qiáng)度不同，而且某些呈色反應(yīng)在某種蛋白質(zhì)可能不存在。本實(shí)驗(yàn)操作兩種呈色反應(yīng)：雙縮脲反應(yīng)與茚三酮反應(yīng)，用以比較和鑒別不同的蛋白質(zhì)。1 雙縮脲反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)原理】在濃堿液中，雙縮脲能與硫酸銅結(jié)合生成紫色或紫紅色的復(fù)合物，這一呈色反應(yīng)為雙縮

3、脲反應(yīng)，凡含有兩個(gè)及多個(gè)肽鍵（酰胺鍵）的化合物都可能發(fā)生此反應(yīng)，故蛋白質(zhì)及二肽以上的物質(zhì)都有此反應(yīng)，但除肽鍵外，有些基團(tuán)如CSNH，C（NH2）NH等也有雙縮脲反應(yīng)，因此，一切蛋白質(zhì)或多肽都有雙縮脲反應(yīng)，但有雙縮脲反應(yīng)的不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。【操作】（1） 取小試管一支，加1：10雞蛋白液2滴，10%NaOH溶液5滴及1%硫酸銅溶液2滴，混勻，可見 溶液變成紫色。（2） 另取一小試管，加一小匙尿素（綠豆大小），小火加熱至熔，嗅其氣味為（臭雞蛋味）。繼續(xù)加熱使之凝固，這固體是（雙縮脲），加水10滴，10%NaOH溶液5滴，1%硫酸銅溶液2滴，可見 白色固體溶解，后溶液變紫色。實(shí)驗(yàn)結(jié)論在過堿條件

4、下，蛋白質(zhì)可以和硫酸銅發(fā)生雙雙縮脲反應(yīng)，但有雙縮脲反應(yīng)的不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。2 茚三酮反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)原理】凡含有自由氨基的化合物例如蛋白質(zhì)，多肽，各種氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸例外）和其它伯胺化合物（包括氨）與茚三酮共熱時(shí)，能生成紫藍(lán)色化合物，這種反應(yīng)即茚三酮反應(yīng)。【操作】注意：用酒精燈加熱時(shí)，酒精燈不要隨便移動(dòng)，加熱試管口不能對(duì)著人，不能用吹氣的方式熄滅酒精燈，以免出現(xiàn)危險(xiǎn)情況。大試管121：10雞蛋白溶液/滴60丙氨酸溶液/滴06蒸餾水/滴101001%茚三酮乙醇液/滴66混勻，水浴鍋加熱約5分鐘，待冷卻后觀察結(jié)果結(jié)果溶液變成淡紫色溶液變成紫色實(shí)驗(yàn)結(jié)論1號(hào)試管中，蛋白質(zhì)與茚三酮共熱時(shí)，發(fā)生茚

5、三酮反應(yīng)；2號(hào)試管中，由于丙氨酸含有自由氨基，而發(fā)生茚三酮反應(yīng)，由此得出，含有自由氨基的化合物與茚三酮共熱時(shí)能發(fā)生茚三酮反應(yīng)。（二） 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)當(dāng)維持蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定因素（水化膜和電荷）遭到破壞時(shí)，蛋白質(zhì)析出。如果是非變性沉淀，例如加入中性鹽或者在低溫下加入有機(jī)溶劑脫水，則除去沉淀劑后，蛋白質(zhì)仍可溶解，此即可逆的沉淀反應(yīng)。如果是變性沉淀，例如加入重金屬鹽類，生物堿試劑或加熱，則沉淀劑不易除去，沉淀常不能再溶解，此即不可逆的沉淀反應(yīng)。1. 蛋白質(zhì)的鹽析【實(shí)驗(yàn)原理】水溶液中的蛋白質(zhì)在高濃度的中性鹽硫酸銨，硫酸鎂，氯化鈉等中析出的現(xiàn)象，稱為鹽析作用。鹽析作用包括兩種過程：1）大量電解質(zhì)破壞

6、了蛋白質(zhì)的水化膜從而出現(xiàn)沉淀。2）電解質(zhì)中和了蛋白質(zhì)分子所帶的電荷而沉淀。中性鹽能否沉淀各種蛋白質(zhì)常決定于中性鹽的濃度，蛋白質(zhì)的種類，溶液的pH值以及蛋白質(zhì)的膠體顆粒。顆粒大者比顆粒小者容易沉淀，如球蛋白多在半飽和的硫酸銨溶液中析出，而清蛋白常在飽和的硫酸銨溶液中析出。【操作】（1） 取5ml雞蛋白溶液于大試管中，加入等量飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置20分鐘后，觀察現(xiàn)象是 溶液中有少量的白色沉淀。（2） 過濾，收集透明濾液，濾液中會(huì)有清蛋白，若溶液混濁，須重復(fù)過濾至透明為止。（3） 取1ml濾液加固體硫酸銨（0.5g）使達(dá)到飽和，邊加邊振搖到溶液出現(xiàn)混濁，再向混濁液加1.5-2.0ml水,觀察現(xiàn)

7、象是 先產(chǎn)生明顯的白色沉淀加水后沉淀逐漸溶解溶液變澄清實(shí)驗(yàn)結(jié)論第一步產(chǎn)生的沉淀為球蛋白，第三步中產(chǎn)生的沉淀為清蛋白。水溶液中的蛋白質(zhì)可在高濃度的中性鹽中析出，而蛋白質(zhì)的膠體顆粒的大小不同，則析出所需的中性鹽的濃度也不同。2重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)【實(shí)驗(yàn)原理】蛋白質(zhì)在堿性溶液中帶有較多負(fù)電荷，當(dāng)它與帶正電荷的重金屬離子結(jié)合時(shí)即可生成不溶解的沉淀，重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)能引起蛋白質(zhì)的變性，而中性鹽類即使加入量很多也不改變蛋白質(zhì)原來的性質(zhì)。【操作】試管121：10雞蛋白溶液/ml1105%NaOH/滴1010%Hcl/滴0105%ZnSO4/滴66現(xiàn)象溶液變渾濁溶液無明顯變化實(shí)驗(yàn)結(jié)論在堿性溶液中，帶負(fù)電荷

8、的蛋白質(zhì)與帶正電荷的重金屬離子結(jié)合而生成不溶解的沉淀，而酸性條件下，帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)與帶正電荷的重金屬離子則不會(huì)產(chǎn)生沉淀。（三） 蛋白質(zhì)變性與沉淀【實(shí)驗(yàn)原理】由于溫度升高破壞了蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的化學(xué)鍵，引起蛋白質(zhì)變性，因此幾乎所有蛋白質(zhì)都可因加熱而凝固。蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)時(shí)不帶電荷，或帶等量的正負(fù)電荷，此時(shí)若溫度升高則容易出現(xiàn)沉淀。在酸性或堿性溶液中，蛋白質(zhì)分子帶有正或負(fù)電荷，較為穩(wěn)定。如果過酸或過堿則易變性，此時(shí)若溫度升高，雖變性卻不沉淀。在冷卻后加酸或加堿調(diào)節(jié)PH值達(dá)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)則有沉淀析出。【操作】（1）取4支試管，編號(hào)，按下表加入試劑試劑（滴）/管號(hào)12341：10雞蛋白溶液202020

9、201%醋酸010010%醋酸0010005%NaOH0005將4支試管同時(shí)放在沸水浴中加熱5分鐘，觀察并記錄各管蛋白質(zhì)出現(xiàn)的現(xiàn)象，解釋變化原因現(xiàn)象溶液變渾濁溶液變渾濁，較試管一更明顯無變化無變化原因溫度升高破壞了蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的化學(xué)鍵，引起蛋白質(zhì)變性因?yàn)槿芤褐屑尤?%的醋酸后更接近等電點(diǎn)，所以沉淀現(xiàn)象更明顯因?yàn)槿芤哼^酸則使其易變性，溫度升高，雖變性卻不沉淀因?yàn)槿芤哼^堿則使其易變性，溫度升高，雖變性卻不沉淀（2）取出試管，冷卻后于第3管中慢慢滴入10% NaOH溶液，觀察現(xiàn)象是溶液先變渾濁，然后渾濁慢慢溶解，其原因是 加入堿溶液后使得溶液PH值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，所以有沉淀析出，加入過量的堿溶液使溶液偏離等電點(diǎn)，沉淀溶解。（3）向第4管中慢慢滴入10%醋酸，觀察現(xiàn)象為 溶液先變輕微的渾濁，然后渾濁慢慢溶解，其原因是 加入酸溶液后使得溶液PH值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，所以有沉淀析出，加入過量的酸溶液使溶液偏離等電點(diǎn)，沉淀溶解。實(shí)