1、微生物純種的分離方法自然界中的微生物總是雜居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存著多種微生物。要研究其中的某一種微生物，首先必須將它分離出來。下面介紹幾種純種微生物的分離方法。平板劃線分離 將已經熔化的培養基倒入培養皿中制成平板，用接種環沾取少量待分離的材料，在培養基表面平行或分區劃線(圖5-5)，然后，將培養皿放入恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成純種的單個菌落。液體稀釋法 將待分離的樣品經過大量稀釋后，取稀釋液均勻地涂布在培養皿中的培養基表面，培養后就可能得到單個菌落。利用選擇培養基進行分離 不同的微生物對不同的試劑、染料、抗生素等

2、具有不同的抵抗能力，利用這些特點可配制出適合某種微生物生長而限制其他微生物生長的選擇培養基。用這種培養基來培養微生物就可以達到純種分離的目的。菌絲尖端切割 這種方法適于絲狀真菌。用無菌的解剖刀切取位于菌落邊緣的菌絲的尖端，將它們移到合適的培養基上培養后，就能得到新菌落三、細菌的分離與計數（一）背景知識介紹1.細菌的分離與純化自然界的細菌總是以雜居的方式存在，如土壤、水、空氣等都分布著種類繁多的細菌。我們如何知道這些雜居的細菌是哪種細菌呢？這就需要將這些帶菌的材料中混雜的細菌，經過稀釋，使其分散成單個存在的菌體，在固體培養基平板上，長成肉眼可見并具有一定特征的菌落。這些菌落分離出來，進行純培養。

3、所謂純培養即在一個培養物中，所有的細菌都是由一個細菌分裂繁殖而產生的后代。這種獲得單一菌株純培養的的方法稱為細菌的分離。常用的分離方法有稀釋法和劃線法。（二）課題提出：我們的身體和周圍的環境有大量的細菌，細菌與我們的生活和健康密切相關。但是，自然存在的細菌都混雜在一起，我們要想研究和了解各種細菌的形態結構和功能，就要對其進行分離純化，才能進行深入的研究。如對一些致病菌的研究，食品衛生的研究，微生物工業的研究等。在研究過程中，有時需要調查和檢測細菌密度，則需要統計細菌的數量。如對環境污染（水污染、空氣污染、食品污染）的監測和檢查，現在公布的空氣污染度中，有一項即是細菌數量。所以，分離與計數是對細

4、菌研究的基本方法。如果調查不同深度土壤中細菌的種類和數量，通過對樣品進行分離和計數，然后再進行比較。對使人生病的細菌，其檢查也要采取此方法。如當皮膚受傷時則容易發炎，皮膚中的那些細菌在引起炎癥？再如，食物的變質、蔬菜水果的腐爛、水的污染、生活用水標準的檢測、飲料和食品合格的檢查等，都可以作為課題進行研究。分離與計數是微生物研究中非常基本和常用的方法，涉及面很廣。（三）活動范例【活動課題】 對校園不同環境塵土細菌數量的調查。【課題概述】 土壤中細菌的數量大，種類多。但是不同的土質及土壤的不同深度，細菌的數量和種類是不同的。那么，我們生活的環境中，土壤里的細菌數量和類型有沒有區別呢？教室是人集中的

5、場所，由于人多雜菌也多；操場是學生運動的場所，人雖然很多，但直接暴露在陽光下，其中的細菌會比教室少嗎？【活動過程】（1）樣品的采集：在教室不同方位的角落的地面用刷子，掃取塵土，放入潔凈的容器中；在操場中央及四個角掃取少量的塵土，放入潔凈的容器中。（2）菌液的制備：將教室土樣和操場土樣各稱取10g，分別在火焰旁加入裝有90ml無菌水的三角瓶中，震蕩5分鐘使菌分散。制備成10-1（1/10）的菌懸液。（3）稀釋：準備已滅菌的裝有9ml無菌水的試管14只（每個樣品7支），按10-210-8順序編號。然后用無菌移液管從教室樣品10-1菌懸液中，搖均后吸取1ml放入1號試管，用手輕壓移液管的橡皮頭，吸三

6、次將移液管中的菌懸液洗下并混勻。再用無菌移液管按上面方法稀釋操場塵土樣品。（4）接種培養：準備好經過滅菌的、溫度在50牛肉膏蛋白胨培養基約300ml；經過滅菌直徑9cm的培養皿18套（每個樣品9套），并編號10-6、10-7、10-8，每個稀釋度各3套，即做三個重復以便觀察。待放涼凝固后，將平板倒置放入37恒溫箱中培養12天。（5）結果觀察：經過培養后，平板的表面長出菌落。不同的細菌其菌落的形態也不同；根據平板菌落的數量計算出樣品所含菌數。（6）記錄如下：菌落數：計算3個重復菌落的平均數。平板上菌落數，以第二個稀釋度長有50個左右菌落為最佳（太密了不好數）。如果太密，可進一步稀釋。每毫升活菌數

7、：按上面公式分別計算3個稀釋度的菌數，其計算結果3個稀釋度應很接近，如差距較大，實驗則不夠精確。菌落類型：簡單根據菌落特征，計算3個重復共有幾種（一樣的算一種）。（7）結果分析：根據兩種樣品的細菌數量和菌落種類，分析兩種環境中細菌的分布有什么不同，這種不同與人群密度、周圍環境特點有沒有關系。（8）結論。（四）問題與思考1.有時吃剩飯為什么會鬧肚子：提示，將新鮮的米飯、放置一天的米飯、放置二天的米飯取一定量，接種在固體培養基上培養后進行計數，比較細菌的數量。還可以將剩飯熱后培養進行計數檢查，與沒熱過的進行對比。根據此方法你能設計一些小實驗，對食物的保鮮或防止變質提出新的看法嗎？2.雨后的空氣細菌

8、數量是否減少：雨后，把無菌平板在距離地面一定高度，打開皿蓋，暴露一定時間（一般為510分鐘，如空氣潔凈，可以適當延長時間），經培養后計算菌落數。與沒下雨時的空氣進行對比，比較細菌數量有沒有差距。一般認為，在5分鐘內，100cm2表面上沉降的細菌數量約等于10m2空氣中細菌數量。用此方法還可以檢查教室、實驗室、廁所、花園等處的空氣細菌數量，并對實驗結果進行分析。想一想，多進行戶外活動是否有益健康。3.市售的飲料符合衛生標準嗎：日常生活中，經常喝一些飲料如汽水、牛奶、果汁等，這些飲料是否符合衛生標準呢？市售飲料的種類多，而且魚目混珠。可將你經常喝的幾種飲料接種在：（1）普通固體培養基的平板上進行培

9、養，統計細菌數量；（2）接種在伊紅-美蘭培養基上（參考水中大腸桿菌的檢查），檢查飲料中的大腸桿菌含量。將檢查的結果與生活飲用水標準比較，判斷其是否符合衛生標準。例題 空氣中的含菌量是衡量空氣質量的指標之一。為了檢測學校生物實驗室、教室、校長室、小樹林四個地方空氣中的含菌情況，請利用所提供條件設計一個簡單實驗。 (1)請用100 mL量筒、4副培養皿、煮沸過的洗碗水設計取樣的實驗步驟。(2)請用4支試管、滴管、0.01%亞甲基藍溶液設計檢測的實驗步驟。(3)實驗結果的預測及分析：_(4)你所設計的實驗檢測到的是_細菌的相對數量。答案(1) 用量筒量取等量的煮沸過的洗碗水分別倒人4副培養皿中。 分

10、別將以上4副培養皿暴露放置于題目所說的4個場所。 靜置1-3 d后，同時加蓋取回。(2) 分別取等量放置過的洗碗水放人4支試管中。 在每支試管內滴加5.10滴0.01%亞甲基藍溶液，將試管置于溫暖處。(3)根據4支試管內洗碗水在相同時間內褪色的程度來判定空氣中的含菌量。褪色程度最大的，空氣中的含菌量相對最高;褪色程度最低的，空氣中含菌量最低。(4)好氧性。16題：基因突變、基因重組和染色體變異的比較基因突變基因重組染色體變異概念基因分子結構發生發生改變控制不同性狀的基因重新組合染色體數目或者結構發生改變結果產生新的基因產生新的基因型基因數目或排列順序發生變化應用誘變育種雜交育種多倍體育種和單倍

11、體育種基因重組,基因突變,染色體變異三者的聯系和區別 基因重組是指非等位基因間的重新組合。能產生大量的變異類型，但只產生新的基因型，不產生新的基因。基因重組的細胞學基礎是性原細胞的減數分裂第一次分裂，同源染色體彼此分裂的時候，非同源染色體之間的自由組合和同源染色體的染色單體之間的交叉互換。基因重組是雜交育種的理論基礎。 基因突變是指基因的分子結構的改變，即基因中的脫氧核苷酸的排列順序發生了改變，從而導致遺傳信息的改變。基因突變的頻率很低，但能產生新的基因，對生物的進化有重要意義。發生基因突變的原因是 DNA在復制時因受內部因素和外界因素的干擾而發生差錯。典型實例是鐮刀形細胞貧血癥。基因突變是誘

12、變育種的理論基礎。 染色體變異是指染色體的數目或結構發生改變。重點是數目的變化。染色體組的概念重在理解。一個染色體組中沒有同源染色體，沒有等位基因，但一個染色體組中所包含的遺傳信息是一套個體發育所需要的完整的遺傳信息，即常說的一個基因組。對二倍體生物來說，配子中的所有染色體就是一個染色體組。染色體組數是偶數的個體一般都具有生育能力，但染色體組數是奇數的個體是高度不孕的，如一倍體和三倍體等。23題：41、關于神經內分泌免疫系統調節網絡學說現代醫學最新的進展表明：人體的生命活動并不是僅僅受神經系統的調節，還要接受內分泌系統、免疫系統的復雜調節和影響。機體神經、內分泌和免疫系統共同形成一個復雜廣泛的

13、調節網絡，機體內所有細胞、組織無一不受這個網絡系統的調節和控制，它們既是這個系統的成員，亦接受這個系統的調節，以適應周圍環境的變化，維持機體的正常生理功能，發揮防病和抗病的作用。這就是著名的神經-內分泌-免疫網絡學說。神經、內分泌和免疫系統在生命活動中并不是雜亂無章、各自為政的，三者兩兩之間通過復雜的機制互相作用、互相影響，神經系統是通過神經纖維傳達信息的，內分泌因子則是以血液循環為主要的傳輸渠道，而免疫因子主要以血管、組織液和淋巴管為循行通路，神經內分泌和免疫系統都和心血管系統存在著解剖生理病理上的千絲萬縷的聯系，當機體內外環境發生變化時，中樞神經系統通過整合神經-內分泌-免疫網絡的相互作用

14、調節心輸出量及各部分血管的舒縮變化，從而使各器官、組織之間的血流分配能適應機體當時功能活動的需要，心血管系統的反應調節是系統整合方式作用的主要途徑。從免疫細胞受體研究進展來看，已經表明，神經系統發生變化，會引起內分泌系統的變化，而內分泌系統產生的各類激素作用于免疫系統，必然引起免疫系統功能的變化，與此同時免疫反應也相對地影響中樞神經系統。比如情緒影響人體中的天然殺傷細胞和T細胞的數量及淋巴細胞的反應性。15題：海洋微生物可進行光合作用海洋微生物一種喜鹽細菌，它體中有細菌視紫質。它能將光線轉化成移動電子，成為推動菌體新陳代謝的能量，這也就形成了海洋微生物體內特有的光合作用機制。提示人們將來利用海

15、洋微生物視紫質光合作用產生能量的原理，人類可以制造出生物太陽能電池。（例如熱泉生態系統中的生物是以硫化物作用能源物質）真核生物只進行無性生殖的話，也不符合規律，可見適用孟德爾的遺傳規律的是有性生殖中的主要類型配子生殖，配子生殖的真核為基礎的例61977年，科學家在深海中的火山口周圍發現熱泉。熱泉噴出的海水溫度超過300，并且富含硫化氫和硫酸鹽。令人驚奇的是，在這樣的海水中，竟發現大量的硫細菌。這些細菌通過氧化硫化物和還原二氧化碳來制造有機物，在熱泉口周圍還發現多種無脊椎動物，如大海蛤、蟹、管水母、沒有口也沒有消化道的管居環節動物等。近年來，人們不斷在深海發現這樣的熱泉生態系統。有些科學家認為熱

16、泉口的環境與地球上早期生命所處的環境類擬。請根據以上材料回答：(1)上述硫細菌的同化作用類型是 (2)與一般生態系統相比，深海熱泉生態系統有哪些特殊之處? (3)研究深海熱泉生態系統有什么意義? 解析根據題目材料信息：這些細菌通過氧化硫化物和還原二氧化碳來制造有機物。以H2S為例，則：H2S+O2 SO2+能量(化學能)CO2+H2O (CH2O)可見硫細菌為化能自養型生物。(2)深海熱泉生態系的特殊之處可從無機環境、生產者類群和生態系的能源等三個方面進行描述。(3)閱讀完題干，給人的第一印象是生物的適應性和多樣性超出我們的預料，進而對熱泉生態系生物的抗高溫、高壓能力感到迷惑，還有“有些科學家

17、認為熱泉生態系的環境與地球上早期生命所處的環境類似”，這難道不是生命起源和生物進化的鮮活材料嗎? 答案(1)化能自養型 (2)能源是化學能，不是太陽能 生產者是化能自養細菌，不是綠色植物 無機環境是高溫、高壓、無光環境，不是常溫、常壓、有光環境 (3)豐富人們對生物適應性或多樣性的認識；對研究生物抗高溫、抗高壓的機理有重要價值；對研究生命的起源和生物的進化有一定意義。35題：什么叫基因污染? 基因污染是指經過基因改造后的生物由于具有“雜交”優勢，當它們回到自然環境中往往會獲得更多的生殖機會，同時還有可能對與其相關和相互依存的生物產生影響，破壞原有的生態平衡，進而使被改造過的基因較快地擴散到它的

18、后代中去，使原有種群面臨滅種的危險。據報道，轉基因鮭魚生長速度快、體型較大并有抗寒的特點，逃逸大洋中之后，已對北美地區大西洋和太平洋中野生鮭魚的生態構成威脅；轉基因鮭魚與野生鮭魚的后代不再具有野生鮭魚游動敏捷和定期回游的特點。關于亞甲基藍。亞甲基藍是一種活體染色劑，好氧性細菌將藍色的亞甲基藍陽離子吸收到細菌細胞內，氧化分解亞甲基藍染料，而使其溶液褪色。所以常用于好氧性細菌存在的鑒定和好氧性細菌數量多少的鑒別。1、用放置太久的洗碗水做水質污染實驗時，不能使0.01%亞甲基藍溶液褪色，其合理解釋是( )A.溶解氧太低，好氧細菌已死亡 B.亞甲基藍溶液濃度太低C.好氧細菌大量繁殖D.溶解氧太多解析：

19、0.01%的亞甲基藍天溶液是活體染色劑，不影響生物的正常生理活動.好氧性細菌可以在洗碗水中大量繁殖，將藍色的亞甲基藍陽離子吸收到細菌細胞內，氧化分解亞甲基藍染料，從而使其藍色褪去.故人們常用亞甲基藍作為指示劑，根據藍色的褪色程度來鑒定水質的污染(檢測好氧性細菌的相對數量)程度.當洗碗水放置時間過長時，水中溶解氧太低，好氧性細菌死亡，就不能進行有效地鑒定.答案：A2、取放置一天的洗碗水、河水、自來水各5ml，分別注入標有1、2、3編號的試管。在每支試管中各加510滴0.01%的亞甲基藍溶液，把試管放置在溫暖處，3040min后，管內亞甲基藍褪色的速度依次為（）。A.自來水河水洗碗水B.洗碗水自來

20、水河水C.河水自來水洗碗水D.洗碗水河水自來水分析：污水中的好氧細菌數量與有機物含量成正比，而好氧細菌能氧化分解亞甲基藍染料，使它從藍色變成無色。若水樣中好氧細菌存在越多，則亞甲基藍染液被分解褪色得越快。由于洗碗水內有機物含量最多，所以好氧細菌也最多，因此氧化分解亞甲基藍染料速度最快。而河水中有機物的含量也要高于自來水，好氧細菌在河水中的含量比在自來水中高，所以河水褪色比自來水快。答案應為（D）。3、亞甲基藍是一種活體染色劑，它在溶液中易被好氧性細菌分解，而使其溶液褪色。請以此為實驗原理根據下面所提供實驗材料和用具，設計一個簡單的實驗來驗證飲用生水不利于身體健康。一實驗材料和用具：0.01%亞

21、甲基藍溶液，肉湯，試管，大小燒杯，恒溫箱，滴管，酒精燈，池塘清水，三角架二實驗步驟及其結果：(1) 用燒杯取少量清水，用酒精燈加熱至沸騰，然后冷卻。再煮沸肉湯并冷卻。取兩個試管，分別編號為1號和2號。(2) 在1號試管中加入3毫升清水。在2號試管中加入等量的上述涼開水。在兩支試管中各加入0.5毫升冷卻后的肉湯。(3) 將這兩個試管同時放在恒溫箱(30)中恒溫24小時。(4 )同時取出這兩支試管，在每只試管中滴入10滴亞甲基藍溶液繼續恒溫45小時，同時觀察兩試管中溶液的褪色情況。結果：A試管褪色較快，褪色程度明顯。B試管褪色緩慢，褪色不明顯。三對實驗結果的分析A試管褪色明顯，說明其中含菌量較高，

22、這說明清水比涼開水含較多的細菌，可見生活中不宜喝生水，應喝開水以防病菌進入體內引起疾病。15題：已知某植物光合作用和呼吸作用的最適溫度分別為25和30.圖表示該植物在25時光合強度合光照強度的關系.若將溫度提高到30的條件下(原光照強度和co2濃度等不變).則理論上,圖中a.b.m點的移動方式應該為溫度升高，呼吸作用增強，所以a點下移；光補償點右移；可是30度已經超過了光合作用最適宜的溫度了，所以m點下移。33題：三倍體無籽西瓜的果實里無籽，含糖量比普通西瓜提高了10%左右，吃著特別甜。而且產量高，抗逆性強。1。獲得三倍體西瓜種子時，用二倍體為四倍體提供花粉，如果反交，能否獲得三倍體西瓜種子？

23、用四倍體植株作母本，用二倍體植株作父本，進行雜交，就能在四倍體上結出三倍體的種子。如果反交，能否獲得三倍體的西瓜種子呢？四倍體與二倍體西瓜，無論正交或反交，都能產生三倍體的種子。但是反交獲得的三倍體西瓜的胚珠硬化，種子發育比較困難，形成的三倍體種子難于萌發；且果實品質差，而正交，不但能獲得三倍體的種子，且四倍體的西瓜吃著味道甜美。故獲得三倍體西瓜種子時通常以二倍體為四倍體提供花粉。2。三倍體無籽西瓜的發育過程中需要不需要生長素？若需要，生長素從何而來？三倍體無籽西瓜的發育過程中必需要有生長素促進作用方可進行。那么，三倍體無籽西瓜的發育過程中，生長素又從何而來呢？三倍體的西瓜植株，由于在減數分裂

24、的過程中，染色體的聯會發生紊亂，因而不能形成正常的生殖細胞，胚株并不發育成種子；在三倍體無籽西瓜的培育過程中，也沒有用人工在雌蕊柱頭上涂上一定濃度的生長素溶液；雖然在培育過程中使用了秋水仙素，但這與果實的發育無關。原來，三倍體西瓜植株上的雌蕊要用二倍體西瓜的花粉刺激，子房才能發育成果實，從而結合無籽西瓜。一般來說，生長素在植物體內的合成部位是葉原基、嫩葉和發育中的種子，在這些部位，存在著與生長素合成有關的酶系。在多種酶的催化作用下，植物體內的色氨酸經過氨基轉換、脫羧作用和兩個氧化步驟，最終變成生長素（吲哚乙酸）。在二倍體西瓜的花粉中，除含有少量的生長素外，同樣也含有使色氨酸轉變成生長素的酶系。

25、當二倍體花粉萌發時，形成的花粉管伸入到三倍體植株的子房內并將自身合成生長素的酶體系轉移到其中，從而在子房內仍能合成大量的生長素，促使子房發育成無籽果實。3。三倍體無籽西瓜為什么含糖量比普通西瓜能提高10%，且產量高，抗逆性強？三倍體無籽西瓜的這一系列變異特征，顯然是由于核內染色體加倍，以致等位基因增加而引起的“劑量效應”。當然，由于三倍體西瓜無籽，本當儲藏于種子的子葉中的那部分營養物質，就以糖的形式存在于果實的果肉細胞中了，這也是三倍體無籽西瓜比普通西瓜含糖量高的原因之一。4無籽西瓜中產生種子的機率有多大?無籽西瓜為三倍體，其3=33，三倍體在減數分裂時，每同源的三個染色體在前期聯會時或形成三

26、價體，或形成一個二價體與一個單價體，而二價體在后期正常分離，單價體則隨機分向一極。也就是說，其中的兩條分向一極，一條分向另一極。所以就同源的三個染色體而言，形成2配子與配子的機率各為12（2和配子才是可育配子）,于是三個染色體組減數分裂的結果能形成2和配子的機率共為 2（1/2）的11方=1/2的10方=1/1024。乳糖是還原性糖嗎還原性糖種類：還原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。非還原性糖有蔗糖、淀粉、纖維素等，但它們都可以通過水解生成相應的還原性單糖。 還原性糖概念：還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基或酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。葡萄糖

27、分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，故它們都是還原糖。 還原性糖鑒定： 鑒定原理：生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內都含有還原性基團（游離醛基或游離酮基）。用斐林試劑、班氏試劑、銀氨溶液等可以檢驗生物組織中還原糖存在與否。 （1）利用斐林試劑：斐林試劑由質量濃度為0.1gmL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05gmL的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下：CH2OH(CHOH)4CHO2Cu(OH)2CH2OH(CHOH)4COOHCu2O2H2O用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色棕色磚紅色(沉淀)。 (2)利用班氏試劑：班氏試劑由A液(硫酸銅溶液)，B液(檸檬酸鈉和碳酸溶液)配制而成。將A溶液傾注人B液中，邊加邊攪，如有沉淀可過濾。實驗原理與斐林試劑相似，所不同的是班氏試劑可長期使用。班氏試劑A液中的硫酸銅溶液與B液中的無