1、培養基母液配制培養基配制通常先根據各組分性質，配制成較濃的母液（母液濃度為培養基濃度的若干倍如50或100倍），貯存在冰箱中備用，以后配制培養基時根據用量量取。由于培養基成分較多，如果每配制一次即進行多次稱量（不少成分用量較微），不僅會造成較大的誤差，而且會增加工作量，因而配制母液可使培養基配制方便準確。配制大量成分母液通常為原培養基濃度的20、50或100倍，倍數不宜過高。MS培養基母液及培養基配方法參考表2。大量成分母液經常將CaCl22H2O單獨配制保存，以免長期貯存發生沉淀。若將全部大量成分配在一起時，為防止在混合時發生沉淀，須在各藥品充分溶解后，按表1.2中化合物出現順序混合，氯化鈣

2、最后加入，以免與硫酸鎂形成沉淀.大量成分稱量溶解后，在1000 ml容量瓶中定 容，然后移入磨口瓶中，貼上標簽，置于普通冰箱（4）貯存。微量元素母液配制時，由于培養基中微量元素用量甚微，濃度為0.l0.0001mg/l，所以母液濃度宜為原培養基配方中用量的100倍。一般將微量元素分別稱量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后貯存在一個細口瓶中，但也有將KI分別配制，單獨貯存在棕色瓶中。配好后，貼上標簽，貯存于4冰箱。培養基中的鐵鹽母液一般單獨配制。目前常用的鐵鹽為硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二納的螯合物。稱取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 2H2O 2.78 g，分別溶解（可加熱），然后混

3、合定溶于1000 ml容量瓶中。轉入細口瓶，貼上標簽，4冰箱中保存。氨基酸和維生素等有機成分母液可配制時，母液濃度通常為原培養基配方的50倍（或100）。常用氨基酸和維生素為水溶性物質，可用蒸餾水溶解，但葉酸要先用少量稀堿或稀氨水溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好后，轉入細口瓶，貼上標簽，-20（或4）冰箱中保存。植物生長調節物質如生長素類和細胞分裂素類可以根據需要，靈活設計其濃度，一般為 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，稱25 mg NAA溶于50 ml重蒸餾水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸餾水中。IAA要用棕色瓶暗中貯存，以免光

4、照分解。常用植物生長調節物質和維生素特征見表3。生長素為醇溶性物質，配制時，應用少量95%酒精或稀堿溶解，然后用重蒸餾水溶解定容；細胞分裂素應先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好的母液放置在4普通冰箱中備用。這些母液保存時間不宜過長，當出現沉淀、渾濁及霉菌團時，應重新配制。椰乳中因含有許多種細胞分裂素物質，如KT類似物（9-D-ribofuranosylzeatin）、玉米素及玉米素核糖甙等，有時可與細胞分裂素相互代替。采集到椰子時，應檢查其汁液（保證沒有變質），煮沸，濾紙過濾掉蛋白，高溫高壓消毒，貯存在-20下備用。有時可直接加入培養基。酵母提取液也一般也現用現配

5、，稱量酵母粉后，加熱至沸騰30分鐘，過濾去渣。四、實驗步驟1、大量元素母液的配制各成分按照表1培養基濃度含量擴大10倍用天平稱取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細口瓶，貼好標簽保存于冰箱中。配制培養基時，每配1L培養基取此液100ml。表1 MS培養基大量元素母液制備序號藥品名稱培養基濃度（mg/L）擴大10稱量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl22H2O44044004MgSO47H2O37037005KH2PO41701700注意：(1) 配制大量元素母液時，某些無機成分

6、如Ca2+、SO42、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發生化學反應，產生沉淀物。為避免此現象發生，母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應注意先后順序。特別應將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。(2)CaCl22H2O要在最后單獨加入，在溶解CaCl22H2O 時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl22H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。、微量元素母液的配制MS培養基的微量元素無機鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素

7、用量較少，特別是CuSO45H2O、CoCl26H2O，因此在配制中分微量、配制。按照表2，表3配方，用電光天平稱量，其它同大量元素。配制培養基時，每配制1L培養基，取微量10ml，微量0.1ml。表2 MS培養基微量的配制序號化合物名稱培養基濃度（mg/L）擴大100倍稱量(mg)1MnSO44H2O22.322302ZnSO47H2O8.68603H3BO36.26204KI0.83835Na2MoO42H2O0.2525表3 MS培養基微量的配制序號化合物名稱培養基濃度（mg/L）擴大10000倍稱量(mg)1CuSO45H2O0.0252502CoCl26H2O0.025250注意：使

8、用電子分析天平時注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球將天平內的臟物清理干凈。3、鐵鹽母液的配制鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩定，不易發生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配制培養基時，配制1L取此液10ml。表4 MS鐵鹽母液的配制序號化合物名稱培養基濃度（mg/L）擴大100倍稱量(mg)1Na2-EDTA37.337302FeSO47H2O27.82780注意：在配制鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成FeS04和N

9、a2-EDTA 鰲合不徹底，此時若將其冷藏，FeSO4會結晶析出。為避免此現象發生，配制鐵鹽母液時，FeSO4和Na2-EDTA 應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。4、有機母液的配制MS培養基的有機成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養基中的有機成分原則上應分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時用電子分析天平。配制培養基時，每配1L培養基取此液5ml。注意：由于維生素母液營養豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養

10、造成傷害，不宜再用。避免此現象發生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。表5 MS培養基有機物質母液的制備序號化合物名稱培養基濃度（mg/L）擴大200倍稱量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003鹽酸硫胺素(VB1)0.51004鹽酸吡哆素(VB6)0.51005煙酸0.51005、激素母液配制植物組織培養中使用的激素種類及含量需要根據不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：（）配制生長素類，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的N

11、aOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。（）細胞分裂素，例如KT，應先用少量95%乙醇或無水乙醇加34滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。（）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都應保存在04冰箱中，若母液出現沉淀或霉團則不能繼續使用。植物組織培養的必要條件錄入時間:2011-7-19 13:59:05 來源：生技網（一）溫度： 對大多數植物組織2028即可滿足生長所需，其中2627最適合。（二）光：組織培養通常在散射光線下進行。光的影響可導致不同的結果。有些植物組織在暗處生長較好，而另一些植物組織在光亮處生長較好，但由愈傷組織分化成器官時，則每日必須要有一定時間的光照才能形成芽和根。有些次生物質的形成，光是決定三因素。（三）滲透壓： 滲透壓對植物組織的生長和分化很有關系。在培養基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質可以調整滲透壓。通常12個