1、液相色譜的方法開發(fā)液相色譜的方法開發(fā)（二）梯度方法梯度洗脫的特點(diǎn)梯度洗脫的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn).單位時(shí)間的分離能力增加.檢測(cè)靈敏度提高缺點(diǎn).儀器設(shè)備要求高.不適合某些檢測(cè)方式.柱需再生.定量分析的重復(fù)性較低梯度的洗脫方式梯度的洗脫方式高壓梯度及低壓梯度溶劑 A溶劑 B泵 A泵 B混合器A 高壓梯度溶劑 A泵溶劑 B比例閥（溶劑混合點(diǎn)）混合器B 低壓梯度（溶劑混合點(diǎn)）梯度洗脫的可變參數(shù)梯度洗脫的可變參數(shù)A及B液的成分和化學(xué)特性梯度的陡度梯度的變化形狀124356789 10 11如不用梯度：分離不理想如不用梯度：分離不理想梯度條件的優(yōu)化梯度條件的優(yōu)化梯度曲線壓力曲線梯度曲線的變化梯度曲線的變化 凹線凹線梯度

2、曲線的變化梯度曲線的變化 凸線凸線梯度平衡時(shí)間的影響（一）梯度平衡時(shí)間的影響（一）10分鐘的梯度，6分鐘的平衡時(shí)間色譜圖不重復(fù)梯度平衡時(shí)間的影響（二）梯度平衡時(shí)間的影響（二）平衡時(shí)間6分鐘平衡時(shí)間7分鐘平衡時(shí)間8分鐘平衡時(shí)間9分鐘 平衡時(shí)間從6到7分鐘，第一個(gè)峰的保留時(shí)間有明顯的變化，說(shuō)明6到7分鐘的平衡時(shí)間不足，而8到9分鐘變化不大因而大于這個(gè)時(shí)間時(shí)，平衡充足。有機(jī)污染物的影響（一）有機(jī)污染物的影響（一）50ml超純水的有機(jī)物污染狀態(tài)有機(jī)污染物的影響（二）有機(jī)污染物的影響（二） “三蒸水”有大量的有機(jī)污染物不適合梯度分析有機(jī)污染物的影響（三）有機(jī)污染物的影響（三） 典型的“實(shí)驗(yàn)室水”有大量的

3、有機(jī)污染物不適合高靈敏度梯度分析梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第一步第一步 開發(fā)一個(gè)有9個(gè)烷基苯酮化合物的梯度方法，用C18柱，在最初的條件下(0-100% 水-乙腈)，分離不理想。整個(gè)色譜峰組保留時(shí)間太長(zhǎng)，分離度也不好。梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第二步第二步 為使色譜峰前移，提高起始時(shí)乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。但是9個(gè)化合物出了10個(gè)色譜峰，說(shuō)明有雜質(zhì)存在，很可能是流動(dòng)相水中的。梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第三步第三步 從空白梯度圖顯示，在同樣的色譜條件，同樣的檢測(cè)靈敏度下，共有兩個(gè)雜質(zhì)峰。說(shuō)明流動(dòng)相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會(huì)對(duì)檢測(cè)有影響。梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第四步第四步 空白梯度圖同樣品的色譜圖進(jìn)行對(duì)照后，我們看到雜質(zhì)（共兩個(gè)峰）中的第一個(gè)小峰對(duì)第8個(gè)色譜峰有干擾，會(huì)使其定量分析結(jié)果不準(zhǔn)確。梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第五步第五步 根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強(qiáng)”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號(hào)峰提前(曲線5，50-100%B)，但是小峰仍沒(méi)有分出來(lái)。梯度方法開發(fā)實(shí)例梯度方法開發(fā)實(shí)例 - 第六步第六步 根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強(qiáng)”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號(hào)峰提前，改用50