1、致突變實驗綜合分析及評價致突變實驗綜合分析及評價第二部分第二部分2022-4-1101020304CONTENTS細菌回復突變試驗（Ames試驗）實驗方案結果判斷依據分析評價背景資料背景資料v某單位欲對農藥96%二氯吡啶酸原藥，進行致突變試驗綜合分析及評價，見相關資料。v現請根據所學知識，查閱資料和文獻，思考并討論以下問題。2022-4-11細菌回復突變試驗（細菌回復突變試驗（AmesAmes試驗）試驗）11vAmes 試驗是利用突變體的測試菌株，觀察受試物能否糾正或補償突變體所攜帶的突變改變，判斷其突變性。v原理：采用鼠傷寒沙門菌組氨基酸缺陷突變株作為指示微生物，檢測受試物致突變的實驗。鼠傷

2、寒沙門菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無組氨酸的選擇性培養基上不能正常生長，而在含組氨酸的培養基上則可正常生長，當受到致突變物誘變后突變型回復突變為野生型（his+），表現為在無組氨酸的培養基上也能生長的菌落數。如圖示： 正向突變 野生型細菌（his+） 突變型細菌（his-） 回復突變v目的：根據試驗菌株在無組氨酸的培養基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強弱。2022-4-11實驗方案實驗方案2-52-5一、實驗名稱：96%二氯吡啶酸原藥的鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗二、實驗目的：觀察95二氯吡啶酸原藥對鼠傷寒沙門菌回復突

3、變試驗(Ams試驗)菌株基因突變，初步探討其致突變性的強弱。為該農藥的毒理學安全性評價提供基礎數據。 三、實驗原理：鼠傷寒沙門菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無組氨酸的選擇性培養基上不能正常生長，而在含組氨酸的培養基上則可正常生長，當受到致突變物誘變后突變型回復突變為野生型（his+），表現為在無組氨酸的培養基上也能生長的菌落數。根據試驗菌株在無組氨酸的培養基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強弱。為彌補體外實驗缺乏代謝活化系統的不足，在測試系統中加入哺乳動物微粒體酶（S9）。2022-4-11實驗方案實驗方案四、試驗步驟1

4、、受試物5：95二氯吡啶酸原藥，白色絮狀固體。2、溶劑：二甲基亞砜(DMSO)，光譜純，無菌。3、Ames菌株：鼠傷寒沙門菌標準突變株TA97、TA98、TA100和TA102。劑量：采用平板摻入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)條件下進行測試。在不加S9的條件下測試該藥對TA100菌株產生的最小毒性的濃度作為劑量選擇的依據。查閱相關文獻后（若沒有相關文獻則根據預實驗結果）以每皿5 000ug為最高劑量，按5倍組距下設每皿1 000、200、40、8ug4個劑量組。4、對照組：設自發對照組、陰性對照組和陽性對照組。陽性對照組不加S9的TA97、TA98和TAl02菌株用敵克松(Dexo

5、n)，TAl00菌株用疊氮鈉(NaN3)；陽性對照組加S9的TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用1，8二羥基蒽醌(1，8-HAQ)。37培養48 h后計數每皿回變菌落數，每個劑量作3個平行皿。五、結果與評價。2022-4-11實驗結果判斷實驗結果判斷44若96%二氯吡啶酸原藥的回變菌落數超過自發回變菌落數的兩倍以上，且各劑量組間呈劑量一反應關系，則該藥對鼠傷寒沙門菌標準突變型菌株有誘發基因突變的作用，反之，這無該作用。2022-4-11統計分析統計分析2022-4-11統計分析統計分析2022-4-11結果評價結果評價結果評價4：試驗結果表明，受試物各劑量組對各測試菌株在加或不加S9的條件下，其回變菌落數均未超過陰性對照組回變菌落數的2倍，亦無明顯的劑量反應關系，而陽性對照組各測試菌株的回變菌落數均明顯增加，并超過陰性對照組回變菌落數的2倍以上。因此可認為95二氯吡啶酸原藥無誘發菌株基因突變活性。2022-4-11參考文獻參考文獻1王心如.毒理學基礎M.人民衛生出版社，2014,162.2GB 15193.4-2014 食品安全國家標準 細菌回復突變試驗(S)3GB15670-1995,農藥登記毒理學試驗方法 (S)4張愛華，張華.公共衛生與預防