1、PCR實(shí)驗(yàn)室管理制度1.0目的建立PC戚驗(yàn)室的工作規(guī)范，確保分子診斷室正常工作。2.0范圍PCR實(shí)驗(yàn)室，包括試劑準(zhǔn)備間、標(biāo)本制備間、擴(kuò)增間的使用及管理。3.0職責(zé)PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守本文件的規(guī)定。4.1 4.0內(nèi)容在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，在隔離臺(tái)戴好頭套口罩，穿上鞋套與實(shí)驗(yàn)服。4.2.1 試劑準(zhǔn)備間配電房先打開(kāi)風(fēng)機(jī)（先開(kāi)送風(fēng)機(jī)，再開(kāi)排風(fēng)機(jī)），再把空調(diào)系統(tǒng)打開(kāi)。關(guān)閉時(shí)的順序相反。4.2.2 其它室的用品不得帶入本室。4.2.3 從PC戚驗(yàn)室1號(hào)入口門(mén)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，到達(dá)試劑準(zhǔn)備間的緩沖間，脫下白色工作服，掛在緩沖間的左側(cè)，在緩沖間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專(zhuān)用工作服（藍(lán)色），進(jìn)入試劑準(zhǔn)備間，實(shí)驗(yàn)中須戴

2、一次性手套，手套常更換。4.2.4 打開(kāi)已滅菌的超凈臺(tái)，通風(fēng)一段時(shí)間，排走臭氧。取出當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。操作應(yīng)在冰上進(jìn)行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少dNTP反復(fù)凍融的次數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打開(kāi)廢液缸蓋，加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專(zhuān)用的記錄本和筆，打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過(guò)的離心管、吸頭須置于3湖HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.2.5 打開(kāi)傳遞窗門(mén)，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳遞窗里，關(guān)上傳遞窗門(mén)。4.2.6 在試劑緩沖間脫下工作服，

3、穿上白色工作服。4.3.1 標(biāo)本制備間在標(biāo)本制備間的緩沖間，脫下白色工作服，換上標(biāo)本制備間專(zhuān)用的工作服（粉紅色），進(jìn)入標(biāo)本制備間。4.3.2 打開(kāi)傳遞窗的門(mén)，取出配好的試劑，使用本區(qū)專(zhuān)用的加樣器和帶濾芯槍頭。實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，使用過(guò)的離心管、帶濾芯槍頭須置于3%勺HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.3.3 做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專(zhuān)用的記錄本和筆，打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。4.3.54.3.64.3.74.44.4.14.4.24.4.34.4.44.4.54.4.64.4.74.4.84.54.5.14.64.6.14.7打開(kāi)傳遞窗門(mén)，墊上一次性手套，將配好的試劑

4、放到傳遞窗里，關(guān)上傳遞窗門(mén)。提取基因組模板，提取過(guò)程中丟棄的槍頭、離心管和廢液請(qǐng)丟棄在此垃圾袋并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)粒可先提取野生型質(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次提取工作完成后擦拭臺(tái)面。在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。擴(kuò)增間在擴(kuò)增間的緩沖間，脫下白色工作服，換上擴(kuò)增間專(zhuān)用工作服（綠色）。打開(kāi)傳遞窗門(mén)，取出配好的試劑，關(guān)上傳遞窗門(mén)。打開(kāi)PCF預(yù)熱20min。將反應(yīng)管放入PCF中，關(guān)好門(mén)。脫掉手套，設(shè)定程序，并命名。結(jié)束后需待儀器冷卻后方可取出PC敝里的試劑，取出時(shí)用鑲子將試劑條夾出，注意勿要使管蓋打開(kāi)，用三個(gè)PE手套包好方可棄之。機(jī)器上不允許存放PCRF增產(chǎn)物，每次實(shí)驗(yàn)后

5、請(qǐng)自行及時(shí)清理PC"增產(chǎn)物。結(jié)束實(shí)驗(yàn)后，到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉，再關(guān)掉排風(fēng)機(jī)，之后關(guān)掉送風(fēng)機(jī)。文件的處理：當(dāng)天所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)天拷到部門(mén)電腦上處理，復(fù)制一份將文件名改為記錄本上的命名。可將試驗(yàn)結(jié)果導(dǎo)到PPT上，并標(biāo)記。傳遞窗的使用傳遞窗每天早上滅菌20分鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞窗時(shí)，在底下墊上一層手套。壓力監(jiān)控每天早上空調(diào)運(yùn)行半小時(shí)后，記錄各PCR實(shí)驗(yàn)室的壓力差：試劑準(zhǔn)備間：510;標(biāo)本制備間:-5-10;擴(kuò)增間：V-10。各緩沖間的壓力為+5.3.8.1 超凈臺(tái)的擺放實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須在實(shí)驗(yàn)室管理員協(xié)助下進(jìn)行。3

6、.8.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個(gè)人防護(hù)意識(shí)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)更換工作服和鞋子，穿著整潔，不留長(zhǎng)指甲，不佩戴首飾，長(zhǎng)發(fā)應(yīng)束于腦后；禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物；禁止將個(gè)人物品帶入實(shí)驗(yàn)室；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)避免手口，手眼，手鼻接觸，以防止間接感染。3.8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仍需保留使用的物質(zhì)，應(yīng)移入具塞的容器中，并做好標(biāo)識(shí)標(biāo)簽，并寫(xiě)清楚名稱、濃度、配制日期、儲(chǔ)存溫度、有效期和配制人，并放置于相應(yīng)保存條件下；勿置室溫過(guò)夜。3.8.4 每天配制使用濃度的消毒液，放于固定地點(diǎn)，用于污染時(shí)消毒用，應(yīng)定期更換消毒液品種。3.8.5 每天上班8點(diǎn)45分先關(guān)實(shí)驗(yàn)室紫外燈，然后開(kāi)啟風(fēng)扇，打開(kāi)實(shí)驗(yàn)室走廊

7、窗戶。每天9點(diǎn)前每間負(fù)責(zé)人填寫(xiě)冰箱溫濕度記錄表。3.8.6 下午4點(diǎn)45分每間負(fù)責(zé)人填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)室及冰箱溫濕度記錄表，清理實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，檢查實(shí)驗(yàn)室垃圾及廢液缸槍尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶內(nèi)，通知專(zhuān)門(mén)的垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車(chē)進(jìn)行清除。在生物安全垃圾桶周邊噴灑84消毒液（按1:9或者1:10比例配制）。每日衛(wèi)生打掃完后，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)噴灑84消毒液，噴灑完，待20分鐘過(guò)后，對(duì)實(shí)驗(yàn)室儀器表面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍，防止儀器被腐蝕。MX3000F器反應(yīng)孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。3.8.7 關(guān)閉風(fēng)扇，開(kāi)啟紫外燈，過(guò)夜。關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶，噴灑84消毒液。3.8.8 第一、二間實(shí)驗(yàn)

8、室的3嘛酸在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4.8.10實(shí)驗(yàn)服的清洗時(shí)間為每月的1、2、3、15、16、17日，1、15日洗第一間實(shí)驗(yàn)服，2、16日洗第二間實(shí)驗(yàn)服，3、17日洗第三間實(shí)驗(yàn)服，遇節(jié)假日順延。4.8.11每周對(duì)回風(fēng)口過(guò)濾網(wǎng)進(jìn)行清洗，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4.8.12如遇加班，以上由加班人員負(fù)責(zé)；若有請(qǐng)假，請(qǐng)假人員需與其他人員協(xié)商調(diào)整，否則視為未執(zhí)行。4.8.13以上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫(xiě)記錄表，并由專(zhuān)人檢查確認(rèn)簽字。5.1.1 5.0注意事項(xiàng)FCR實(shí)驗(yàn)室各室使用、進(jìn)入及單一流向制度，請(qǐng)各位技術(shù)員不要貪方便，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，以免造成嚴(yán)重后果。5.1.2 dNTF的使用：dNTF每周更換一次，每周一做實(shí)驗(yàn)時(shí)，取已分裝好的，周五時(shí)丟棄。5.1.3 每位技術(shù)員使用自己獨(dú)立的配液盒。