1、病毒性腹瀉研究進展一一腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測意義腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測意義二二臨床常見的腹瀉病原學檢測方法臨床常見的腹瀉病原學檢測方法三三博暉免疫熒光分析系統簡介博暉免疫熒光分析系統簡介腹瀉病概述 腹瀉病是由多種病原體、多種因素引起的以大便次數增多和大便性狀改變為特點的一組疾病，是兒童患病和死亡的主要原因，也是營養不良的重要原因1。 我國每年有8.36億人次患腹瀉，其中5歲以下小兒占3億人次。2005年中國小兒因急性腹瀉死亡人數多達160萬1。1兒童腹瀉病診治專家共識中華醫學會兒科分會消化學組、中華醫學會兒科分會感染學組、中華兒科雜志通訊作者：陳潔浙江大學醫學院兒童醫院（杭州310003）

2、病名病名2012010 0年年2012011 1年年2012012 2年年2012013 3年年發病數發病數病死人數病死人數發病數發病數病死人數病死人數發病數發病數病病死死人數人數發病數發病數病病死死人數人數霍亂1570240750531細菌性和阿米巴性痢疾25224836237930242074291318866913傷寒和副傷寒14041311798111998314136374655174655143438 8365913659123238 885678856781717101258910125892020腹瀉病發病趨勢2全國法定傳染病（腹瀉類）發病數據（數據來源：衛計委網站）腹瀉病發病

3、趨勢 2013年全年（2013年1月1日零時至12月31日24時），丙類傳染病共報告發病3358955例，死亡291人，報告發病率為248.07/10萬,病死率0.02/10萬，分別較2012年下降10.5%和51.25。3 報告中發病人數居前五位的病種依次為：手足口病、其它感染性腹瀉病、流行性腮腺炎、流行性感冒和急性出血性結膜炎，占丙類報告發病總數的99.29。3 報告中死亡數居前三位的是：手足口病、其它感染性腹瀉病和流行性感冒，占丙類傳染病報告死亡總數的98.28。332013年度全國法定傳染病疫情情況中華人民共和國國家衛計委病毒等其他感染性腹瀉現狀 2006年中國共報告其它感染性腹瀉病例

4、741809例，報告發病率為56.73/10萬。既往調查農村地區人群腹瀉發病率為1220/10萬-3360/10萬，就診率僅為6.3%-50%。在日本，2005年3046家兒科定點監測的感染性腹瀉病例就達941572例，由此可見中國其它感染性腹瀉的報告病例數與實際發病水平相差甚大4。4中國感染性腹瀉監測策略的思考與建議 作者單位： 中國疾病預防控制中心疾控處應急辦腸道傳染病防制辦 公室 ，作者： 張靜， 副研究員， 主要從事傳 染病監測與控制工作 病毒等其他感染性腹瀉現狀 中國2011年其它感染性腹瀉的流行病學及病原學特征：選取2011年1-52周“疾病監測信息報告管理系統”中全國31個省報告

5、的其他感染性腹瀉病例作為研究對象，共836591例；其中，具有明確病原學診斷的確診病例59929例。其它感染性腹瀉突發公共衛生事件信息中，共30起暴發疫情5。 52011年中國其他感染性腹瀉監測現狀分析中華預防醫學雜志 CAS CSCD 2013年第4期 328-332頁,共5頁病毒等其他感染性腹瀉現狀 2011年報告的其它感染性腹瀉患者836591例，發病率為62.39/10萬。病例發病年齡主要集中在0-5歲組，發病率為447.0610萬（436098例），占總數的52.3（436098836591），報告病例發病有2個高峰期，夏季（第23-35周），占34.33（287231/836591

6、）；冬季（第43-52周），占23.54（196939836591）。 報告的30起疫情中，其中5起有明確病原學診斷結果。其中，4起由諾如病毒引起。2011年其它感染性腹瀉確診病例占報告病例數的716（59929836591），其中，病毒感染56687例。52011年中國其他感染性腹瀉監測現狀分析中華預防醫學雜志 CAS CSCD 2013年第4期 328-332頁,共5頁病毒性腹瀉診斷臨床意義 腹瀉病臨床癥狀相似，但病毒性腹瀉的治療方案與細菌等引起的腹瀉有很大不同。有報道發現雙重病毒或多重病毒感染的腹瀉，其癥狀更嚴重，病情進展快，致死率更高。 由于腸道傳染病的臨床表現和常用的輔助檢查缺乏明顯

7、的特異性，因此存在著疾病早期病原體診斷不明確的危險因素，從而存在著疾病早期濫用抗生素、生病期延長而增加患者痛苦和經濟負擔的客觀因素。 因此，針對由病毒引起的腹瀉研制快速準確的診斷技術，對指導臨床對癥治療和避免濫用抗生素有重要意義，特別是對嬰幼兒腹瀉在診斷上更有意義。6病毒性腹瀉的研究進展雷炳鈞，華西醫科大學 ；臨床內科雜志1998年第4期；病毒性腹瀉診斷臨床意義u為疾病診斷和鑒別診斷、臨床療效觀察和預后效果提供依據。u符合循證醫學原則，提升醫療診治科學性。從癥狀學診治轉 變為病因學診治。客觀上降低抗生素濫用，縮短不必要的病程。減少病患不必要的痛苦，降低不必要的經濟負擔。u為不同的病因，不同的自

8、然病史，不同的臨床相，不同的預后轉歸提供判斷依據。病毒性腹瀉診斷臨床意義為流行病學監測及事件分析處理積累資料為流行病學監測及事件分析處理積累資料u記錄在人群中的傳播規律u為臨床醫生提供相對可靠的病原體感染譜，為經驗性診斷和治療提供科學依據。u制定針對性的公共衛生應對策略： 隔離傳染源 切斷傳播途徑，如搞好環境衛生，個人衛生，認真洗手等 保護易感人群，如接種疫苗 明確病因學診斷可以消除不必要的恐慌，尤其是暴發疫情病毒性腹瀉診斷臨床意義為科學研究提供可靠數據為科學研究提供可靠數據u為科研提供大量基礎數據的支持u為臨床和流行病學積累資料，促進研究工作的深入開展u為醫療單位、相關科室的科研提供可靠檢測

9、工具、檢測方法學保證病毒性腹瀉診斷臨床意義 目前最常見的引起腹瀉的病毒有4種，其中以最為常見。病毒性腹瀉中40%-60%由輪狀病毒感染引起，其次是感染6。6病毒性腹瀉的研究進展雷炳鈞，華西醫科大學 ；臨床內科雜志1998年第4期；病毒性腹瀉診斷臨床意義輪狀病毒輪狀病毒l最常見的致腹瀉病毒，常溫穩定，可在環境表面存活數日，糞便中可存活數月，55攝氏度30分鐘滅活。l糞口途徑傳染l秋冬季高發l起病急，潛伏期12天，癥狀期38天l發熱嘔吐腹痛，噴射性水樣腹瀉，易導致脫水l病程自限，多數預后良好，嬰幼兒較重，少數脫水死亡l首次感染后可減少再次感染幾率，并減輕再次感染的嚴重性，各型無交叉免疫，可多次感染

10、病毒性腹瀉診斷臨床意義腸道腺病毒腸道腺病毒l對溫度敏感，對含氯劑和脂溶劑不敏感，抗紫外線l糞口途徑傳染l終年可發病，冬春多發l病程長，多超過一周l腹瀉嘔吐，可多器官受累，心肌炎，CNS（中樞神經系統）l病程自限，預后良好，腸道腺病毒是腸套疊的重要原因，40%的腸套疊與腸道腺病毒有關l感染后可獲得持久免疫力，很少二次感染病毒性腹瀉診斷臨床意義諾如病毒諾如病毒l糞口途徑傳染，水源、食物污染易導致爆發流行l潛伏期12天，癥狀持續12天l惡心嘔吐腹部痙攣性腹瀉，普遍感到病情嚴重，一日內多次劇烈嘔吐l預后良好l抗體沒有免疫作用，可反復感染病毒性腹瀉診斷臨床意義星狀病毒星狀病毒l冬季多發l潛伏期34天，癥

11、狀期35天l癥狀輕，少見脫水l與遷延性腹瀉有關臨床常見的病原學檢測方法臨床常見的病原學檢測方法特異性強，但檢測時間長，技術要求高，敏感性不強。結果直觀、準確，但設備昂貴，專業性強，人員要求高，病毒滴度要求高不符合常規臨床檢測需求。靈敏度高、特異性強，應用面廣且易于普及，適合大樣本量篩查,試驗結果顯而易見，試驗條個體要求低，但自動化水平不高。靈敏度、準確度高，但檢測時間長，設備和操作人員專業要求高，成本昂貴。臨床常見的病原學檢測方法免疫學方法分很多種，臨床常用檢測方法包括：酶聯免疫法（ ELISA ）、膠體金法、免疫熒光法等。臨床常見的病原學檢測方法臨床常見的病原學檢測方法酶聯免疫檢測方法酶聯免

12、疫檢測方法用酶來標記特定的抗體，在檢測過程中，如果樣本中有相應的病毒抗原，帶有酶標記的抗體就會與其結合，利用酶的催化作用，就可以檢測出病毒。靈敏度高，檢測準確操作相對復雜，一種試劑只能檢測一種病毒，檢測時間較長，尤其是對腹瀉病毒的檢測具有很大的缺點。因為，酶聯免疫檢測試劑一般一個檢測板上有96個試劑位，而這96個試劑位不能獨立使用，醫院為了降低檢測成本，一般都會積累樣本到一定數量才進行項目檢測，而對于腹瀉病人來說，需要快速進行檢測，因此，該方法不能夠適應臨床對腹瀉病毒快速檢測的要求。臨床常見的病原學檢測方法膠體金方法膠體金方法基于免疫金染色法技術開發的試劑盒技術特點是用特定直徑的膠體金顆粒來標

13、記病毒抗體。在檢測過程中分，如果樣本中有病毒，就會與金標記的抗體進行結合，使其分子大小和分子量發生改變，同時顏色也會發生相應的變化，用肉眼觀察顏色來判斷病毒類型。簡便，迅速膠體金的技術缺點是自動化水平低，靈敏度相對較低，主要是肉眼判別檢測結果，因此檢測結果容易受到人為因素干擾，特別是低濃度樣本更容易產生誤判，同時結果穩定時間過短，假陽性率高。臨床常見的病原學檢測方法免疫熒光法免疫熒光法利用免疫層析技術，采用雙抗體夾心法檢測腹瀉病毒。當待測樣本加入測試卡后，待測樣本中的病毒抗原與熒光標記的抗體形成反應復合物，在層析作用下，反應復合物沿硝酸纖維膜向前移動，分別被硝酸纖維膜檢測區上預先包被病毒克隆抗

14、體捕獲，在檢測區上形成反應帶。使用熒光免疫分析儀檢測反應線上的熒光值，當熒光閾值等于或高于檢出限時，顯示為陽性，當熒光閾值低于檢出限時顯示為陰性，從而實現檢測腸道病毒的目的。半自動化，簡單、快速、多病毒聯合檢測；檢測結果半定量，避免人為肉眼主觀誤讀，穩定時間比膠體金多一倍；方便連接醫院LIS等系統。臨床常見的病原學檢測方法檢測結果半定量（儀器）定性（肉眼）定量檢測時間10-15分鐘15-20分鐘2-3小時結果有效時段60min30min20min內靈敏度高低高檢測成本低低低自動化水平 高低低與LISHIS信息化可以不可以不可以檢測隨機性單個監測單個監測批量檢測臨床常見的病原學檢測方法 綜合各種因素考慮，免疫熒光法是目前臨床快速診斷最佳技術。原因：。產品簡介檢測原理-雙抗體夾心法檢測原理檢測原理-免疫熒光法（雙抗體夾心法）免疫熒光法（雙抗體夾心法）產品簡介【檢驗過程】用樣本取樣勺（在樣本稀釋液瓶中）取適量糞便樣本放入樣本管中，震蕩混勻，靜置1 1分鐘分鐘后在試劑卡加樣孔處滴加2 2滴糞便樣本稀釋液滴糞便樣本稀釋液，平置或放置于專用的試劑架上，1