1、王晶余陳維袁佐鳴張春玲【摘要】目的探討針刺誘導缺血耐受的內源性腦愛惜機制。方式應用線栓法制做大鼠局灶腦缺血模型，選用百會穴進行針刺預處置。通過神經學評分、腦梗死體積測定、病理學及微小管相關蛋白2(map2)免疫組化染色對缺血耐受模型進行評判。結果針刺預處置一、3、5d都可對后續的大腦中動脈閉塞(mcao)產生愛惜作用，神經病學評分降低，腦梗死體積縮小，病理損傷減輕，以5d最為明顯。結論成功復制針刺?局灶性腦缺血耐受模型，針刺可誘導腦缺血耐受。【關鍵詞】針刺；預處置；腦缺血耐受臨床和實驗研究說明，針刺可增加腦血流量，改善腦組織氧合，提精湛氧化物歧化酶活性，抑制興奮性氨基酸，誘導愛惜性基因表達，調

2、劑神經內分泌，對缺血性腦損傷有顯著的醫治作用和愛惜效應1。有研究說明針刺能夠產生有效缺血耐受，對缺血性腦卒中有愛惜作用2，但針刺產生缺血耐受的機制尚不完全清楚，對其相關研究甚少。1材料與方式實驗動物與分組健康雄性wistar大鼠，體重250300g,由吉林大學實驗動物中心提供。模型評判30只，隨機分為正常對照組、單純缺血24h組及針刺一、3、5d預處置后大腦中動脈閉塞(mcao)24h組，每組6只。針刺預處理方法應用dm?a定量針麻儀，參照實驗針灸學給予wistar大鼠頂骨正中百會穴電針刺激，采用頻率為416hz的間斷疏密波，電流強度1ma,每次30min,1次/d。動物模型制備采用longa

3、線栓法：大鼠用10%水合氯醛(ml/100g)腹腔注射麻醉后仰臥于手術臺上，頸部正中切口，暴露頸總動脈，逐步分離出頸外動脈、頸內動脈及分叉部，結扎頸外動脈遠端，用動脈夾夾閉頸總動脈，在頸內動脈下方穿一提拉線以阻斷血流，在結扎線近端距分叉5mm處剪一約mm小口，將魚線前端用砂紙磨成圓形并用肝素涂布后從頸外動脈殘端插入，經頸總動脈分叉部進入頸內動脈，向上深入至分叉以上。平均進線（22士）mm直至感覺有阻力時，即阻斷大腦中動脈入口處，結扎頸外動脈近端完成mcaob正常對照組僅暴露頸總動脈分叉處，不插線阻斷大腦中動脈。神經病學評分麻醉蘇醒后，將動物放回鼠籠，自由飲食，分別于mcao后24h，由不了解分

4、組情況的觀察者評估并記錄神經行為評分，參照bederson評分標準3，0級：未見行為缺陷；1級：前肢屈曲（即提尾懸空試驗陽性）；2級：側推抵抗力下降（即側向推力試驗陽性），伴前肢屈曲，無轉圈行為；3級：同2級行為，伴自發性旋轉。梗死體積判定經灌注固定大鼠整個腦組織后，從后至前進行石蠟冠狀切片，片厚4（1管每隔2mm切取一張行he染色，根據reempts介紹的公式4，拍照并用圖像分析軟件計算出腦片上梗塞灶體積與大腦半球體積的百分比。病理標本制備大鼠以10%水合氯醛麻醉，暴露心臟，以12號穿刺針刺入左心室，眼科剪刀剪開右心房，首先灌注溫%生理鹽水約200ml，待從右心房流出液體清亮時，換用含4%多

5、聚甲醛的mol/lpbs（）緩沖液200ml進行灌注固定，斷頭取腦。取以視交叉為中心，相當于前聯合連續腦片，繼續固定46h，常規脫水，透明，浸蠟，包埋。微小管相關蛋白2（map2）檢測方法采用免疫組化法。一抗來源為美國santancren試劑公司，染色采用sp法。統計學處理結果以x±s表示，均數的顯著性采用t檢驗，所有統計學處理應用統計軟件。2結果神經功能評分正常對照組神經病學評分為0，針刺本身不引起神經功能缺損，針刺1、3、5d預處理后mcao24h神經功能評分為±、±、±，與單純mcao24h組±相比差異顯著，針刺5d最為明顯（pv）。梗死

6、體積測定單純mcao24h腦梗死體積比為（±）%，針刺1、3、5dmcao24h腦梗死體積比分別為（±）%、（±）%、（±）%，其中針刺5dmcao24h組梗死灶體積減少了%，較單純mcao24h組明顯降低（p。病理形態學變化正常對照組：神經細胞的形態分布正常。單純mcao組：缺血24h,中心區淡染，腦組織稀疏明顯，神經元脫失嚴重，細胞周圍大空泡變，神經細胞變形，核固縮，核碎裂，核溶解，并失去完整結構，并有大量細胞殘骸，周邊區范圍明顯縮小，可見膠質細胞浸潤。針刺預處理1、3、5dmcao缺血周邊區范圍縮小，其中形態完整的神經細胞增多，充血及腦水腫程度較單

7、純mcao組輕，以針刺預處理5d最為明顯。map2表達免疫組化結果顯示：正常對照組可見腦組織中神經元及樹突均呈陽性表達，以樹突表達更為明顯，染色均勻，突起排列完整呈束狀。缺血24h,梗死中心區可見明顯map2表達淡染區，無完整樹突，樹突排列不齊，散在斷裂狀，周邊區表達明顯，與中心區分界清楚，可見正常神經元與缺血改變神經元以及形態排列正常樹突與增粗、部分斷裂樹突交替存在。1、3、5d針刺預處理中心區與mcao表現一致，但針刺預處理使梗死范圍明顯縮小，map2正常表達神經元增多，缺血改變神經元減少，也可見形態排列正常樹突與增粗、部分斷裂樹突交替存在，梗死范圍以5d針刺預處理最小。3討論預處理是指在

8、嚴重缺血之前給予的各種保護性干預措施，缺血耐受是指經預處理的腦組織對隨后嚴重缺血的耐受性明顯提高的現象。自發現缺血耐受現象以來，對腦缺血防治的認識開辟了新的領域，為腦保護提供了新的思路，并已進行了相關動物實驗和臨床研究，這種通過激發機體的內源性保護機制，以增強對下一次嚴重損傷抵抗能力的研究受到廣泛關注。研究表明，針刺預處理可誘導缺血耐受，減輕大鼠腦缺血損傷，可能通過影響自由基、細胞凋亡等機制起腦保護作用59。為進一步探討針刺誘導腦缺血耐受，本實驗選擇針刺預處理1、3、5d后行mcao，從神經學評分、梗死體積等方面對其進行評價，結果顯示，針刺預處理1、3、5d后行mcao,均不同程度提高神經功能

9、、縮小梗死體積，其中5d針刺預處理后，梗死體積縮小達%與單純mcao相比差異顯著，he染色顯示病灶部位缺血程度、缺血范圍及腦水腫程度均較單純mcao組輕，提示成功制備針刺誘導腦缺血耐受模型，為進一步研究針刺誘導缺血耐受相關機制奠定了基礎。本實驗還利用map2免疫組化染色，對此模型進行了評價，進一步證實了針刺預處理產生了缺血耐受。正常腦組織中map2神經元及樹突均呈陽性表達，以樹突表達更為明顯，染色均勻，突起排列完整呈束狀。微管是一種重要的細胞骨架蛋白，它對細胞結構的維持和線粒體的軸突轉運具有重要意義，但微管具有動力學不穩定性，極易發生解聚。map2主要存在于神經元樹突和胞體，作為微管的輔助蛋白

10、可促進微管組裝，穩定微管的結構，它的活性下降可造成微管變性堆積，影響細胞骨架的完整，并可使線粒體的軸突轉運發生障礙，最終導致神經元死亡。map2對缺血很敏感，可顯示缺血時神經元損傷，缺血性神經元map2抗原性消失可作為缺血損傷的模型判定標準之一。【參考文獻】1 litscherg，schwarzg，sandnerka，jneurosci,1998;95(1?2):1?15.2 郭佳,張莉.腦缺血耐受與針灸的腦保護作用j.中國臨床康復,2002；6(1):116?7.3 berders

11、onjb，pittslh，tsujim,etmiddlecerebralarteryocclusion:evaluationofthemodelanddevelopmentofneurologicalexaminationj.stroke，1986；17:472?6.4 reemptsjv，deurenbv，venmv,etreducescerebralinfarctsizeafterphotochemicallyinducedthrombosisinspontaneouslyhypertensiveratsj.stroke，1987；18:1113?9.5 張民，劉劍波，張宏亮，等.單次電針預處理誘導大鼠局灶性腦缺血耐受時程j.中華麻醉學雜志，2003；23（5）:355?7.6 熊利澤，路志紅.重復電針預處理可減輕大鼠急性短暫性腦缺血損傷j.第四軍醫大學學報，2001；22（21）:5?6.7 田代實，鄧醫宇，王光海，等.針