1、鐵包金提取物抗肝損傷作用的研究                    作者：吳玉強(qiáng) 鄧家剛 鐘正賢 楊興 【摘要】  目的觀察鐵包金4種提取物的抗肝損傷藥效作用。方法采用CCl4和異硫氰酸-萘酯所致小鼠急性肝損傷模型等方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果高劑量組鐵包金提取物樣品14能明顯降低CCl4 致急性肝損傷小鼠血清中的ALT，AST活性，并能明顯升高血清中總蛋白和白蛋白含量；樣品1，2，4能顯著降低 T-BI

2、L含量。結(jié)論鐵包金提取物對CCl4 和異硫氰酸-萘酯所致的急性肝損傷具有保肝降酶退黃作用。 【關(guān)鍵詞】  鐵包金 抗肝損傷   Abstract：ObjectiveTo study the protective effect of the extracts of Berchemia lineate(L.)DC. on liver iujury induced by carbon tetrachloride (CCl4) or -Naphthyl isothiocyanate(ANIT). MethodsThe animal models with hepatic

3、injury were established by CCl4 and ANIT. The activities of ALT，ALB，T-BIL，TP and AST in serum were measured. ResultsIn high dose group, the sample 1 4 could reduce ALT and AST activities in serum of acute liver damage mice induced by CCl4 or ANIT, and elevate the contents of total protein and the al

4、bumin in serum obviously; the sample 1，2，4 could obviously reduce the content of T-BIL.ConclusionThe extracts of Berchemia lineate(L.)DC can protecte liver from injury induced by CCl4 or ANIT.   Key words：Berchemia lineate(L.)DC.；  Prevent liver injury   鐵包金B(yǎng)erchemia lineate

5、(L.)DC. 為鼠李科植物老鼠耳的干燥根，為廣西民間常用中草藥，收載于1990年版廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)，具有消腫解毒、止血鎮(zhèn)痛，祛風(fēng)除濕功效。民間常用于治療肺結(jié)核、吐血、腹痛、頭痛、跌打損傷、疔瘡腫毒等1。本課題組曾對鐵包金藥材的抗炎、鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究2，結(jié)果表明鐵包金提取物具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。為驗(yàn)證鐵包金在抗肝損傷方面的作用，實(shí)驗(yàn)將鐵包金藥材用不同溶劑提取并對提取物進(jìn)行了抗肝損傷的研究。   1  材料   1.1  藥物與試劑   鐵包金14號提取物共4個(gè)樣品，樣品1為氯仿層提取物，樣品2為石油醚層提取物，樣

6、品3為醋酸乙酯層提取物，樣品4為正丁醇層提取物，由廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供。聯(lián)苯雙酯，廣州星群（藥業(yè)）股份有限公司生產(chǎn)，批號 DF40037。地塞米松天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號050720。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒，批號 2006017；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒，批號2006016；總蛋白（TP）試劑盒，批號2005032；白蛋白（ALB）試劑盒，批號 2005041，均為長春匯力生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。四氯化碳(CCl4)，由廣東西隴化工廠生產(chǎn)。異硫氰酸-萘酯，美國Sigma公司產(chǎn)品。   1.2  動物KM種小鼠，1822 g，雌雄兼

7、用，清潔級動物，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK桂2003-0003。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)室內(nèi)，室溫（22±2），濕度（60±5）%，喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由飲水和攝食。   1.3  儀器棱光-722型可見分光光度計(jì)，F(xiàn)A1004型萬分之一電子天平，由上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。   1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 10統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用t檢驗(yàn)作組間比較差異顯著性，P0.05認(rèn)為有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。   2  方法與結(jié)果

8、   2.1  對四氯化碳（CCl4）所致肝損傷模型的影響3取小鼠110只，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對照組（蒸餾水，20 ml/kg），模型組（蒸餾水，20 ml/kg），高劑量鐵包金樣品14（0.4 g/kg）組，低劑量鐵包金樣品14（0.2 g/kg）組，以及陽性對照藥聯(lián)苯雙酯（0.2 g/kg）組，每組10只小鼠。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)用藥7 d。末次給藥1 h后除正常對照組外，各組小鼠腹腔注射1%CCl4花生油溶液10 ml/kg體重。20 h后從小鼠眼眶靜脈叢取血，分離血清。然后取血清按臨床試劑盒方法，測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基

9、轉(zhuǎn)移酶（AST）活性，以及血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量。比較各給藥組與模型組的顯著性差異,評價(jià)藥物的保肝降酶作用。結(jié)果見表1。結(jié)果表明，與對照組比較，模型組血清的ALT，AST活性都比對照組明顯升高，表明造模成功（P0.01）。高劑量組樣品14和陽性藥聯(lián)苯雙酯能明顯降低CCl4 致急性肝損傷小鼠血清中的ALT，AST活性(P0.05或P0.01)，并能明顯升高血清中總蛋白和白蛋白含量(P0.05或P0.01)，樣品4、樣品3低劑量組對ALT作用不明顯（P0.05），但對AST活性有抑制作用（P0.05或P0.01）。表1  鐵包金提取物對CCl4 致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作

10、用與模型組比較，*P0.05，*P0.01；與正常對照組比較，#P0.05,#P0.01；n=10   2.2  鐵包金各提取物對異硫氰酸-萘酯（ANIT）致小鼠黃疸的保護(hù)作用4黃疸造型劑配制：稱取225 mg異硫氰酸-萘酯（ANIT）用花生油溶解并配成0.6%ANIT花生油溶液37.5 ml，按0.15 ml/10 g體重一次灌胃給藥（90 mg/kg），投毒造型。            取小鼠110只，隨機(jī)分為空白對照組、模型組、陽性藥聯(lián)苯雙酯（0.2 g/kg

11、）組，低劑量鐵包金樣品14（0.2 g/kg）組，高劑量鐵包金樣品14（0.4 g/kg）組。空白對照組和模型組給予等體積蒸餾水（20 ml/kg），其他各組每天給藥1次，連續(xù)5 d。第6天除對照組外，其余各組灌胃給予0.6%ANIT花生油溶液中毒，造成黃疸型肝損傷。中毒后繼續(xù)給藥2 d，各組中毒48 h后摘除小鼠眼球取血分離血清，按試劑盒方法測定血清T-BIL含量和ALT活性。比較各給藥組與模型組的顯著性差異,評價(jià)藥物的退黃降酶作用。結(jié)果見表2。結(jié)果表明，與對照組比較，模型組血清中T-BIL含量和ALT活性都比對照組明顯升高，表明造模成功。與模型組比較，除樣品3降膽紅素作用無明顯差異外（P0

12、.05），樣品1，2，4組的T-BIL含量均明顯降低(P0.05)，各樣品及陽性藥聯(lián)苯雙酯組均可降低ALT活性（P0.01或P0.05），提示鐵包金提取物具有明顯的退黃降酶作用。表2  鐵包金提取物對ANIT致小鼠黃疸的保護(hù)作用與模型組比較，*P0.05，*P0.01，*P0.001；與空白對照組比較，P0.05，P0.01，#P0.001；n=10   3  討論    CCl4是經(jīng)典的化學(xué)性肝損傷動物模型制備毒劑,被廣泛用于肝壞死或肝損傷的在體和離體研究。一般認(rèn)為，它通過細(xì)胞色素P450將CCl4分解為CCl3自由基團(tuán)，能選擇性地

13、損傷小葉中央?yún)^(qū)的肝細(xì)胞，引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使肝細(xì)胞變性壞死，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶、自由基滲入血液而活性增高，肝細(xì)胞受損后肝內(nèi)合成蛋白能力降低，TP，ALB含量會減少。抗肝損實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，與模型組比較，高劑量組樣品14和陽性藥聯(lián)苯雙酯能明顯降低CCl4 致急性肝損傷小鼠血清中的ALT，AST活性，并能明顯升高血清中TP和ALB含量(P0.05)，低劑量組樣品3、4對AST活性有抑制作用(P0.05)，對ALT活性抑制作用不明顯(P0.05)。提示鐵包金各提取物具有一定的保肝降酶作用。   異硫氰酸-萘酯（ANIT）是一種間接肝毒劑，它主要損害肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，引起毛細(xì)膽管增生及小葉間膽管周圍產(chǎn)生炎癥，從而造成膽管阻塞，形成明顯的膽汁郁積，并伴隨以點(diǎn)狀壞死為主的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害，產(chǎn)生膽汁郁積性黃疸，出現(xiàn)高膽紅素血癥和膽汁分泌減少。抗ANIT所致的肝損傷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，與模型組比較，樣品1，2，4組的T-BIL含量均明顯降低(P0.05)，樣品14及陽性藥聯(lián)苯雙酯組均可降低ALT活性（P0.05或P0.01)。提示鐵包金提取物具有明顯的退黃降酶作用。   綜上所述，鐵包金各提取物具有一定的保肝降酶退黃作用，其藥理作用與所含有效成分相關(guān),提示鐵包金的提取物在保肝方面具有較好的開發(fā)應(yīng)用前