1、參與DNA復制有關的酶和蛋白質 現在已經知道約現在已經知道約2020多種蛋白質參與復制。多種蛋白質參與復制。（1 1）聚合酶）聚合酶（2 2）解）解 鏈、鏈、 解解 旋旋 酶酶 類類（3 3）引發酶）引發酶（4 4）連接酶）連接酶 下表是與大腸桿菌復制有關的蛋白質。下表是與大腸桿菌復制有關的蛋白質。蛋白質名稱蛋白質名稱分子量分子量103U亞基數亞基數 功功 能能每個菌中的每個菌中的分子數分子數毫克蛋白質毫克蛋白質公斤細胞（濕重）公斤細胞（濕重）SSBi蛋白蛋白n蛋白蛋白n 蛋白蛋白n蛋白蛋白dnaCdnaB引發酶引發酶 74 80 25 75 11 29300 6044111161與單鏈結合與

2、單鏈結合預引發預引發預引發預引發部位識別部位識別,ATPase預引發預引發預引發預引發移動啟動子移動啟動子,ATPase引發合成引發合成300 50 30 70 -100 20 50 20 0.5 0.3 0.3 0.2表表 與大腸桿菌復制有關的蛋白質與大腸桿菌復制有關的蛋白質接下頁接下頁BACK蛋白質名稱蛋白質名稱分子量分子量103U亞基數亞基數 功功 能能每個菌中的分子每個菌中的分子數數毫克蛋白質毫克蛋白質公斤細胞（濕重）公斤細胞（濕重）Pol 全酶全酶 140 25 10 37 52 32 831121211鏈的延長鏈的延長30020 0.5Pol 1091填補缺口和切去引填補缺口和切去

3、引物物30010連接酶連接酶 741連接連接30010拓撲異構酶拓撲異構酶 400 210 190422引進超螺旋引進超螺旋_25025rep 蛋白蛋白 解鏈酶解鏈酶dnaA 65 75 4811解開雙鏈解開雙鏈復制起始復制起始5050002000.6Rep蛋白是一種大腸桿菌解鏈酶蛋白是一種大腸桿菌解鏈酶 1 DNA聚合酶聚合酶 DNA聚合酶聚合酶是指以脫氧核苷三磷酸作為底物催化合成是指以脫氧核苷三磷酸作為底物催化合成DNA的一類酶。的一類酶。 全稱：全稱： DNA依賴的依賴的DNA聚合酶聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase)簡稱：簡稱：DNA-pol活性：活性：

4、1. 53 的聚合活性的聚合活性2. 核酸外切酶活性核酸外切酶活性 所有所有DNA聚合酶的作用方式基本相似。它們催化聚合酶的作用方式基本相似。它們催化脫氧核苷三磷酸加到復制中的脫氧核苷三磷酸加到復制中的DNA鏈的鏈的3羥基末羥基末端，端，合成方向從合成方向從53，由模板決定加上何種脫，由模板決定加上何種脫氧核苷酸。氧核苷酸。 5 A G C T T C A G G A T A 3 | | | | | | | | | | |3 T C G A A G T C C T A G C G A C 5 3 5 外切酶活性外切酶活性 5 3 外切酶活性外切酶活性?能切除突變的能切除突變的 DNA片段和片段

5、和RNA引物。引物。能辨認錯配的堿基對，并將其水解。能辨認錯配的堿基對，并將其水解。 核酸外切酶活性核酸外切酶活性 目目 錄錄DNADNA聚合酶的分類聚合酶的分類DNA-pol 主要的修復酶主要的修復酶DNA-pol 次要的修復酶次要的修復酶DNA-pol 復制酶復制酶DNA-pol IV SOS修復修復DNA-pol V SOS修復修復原核生物的聚合酶原核生物的聚合酶 (1) 大腸桿菌大腸桿菌DNA聚合酶聚合酶I (Pol ) 純的純的DNA聚合酶聚合酶I由分子量由分子量109 000U (109KD)，含，含928個氨基酸殘基的個氨基酸殘基的一條肽鏈構成，每個大腸桿菌細胞中大約含一條肽鏈構

6、成，每個大腸桿菌細胞中大約含400個酶分子。個酶分子。(單鏈多肽）單鏈多肽） 功能功能：對復制中的錯誤進行校讀，對復制和對復制中的錯誤進行校讀，對復制和修復中出現的空隙進行填補。修復中出現的空隙進行填補。323個氨基酸個氨基酸小片段（小片段（34KD）5 核酸外切酶活性核酸外切酶活性大片段大片段/Klenow 片段片段 （76KD）604個氨基酸個氨基酸DNA聚合酶活性聚合酶活性 5 核酸外切酶活性核酸外切酶活性N 端端C 端端枯草桿菌蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶或胰蛋白酶胰蛋白酶DNA-pol DNA聚合酶聚合酶的的多種活性。多種活性。 53聚合活性：聚合活性： 在模板指導下，以脫氧核苷三磷酸為底

7、物在引物在模板指導下，以脫氧核苷三磷酸為底物在引物3-OH末端加上脫氧核末端加上脫氧核苷酸苷酸。每個酶分子每分鐘添加。每個酶分子每分鐘添加1 000個單核苷酸。個單核苷酸。 聚合酶催化的聚合酶催化的DNA的合成需要以下條件：的合成需要以下條件： 模板模板 四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸 必須有一必須有一 3-OH末端的引物，且此引物必須與模板正確形成氫鍵末端的引物，且此引物必須與模板正確形成氫鍵 合成從合成從53方向進行，如圖方向進行，如圖7-8和圖和圖7-9所示所示 35外切酶活性：外切酶活性：沒有脫氧核苷三磷酸底物時沒有脫氧核苷三磷酸底物時，DNA聚合酶聚合酶 I 能從能從3-OH開開始以始

8、以35方向水解方向水解DNA，產生，產生5-單核苷酸。單核苷酸。 實際上實際上DNA復制時，加上去的脫氧核苷酸不一定每次都正復制時，加上去的脫氧核苷酸不一定每次都正確，錯誤的機會不少，有時甚至加上一個不與模板配對的核苷確，錯誤的機會不少，有時甚至加上一個不與模板配對的核苷酸，酸，當當3-OH末端的堿基不與模板配對時聚合酶就無聚合活性，末端的堿基不與模板配對時聚合酶就無聚合活性，此時它具有的此時它具有的35外切酶活性可以切除這個不配對的核苷酸，外切酶活性可以切除這個不配對的核苷酸，這一堿基切除后，外切核酸酶活性終止，聚合酶活性恢復，這一堿基切除后，外切核酸酶活性終止，聚合酶活性恢復，如如圖圖7-

9、10所示。所以聚合酶的所示。所以聚合酶的35外切酶活性也叫外切酶活性也叫修補活性修補活性。 53外切酶活性：外切酶活性： DNA聚合酶聚合酶I具有具有53外切酶活性。外切酶活性。 如圖如圖7-11，其特點是：，其特點是： 只能在只能在5-P末端一個接一個地切除核苷酸；末端一個接一個地切除核苷酸； 能連續地切除多個核苷酸；能連續地切除多個核苷酸； 只切除配對的只切除配對的5-P末端核苷酸，不切除不配對的單鏈末端核苷酸，不切除不配對的單鏈5-P末端核苷酸；末端核苷酸； 既能切除脫氧核苷酸也能切除核苷酸；既能切除脫氧核苷酸也能切除核苷酸； 對只具有對只具有5-P末端的切口也有活性（由于在末端的切口也

10、有活性（由于在DNA復制過復制過程中一般情況下只在程中一般情況下只在RNA引物處才有缺口，引物處才有缺口，因此因此53外切酶外切酶活性的主要功能是切除核糖核苷酸引物活性的主要功能是切除核糖核苷酸引物）。）。 切口翻譯切口翻譯(nicktranslation) DNA聚合酶聚合酶 I 的的53外切酶活性和聚合活性同時作用可外切酶活性和聚合活性同時作用可以進行切口翻譯以進行切口翻譯(nicktranslation)，用來，用來制造放射性探針制造放射性探針。 在反應物里加入同位素標記的脫氧單核苷酸，在反應物里加入同位素標記的脫氧單核苷酸，DNA聚合酶聚合酶I 首先利用首先利用53外切酶活性，從切口處

11、逐個切下外切酶活性，從切口處逐個切下DNA上的核苷上的核苷酸，再利用酸，再利用3-OH末端聚合作用末端聚合作用逐個將標記的核苷酸加上去逐個將標記的核苷酸加上去(圖圖712)。5353 內切酶活性：內切酶活性：DNA聚合酶聚合酶 I 也具有也具有53 內切酶活性，如圖內切酶活性，如圖7-13所示。在兩個堿基之所示。在兩個堿基之間切開產生一個具有間切開產生一個具有5-P 末端的末端的不配對堿基的片段不配對堿基的片段。 很多實驗證明很多實驗證明DNA聚合酶聚合酶 I 在大腸桿菌復制中不是主要的合成酶，而在大腸桿菌復制中不是主要的合成酶，而是是在除去在除去RNA引物和損傷修復中起重要作用。引物和損傷修

12、復中起重要作用。不配對的片段不配對的片段內切酶活性內切酶活性 （2） 大腸桿菌大腸桿菌 DNA聚合酶聚合酶 DNA聚合酶聚合酶缺陷的突變株仍能生存，這表明缺陷的突變株仍能生存，這表明DNApol不是不是DNA復制的主要聚合酶。人們開始尋找另外的復制的主要聚合酶。人們開始尋找另外的DNA聚合酶，并于聚合酶，并于1970年發現了年發現了DNApol。 從從53方向合成方向合成DNA 具有具有35外切酶活性外切酶活性，但沒有，但沒有53外切酶活性。外切酶活性。 在體外的合成速率比體內的速率要低得多，帶有這個酶缺陷在體外的合成速率比體內的速率要低得多，帶有這個酶缺陷的大腸桿菌突變株染色體的復制各方面都

13、正常，它在體內的功能的大腸桿菌突變株染色體的復制各方面都正常，它在體內的功能可能和可能和DNA聚合酶聚合酶 I 類似。類似。 (3) 大腸桿菌大腸桿菌DNA聚合酶聚合酶 聚合酶聚合酶是體內是體內DNA復制所必需的酶復制所必需的酶 帶有帶有DNA聚合酶聚合酶 的溫度敏感突變的溫度敏感突變 (polc) 的大腸桿菌在限制溫度的大腸桿菌在限制溫度下是不能存活的，從這種菌株得到的裂解液也不能合成下是不能存活的，從這種菌株得到的裂解液也不能合成DNA，當加入正，當加入正常細菌的常細菌的DNA 聚合酶聚合酶 時可以恢復它的聚合能力，因此不同于時可以恢復它的聚合能力，因此不同于DNA聚聚合酶合酶I和和，聚合

14、酶聚合酶是體內是體內DNA復制所必需的酶。復制所必需的酶。 DNA多聚酶多聚酶相當復雜，其結構和各亞基的功能如圖相當復雜，其結構和各亞基的功能如圖1124，25所示。所示。 DNA pol 具有具有53聚合功能。聚合功能。 DNA聚合酶聚合酶 的的 “核心酶核心酶”由由、三種亞基組成。三種亞基組成。 亞基具有合成亞基具有合成DNA的能力。的能力。 亞基具有亞基具有35外切酶的功能，起到外切酶的功能，起到校正的作用。校正的作用。 亞基可能在組裝中發揮功能。亞基可能在組裝中發揮功能。亞基加到核心酶上使其二聚化，亞基加到核心酶上使其二聚化，進一步產生進一步產生pol III。復合體加入到復合體加入到

15、pol ，進一，進一步形成步形成 pol 復合體。復合體。 復合體是由復合體是由，和和亞基組成，其作用是固定亞基組成，其作用是固定亞基這個亞基這個“夾子夾子”的支架。的支架。亞基亞基：形成夾鉗，保持催化核形成夾鉗，保持催化核心和模板鏈的結合心和模板鏈的結合 聚合酶聚合酶的活性的活性 聚合活性：聚合活性： DNA復制時聚合酶復制時聚合酶 全酶十分重要，它可以全酶十分重要，它可以在在DNA模板上的引物的模板上的引物的3-OH上以每分鐘約上以每分鐘約50 000核苷酸的速核苷酸的速率逐個延伸新生的率逐個延伸新生的DNA。 35和和53的外切酶活性：的外切酶活性： pol 的的53外切酶活性與外切酶活

16、性與pol的不同，的不同，pol 的的53外切酶活性只對外切酶活性只對 單鏈單鏈 DNA有作用，因此不能用于缺口翻譯。有作用，因此不能用于缺口翻譯。DNA聚合酶聚合酶的作用范圍如圖的作用范圍如圖7-14所示。所示。 催化催化DNA聚合聚合參與參與DNA損損傷的應急狀傷的應急狀態修復態修復修復合成、修復合成、切除引物、切除引物、填補空隙填補空隙功能功能2040400分子數分子數/細胞細胞1011亞基數亞基數+-+5 外切酶活性外切酶活性+ 5 外切酶活性外切酶活性+5 聚合酶活性聚合酶活性pol IIIpol IIpol IE. Coli中的中的DNA聚合酶聚合酶 (4) 真核生物中的真核生物中

17、的DNA聚合酶聚合酶 所有真核生物中的聚合酶的性質基本上同大腸桿菌中的所有真核生物中的聚合酶的性質基本上同大腸桿菌中的聚合酶相似，它的活性有賴于模板，帶聚合酶相似，它的活性有賴于模板，帶3-OH的引物，四種脫的引物，四種脫氧核糖核苷磷酸。氧核糖核苷磷酸。 目前發現的真核生物目前發現的真核生物DNA聚合酶有聚合酶有 。 DNA聚合酶聚合酶： 在迅速增殖的細胞中活力較高。酶分子在迅速增殖的細胞中活力較高。酶分子量在量在165,000一一175,000U之間。最合適的底物是帶缺口的雙鏈之間。最合適的底物是帶缺口的雙鏈DNA，但是帶引物的變性，但是帶引物的變性DNA也是很好的底物。是真核生物也是很好的

18、底物。是真核生物的復制酶。的復制酶。 它同大腸桿菌它同大腸桿菌DNA聚合酶最大不同之處在于聚合酶最大不同之處在于不具外切酶不具外切酶活性活性。 DNA聚合酶聚合酶(損傷修復損傷修復)：為分子量較小為分子量較小(43,000U)的聚合酶。在整個細的聚合酶。在整個細胞周期中它的活力沒有變化，它利用胞周期中它的活力沒有變化，它利用Dnase I 處理過的天然處理過的天然DNA作模板，作模板，對對變性變性DNA幾乎沒有活性，不具外切酶的活性幾乎沒有活性，不具外切酶的活性。 DNA聚合酶聚合酶（線粒體）：（線粒體）：是一個大分子酶，在細胞內含量很低，因是一個大分子酶，在細胞內含量很低，因此不容易純化。這

19、個酶可以使用帶缺口的此不容易純化。這個酶可以使用帶缺口的DNA作底物，但以多聚作底物，但以多聚(A)、寡聚、寡聚(dT)8-10作為底物，酶活力更高。作為底物，酶活力更高。 DNA聚合酶聚合酶負責線粒體負責線粒體DNA的復制。的復制。 DNA聚合酶聚合酶和和DNA聚合酶聚合酶（主要復制酶）（主要復制酶）: 是真核生物的復制酶，是真核生物的復制酶，主要根據是聚合酶主要根據是聚合酶的活性隨細胞周期而變化。的活性隨細胞周期而變化。 DNA聚合酶聚合酶：功能不詳。：功能不詳。 2 DNA連接酶連接酶 DNA Ligase DNA連接酶催化一個連接酶催化一個DNA鏈的鏈的5磷酸根與另一磷酸根與另一DNA

20、鏈的鏈的3羥基形成磷酸二酯鍵。羥基形成磷酸二酯鍵。 但兩個鏈都必須與同一另外的鏈互補結合，而且兩鏈必須但兩個鏈都必須與同一另外的鏈互補結合，而且兩鏈必須相鄰，即只能連接一個切口相鄰，即只能連接一個切口(nick)而不能連接一個豁口而不能連接一個豁口(gap)(丟丟失核苷酸失核苷酸)，如圖，如圖7-15所示。所示。例子：例子：T4誘導的連接酶不僅能誘導的連接酶不僅能在模板上連接在模板上連接DNA和和DNA之間的之間的切口，也能連接切口，也能連接RNA和和RNA之間的切口，不僅能連接之間的切口，不僅能連接DNA中中的單鏈切口或雙鏈的粘性末端，而且能連接平頭雙鏈的單鏈切口或雙鏈的粘性末端，而且能連接

21、平頭雙鏈DNA 。大大腸桿菌連接酶則不行腸桿菌連接酶則不行。 3 與解鏈有關的酶和蛋白質與解鏈有關的酶和蛋白質 DNA是雙螺旋，在復制中雙螺旋要解開，雙螺旋的解是雙螺旋，在復制中雙螺旋要解開，雙螺旋的解開使得復制叉前面產生正超螺旋，如果這些應力不以某種開使得復制叉前面產生正超螺旋，如果這些應力不以某種方式釋放將妨礙復制叉前進。方式釋放將妨礙復制叉前進。 現在已找到一些酶和蛋白質，它們或者能使現在已找到一些酶和蛋白質，它們或者能使DNA雙鏈雙鏈變得易于解開，或者可以使超螺旋分子松弛，以下介紹一變得易于解開，或者可以使超螺旋分子松弛，以下介紹一些這類蛋白質。些這類蛋白質。 (1) 單鏈結合蛋白單鏈

22、結合蛋白 (SSB蛋白蛋白) SSB蛋白：蛋白：是缺乏酶活性的復制輔助蛋白，可以在遠低是缺乏酶活性的復制輔助蛋白，可以在遠低于于Tm的溫度下使雙鏈的溫度下使雙鏈DNA拆開，并牢牢地結合在單鏈拆開，并牢牢地結合在單鏈DNA上，穩定單鏈區域的蛋白質。上，穩定單鏈區域的蛋白質。（ SSB保護復制中的保護復制中的DNA單鏈部分單鏈部分不被核酸酶降解）不被核酸酶降解） 首先在大腸桿菌中發現，后來發現許多種生物中都有這首先在大腸桿菌中發現，后來發現許多種生物中都有這類蛋白質。在文獻中，這類蛋白曾用過多種名稱：解旋蛋白類蛋白質。在文獻中，這類蛋白曾用過多種名稱：解旋蛋白(unwindingproteill)

23、，熔化蛋白，熔化蛋白(mel2ingprptein)，螺旋降穩蛋，螺旋降穩蛋白白(helixdestabizingprotein)。 (2) 解鏈酶（解鏈酶（DNA解旋酶；解旋酶；DNA helicases） 解鏈酶解鏈酶(解螺旋酶解螺旋酶)：是一類能通過水解是一類能通過水解ATP獲得能量來解開獲得能量來解開雙鏈雙鏈DNA的酶稱為的酶稱為DNA解鏈酶解鏈酶。解鏈酶依賴于單鏈解鏈酶依賴于單鏈DNA 的存在的存在 分解分解ATP獲得能量獲得能量 具具引發酶的功能引發酶的功能（合（合成小片段的成小片段的RNA作為后隨鏈的引物作為后隨鏈的引物） 如果雙鏈如果雙鏈DNA中有中有單鏈末端或缺口單鏈末端或缺

24、口，則，則DNA解鏈酶可以首先結解鏈酶可以首先結合在這一部分，然后逐步向雙鏈方向移動，復制時大部分合在這一部分，然后逐步向雙鏈方向移動，復制時大部分DNA解解鏈酶可以沿著后隨鏈模板的鏈酶可以沿著后隨鏈模板的53方向隨著復制叉的前進而移動，方向隨著復制叉的前進而移動，只有只有rep蛋白（蛋白（一種大腸桿菌解鏈酶）一種大腸桿菌解鏈酶）是沿前導鏈模板的是沿前導鏈模板的35方方向移動。因此在復制時向移動。因此在復制時rep蛋白和某蛋白和某DNA解鏈酶分別在解鏈酶分別在DNA的兩的兩條母鏈上協同作用以解開雙鏈條母鏈上協同作用以解開雙鏈DNA（圖（圖7-16） (3) 拓撲異構酶拓撲異構酶(Topoiso

25、merase)： 是催化是催化DNA拓撲異構體拓撲異構體(Topoisomer)相互轉換相互轉換的一類酶。的一類酶。 拓撲異構酶能與拓撲異構酶能與DNA形成共價結合的形成共價結合的蛋白質蛋白質-DNA中間體中間體，從而在其骨架的磷酸二酯鍵處造成，從而在其骨架的磷酸二酯鍵處造成暫時性裂口，使暫時性裂口，使DNA的多核苷酸鏈得以穿越，從而的多核苷酸鏈得以穿越，從而改變改變DNA分子的拓撲狀態。分子的拓撲狀態。 根據酶作用的機理及其介導一條鏈還是二條鏈根據酶作用的機理及其介導一條鏈還是二條鏈的斷裂，拓撲異構酶可分為的斷裂，拓撲異構酶可分為型型和和型型。 型型拓撲異構酶的共同特點是：拓撲異構酶的共同特

26、點是： 僅切斷雙鏈僅切斷雙鏈DNA中的一條鏈，即催化瞬時的中的一條鏈，即催化瞬時的單鏈斷裂和連接。單鏈斷裂和連接。 不需要能量輔助因子，如不需要能量輔助因子，如ATP和和NAD等，因此等，因此不能催化需能的超螺旋化結構。不能催化需能的超螺旋化結構。型型拓撲異構酶一般拓撲異構酶一般都都使高度超螺旋的使高度超螺旋的DNA松弛松弛。 型型拓撲異構酶的共同特點是：拓撲異構酶的共同特點是： 同時切斷、縫合同時切斷、縫合DNA的兩條鏈。的兩條鏈。 需要能量輔助因子，可以作用于任何相交的兩需要能量輔助因子，可以作用于任何相交的兩對雙鏈對雙鏈DNA。 大腸桿菌拓撲異構酶大腸桿菌拓撲異構酶I（屬于（屬于型酶型酶

27、） 概述：拓撲異構酶概述：拓撲異構酶 (E. coli)催化負超螺旋催化負超螺旋DNA的的松弛松弛。 拓撲異構酶拓撲異構酶也參與也參與DNA的打結和解結。的打結和解結。 將兩個互補的單鏈將兩個互補的單鏈DNA環耦合為雙鏈環耦合為雙鏈DNA環。環。 完整的全酶是一分子量完整的全酶是一分子量97 kDa的蛋白。的蛋白。 大腸桿菌拓撲異構酶大腸桿菌拓撲異構酶 I 的特點是：的特點是： 僅切斷雙鏈僅切斷雙鏈DNA中的中的單鏈單鏈并催化瞬時的并催化瞬時的單鏈斷裂單鏈斷裂和連接和連接。 由于反應的產物還是閉環由于反應的產物還是閉環DNA，因此，酶反應機制，因此，酶反應機制是先切開雙鏈是先切開雙鏈DNA中的

28、一條鏈，中的一條鏈，使使切開切開鏈的末端沿螺旋鏈的末端沿螺旋的方向轉動的方向轉動，然后把切口封起來，達到，然后把切口封起來，達到松旋松旋的目的。的目的。 不需要能量輔助因子。如：不需要能量輔助因子。如：ATP NAD (煙酰胺腺嘌呤二核苷酸) ，最初從大腸桿菌中分離到一種叫蛋白，后來定名為大腸桿菌拓撲異構酶大腸桿菌拓撲異構酶 I 。StructureoftheTopoI/contactwithDNA 后來發現這種酶廣泛存在于各種生物中，不同學者曾給后來發現這種酶廣泛存在于各種生物中，不同學者曾給予各種命名：予各種命名：轉軸酶轉軸酶(swivelase)，松旋酶松旋酶(untwisting en

29、zyme)，DNA松弛酶松弛酶(DNA relaxing enzyme)，切割封口酶切割封口酶(nickingclosing enzyme)。 Topo I 酶松弛超螺旋酶松弛超螺旋DNA時不需要時不需要ATP，它可以催化三，它可以催化三種拓撲轉換反應種拓撲轉換反應(圖圖7-17)。拓撲異構酶拓撲異構酶 I (E. coli)催化負超螺旋催化負超螺旋DNA的的松弛。松弛。拓撲異構酶拓撲異構酶 I也參與也參與DNA的打結和解結。的打結和解結。 將兩個互補的單鏈將兩個互補的單鏈DNA環耦合為雙鏈環耦合為雙鏈DNA環。環。TopoIReactions僅切斷雙鏈DNA的一條鏈，即催化瞬時的單鏈斷裂和連接，不需要能量輔助因子如ATP和NAD等TopoI作用機制23圖圖2-21 拓撲異構酶拓撲異構酶的作用機制的作用機制 拓撲異構酶拓撲異構酶 （屬于（屬于型酶）型酶）