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文檔簡介

1、藥用植物學實驗目錄緒論實驗一顯微鏡的構造和使用實驗二植物細胞后含物及細胞壁實驗三綜合實驗植物細胞減數分裂實驗四植物組織(一)實驗五植物組織(二)實驗六根的顯微構造實驗七莖的顯微構造實驗八葉的形態和內部構造實驗九植物繁殖器官實驗十綜合實驗薄荷實驗十藻、菌、地衣實驗十一苔蘚、蕨類、祼子植物實驗十一設計性實驗被子植物花圖式與花程式及檢索表的使用實驗十二被子植物1實驗十三被子植物2實驗十四被子植物3實驗十五被子植物4實驗十六被子植物5附錄植物標本的采集制作及其鑒定緒論、實驗注意事項(一)實驗前的準備工作:1根據實驗指導,預習與本次實驗相關的課堂講授內容,并閱讀指定的參考文獻。2仔細閱讀本次實驗的內容,

2、要求弄懂實驗原理和方法。3對于需要同時進行的幾項實驗,預先思考進行的先后次序,以便實驗時節約時間。4準備好各種自備的實驗用品,如鉛筆(HB、2B各一支)、白色橡皮擦、直尺、報告紙等。(二)實驗過程中的幾點要求:1遵守實驗室規則,保持實驗室安靜。2實驗認真、觀察仔細,觀察應當和思考結合起來,因此實驗時應當手、眼、腦三者并用。3由于實驗時間有限,實驗時應當善于安排自己的工作,注意力應當集中在主要的問題上,不要花過多時間去鉆研細小的次要問題,一時解決不了的次要問題,可留待課外時間去解決。4實驗開始前,教師進行講解和提問時,應當注意聽取,并作必要的記錄。5在實驗過程中,應當隨時觀察所得現象,測量數據,

3、計算、推理及結論等寫在報告紙上,應當養成能隨時作出準確、清楚、整齊的記錄而不需要重抄的良好習慣,測量的數據禁止用另外紙片記錄。6實驗進行過程中,必須注意聽取接受教師的指導。7實驗桌面上和地面上應隨時保持整潔,非實驗必要物品一律不許放在桌面或桌架上。8酒精燈用后,應及時熄滅。9紙屑、廢紙應置紙簍內,不得亂丟在地上,紙簍內不得倒入液體。(三)實驗完畢時的幾點要求:1按照教師指定時間交實驗報告。2把實驗用品收拾干凈,放在指定位置,擦凈桌面。3值日負責最后清掃實驗室地面,清理桌面,擦凈黑板及完成指定的工作。4實驗完畢后,應檢查水源、電源是否關好,離開實驗室應關好門窗。二、細胞壁及內含物的顯微化學鑒別法

4、取切片或粉末少量,置載玻片上。照下列方法加規定的試液12滴,加蓋玻片,置顯微鏡下觀察:1木化細胞壁:加間苯三酚試液12滴,稍放置或微熱后,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。2.木栓化或角質化細胞壁:加蘇丹田試液或紫草試液,放置后或微熱后,顯橘紅色、紅色或紫紅色。3纖維素細胞壁:加氯化鋅碘試液,或先加碘試液濕潤后,稍放置,用濾紙條吸去多余的碘液,再加66%(ml/ml)硫酸溶液,顯藍色或紫色。4淀粉粒:加碘試液顯藍色或紫色。5 .菊糖:加10%a茶酚的乙醇溶液,再加硫酸,顯紫紅色并很快溶解。6 .脂肪油、揮發油或樹脂:(1)加蘇丹田或紫草試液,顯橘紅色、紅色或紫紅色。(2)加90%乙醇

5、,脂肪油不溶解(蓖麻油及豆油例外),揮發油則溶解。7糊粉粒:加碘試液,顯棕色或黃棕色;加三硝基苯酚試液,顯黃色;加硝酸汞溶液,顯磚紅色。8粘液:(1)加墨汁,粘液呈無色透明塊狀,而其他細胞及細胞內含物均顯黑色。(2)加釕紅試液,顯紅色。9 草酸鈣結晶:加稀醋酸不溶解;加稀鹽酸即溶解而無氣泡發生;加硫酸(12)溶液,片刻后析出硫酸鈣針狀結晶。10碳酸鈣(鐘乳體):加稀鹽酸即溶解,同時有氣泡發生。11硅質:加硫酸不溶解。三、藥材圖和顯微圖的一般繪制法生藥鑒定實驗繪圖的目的,是使學生仔細觀察實物標本,并將觀察到的特征通過圖保存下來,供學習和日后參考之用;教師也可根據學生的繪圖來考查學生對實物標本特征

6、的觀察是否仔細和正確無誤。圖可以集中地、突出地表現實物的主要特征,它比單純的文字描述形象的多,易記得多,不少特征用圖比攝影效果好。因此,它是中藥鑒定工作者的一項必須掌握的基本功之一。1藥材圖的繪制法(1)準備工作:除準備繪圖的筆、紙等工具外,還必須對所要繪圖的藥材特征有所了解,應當畫出最本質的、最典型的特征,拋掉次要的和偶然的東西。(2)標本的選擇和處理:應從大量的藥材標本中,選擇具有典型特征,大小適中的標本來畫,不要選擇形狀特異,缺乏典型基本特征的標本,在畫藥材圖的時候,一般的藥材標本不必經過處理,但有些皺縮的葉子應放在軟化器中(盛有氯仿水的干燥器)軟化,然后放在濾紙上展開壓平,以便畫出其全

7、形狀;皮類、莖木類藥材,一端可用刀削平;果實、種子類藥材,有的為了表示出內部種子著生及排列情況,需將果實縱切或橫切。(3)圖的大小和數量:圖的大小是根據標本的特點,圖面的要求來考慮,同時也應該使圖和實物的大小比例成為一個簡單的整數或分數,例如,原大、放大5倍、縮小1/2倍等。總之,圖的大小必須能清楚地表示標本各部分的特點。一種藥材需繪制圖的數量取決于標本的特點和大小,如較大的根類、果實類、卷筒的皮類等,一般只繪制一個圖;片塊狀的皮類,兩面被毛不同的葉類,異形葉等,應繪制正反兩面和相異的圖;很小的種子類藥材,應多繪一些種子,也可以將其中一粒種子倍數放大而畫出表面特征。(4)藥材放置的位置和投影:

8、在畫圖前必須選好標本放置的位置,一方面有利于采光投影,反映出標本的主要特征和立體感,另一方面要避免畫顛倒,如橫生根莖放成水平方向,有芽和地上莖的一端應向上;葉柄的一端應向下,對莖、節、枝痕、果實及種子等的非采光的陰影處,應畫出投射的線條。(5)圖的注解:圖畫好后應當附上盡可能詳細的注解,根據指示線標注各部分名稱和特征的名稱,這些指示線要避免和圖中的線條平行,也要避免深入圖中1/2以上,指示線和指示線之間應當有適當的距離,在圖的下方應注明圖的編號、名稱和放大(縮小)倍數。2顯微圖繪制法藥材的顯微特征可分為兩大類:一類是組織簡圖,一類是組織詳圖、解離組織圖和粉末圖。(1)簡圖:是用來表示低倍鏡下所

9、見各種組織和某些特征,組織的排列和分布情況。在這種圖中,用線條表示各種組織的界限,用符號來表示某些特征細胞的分布,一般不畫出細胞的形狀。通過簡圖的觀察,能對組織構造情況有清晰而簡明的概念,但對每個細胞的情況就不能了解到。( 2) 詳圖:是用來表示在高倍鏡下所見組織中各種細胞的形狀及其排列情況的。常分橫切面圖、縱切面圖和表面觀圖三種。繪制比較典型有代表性的一部分,細胞的形狀、細胞壁的厚度和紋孔及層紋等,都要盡可能畫得準確。如每個細胞都含數目很多而形狀又相似的內含物(如淀粉、糊粉粒)則只需在一部分細胞中畫出作為代表,其余細胞可以不畫。在畫解離組織或粉末特征時,應將顯微鏡下觀察到的主要特征,按類別畫

10、出來,如各種形狀的纖維、石細胞、導管、油細胞、草酸鈣結晶、淀粉粒、保護毛等,同一類的畫在一起。(3)繪圖方法:有徒手繪圖法和利用顯微描繪器的繪圖法等。將繪圖紙放在顯微鏡的右側,左眼觀察物象,右眼看繪圖。將所見物象畫在繪圖紙上,把每個細胞按比例和形狀畫出來,同時還要注意各種組織之間的比例。一般用兩種線條畫圖。一般的薄壁細胞用單線條,繪出細胞的形狀及組織特征;一般的厚壁細胞用雙線條,繪出細胞的形狀及組織特征。在一般的組織詳圖中多是單線條和雙線條混合使用,表示各種細胞壁的厚薄程度和形狀K圖21常用的簡圖符號F說明:A框中的符號是單線。它可根據繪圖的需要延伸或縮短,繪成平直或彎曲狀用以表示內皮層、中柱

11、鞘、形成層、表皮、一列細胞構成的射線、花序軸(肉穗花序的花序軸除外)等。也可用以表示簡圖內某個組織或部分的邊界。B框中的符號就是空白。用以表示各種薄壁組織,如:外皮層、中皮層、栓內層、髓、束間薄壁組織、基本組織、海綿組織、兩列以上的細胞所構成的射線,還可用來表示某個部分中暫時不被強調的組織,例如切皮部中除纖維外的其它組織,木質部中除導管外的其它組織C框中的符號可根據需要延長。它表示木栓層。有時,可認為符號中位于內側的弧(或環)形線代表木栓形成層。D框中的符號是一些交叉線。用以表示纖維(群)或石細胞(群)。E框中的符號是黑色團塊,可隨需要而呈不同形狀。也用以表示纖維(群)或石細胞(群)。F框中的

12、符號是一群小圓點。用以表示除韌皮射線的韌皮部組織。有時可只表示韌皮部中的篩管及其伴胞。G框中的符號是一些與半徑同向的直線。用以表示除木射線外木質部區域。H框中的符號是一些小圓圈。用以表示木質部中的導管(群)。I框中的符號是一些平行的斜線,用以表示厚角組織。也可表示柵欄組織。J框中的符號表示葉片下表皮上的氣孔。K框中的符號是單線構成的環,可隨需要而會成圓形或其它的環。用以表示子房壁。L框中的符號表示有珠柄的胚珠、有種柄的種子或有花柄的花。若去掉符號中的直線,則剩下的部分(即小圓圈)代表無珠柄的胚珠、無種柄的種子或無花柄的花。(4)圖的注解:組織圖的注解方法同藥材外形圖。粉末的注解,是在靠近各類細

13、胞圖的附近標上番號,圖下正中注明圖的名稱及放大的倍數,再下面按圖中的番號順序注明每類特征的名稱,每個番號的右下方用縮寫符號“.表示。”四、常用的顯微制片方法(一)粉末的制備及粉末制片1粉末的制備選擇具有代表性的樣品適量(10g20g),用粉碎器(沖窩、鐵碾等)粉碎,使之全部樣品通過四至五號篩,成藥則應通過六號篩,裝于瓶中備用。注:如有較多的組織(如纖維等)不能過篩,而作殘渣拋去,就會影響該藥材的特征和檢出,造成結果判斷的困難。2粉末制片(1)臨時制片一般制片即以甘油醋酸試液、水或稀甘油作為濕潤劑,與粉末混合后裝片。方法:于載玻片上滴加濕潤劑12滴,用解剖針挑取粉末少許與濕潤劑混合均勻。然后將蓋

14、玻片一側的邊沿輕輕壓在粉末旁載玻片上,慢慢放下,盡量避免氣泡的產生。若濕潤劑未充滿蓋玻片,可在一側滴加少量濕潤劑,使之充滿蓋玻片;若濕潤劑過多而溢于蓋玻片外,則用濾紙屑從側面將過多的濕潤劑吸去,保持制片清潔,再置顯微鏡下觀察。凡含淀粉粒的粉末進行鑒定時,必須先按此法進行。特殊處理制片A若粉末中含有大量淀粉、葉綠體、油脂及色素時,用一般制片方法不易清晰地觀察細胞組織,則可用清潔劑處理制片。最常用的清潔劑為水合氯醛溶液,除能溶解上述物質外,還能使萎縮細胞壁膨脹。方法:取水合氯醛溶液12滴于載玻片中央,再挑取粉末少許,混合后在火焰上來回加熱,并以解剖針攪拌,補充23次水合氯醛溶液(切勿使溶液蒸干),

15、然后將處理的粉末集中一處,以稀甘油12滴混合后蓋上蓋玻片,用濾紙屑清潔蓋玻片周圍多余藥液,再置鏡下觀察。B若粉末色澤太暗,不易清楚觀察,亦可將粉末先用漂白劑處理。常用漂白劑為過氧化氫、漂白粉或碳酸鈣溶液(合金氏溶液)浸漬以后,以沸水及冷水洗滌(離心分離)后,再挑取少許,按一般制片法裝片觀察。C粉末油脂太多,可先放在兩層濾紙中壓去部分油脂后再以水合氯醛處理,或直接以脂溶媒氯仿浸漬,提出油指后再進行制片觀察。D若粉末纖維過多,細胞彼此不易分離,則用5%氫氧化鉀液浸漬若干小時或水浴上加熱浸漬,使組織崩解后再進行制片觀察。(2)永久制片 將粉末浸入10%威尼斯松節油醇液中,置于干燥器材內,待威尼斯松節

16、油呈稠厚狀態時,加可取混懸液滴在載玻片上,加蓋玻片封藏,并于蓋玻片四周封加拿大樹膠即成。 將粉末置于30%甘油醇液中,放干燥器中,待粉末被透化,甘油變稠,用解剖針挑取粉末置于載玻片上,加一滴甘油明膠封片,蓋玻片四周以加拿大樹膠涂封。 將粉末放在載玻片上,先用無水乙醇充分濕潤,瀝去無水乙醇,加二甲苯1滴,使其充分混勻,瀝去二甲苯,如粉末已透明,則加加拿大樹膠的二甲苯溶液1滴,然后按前法加蓋玻片。樹膠的量應適當,制好的標本應在溫暖無塵處放置,待其中的二甲苯揮發,樹膠硬固后,方可使用。(二)徒手切片這是一種最基本也是最常用的切片方法,不但操作簡單迅速,而且制成的切片還可以保持其細胞和內含物的固有形態

17、,便于進行各種顯微化學反應。中藥鑒定工作者對此必須養成熟悉的操作技巧。1材料的制備:藥材上如附有泥沙雜質,應先刷除干凈,以免切片時損壞刀口。粗大或長形的材料應先切成適當大小的塊或短段,一般以寬不超過1cm,長不超過3cm為宜,較堅硬的材料則須先使其軟化才能切片。簡便的軟化方法是在玻質干燥器中不放干燥劑而放入含0.5%苯酚的水,把材料放在小玻器中,然后放在干燥器的隔板上,蓋緊。一般材料經過1224小時后可吸濕軟化,供切片用,如仍然過硬,則可放入水中浸軟或煮軟,特別堅硬的材料可入壓力鍋煮軟(120)。過于柔軟的材料不便夾持切片,可將其浸入7075%乙醇中,約20分鐘后即可變得較硬。注意:需要觀察切

18、片中糊粉粒、粘液、菊糖等物質的材料,在軟化、切片、裝片等過程中均不可與水直接接觸,以免溶解;需要觀察揮發油、樹脂等的材料,則不可與高濃度乙醇或其他有機溶劑接觸。柔軟而薄的材料,如葉片、花瓣等以及細長的莖或根等,不便直接手持切片的,可用接骨木、通草或向日葵、玉蜀黍等的莖髓剖成兩半夾著切。細小的種子或果實,既不能手持也不能用木髓夾著切的,可用軟木塞或白橡皮一塊,在一端切一窄縫,將材料嵌入其中切片;如仍不行,則可用甘油樹膠將材料粘接在軟木塞一端,或取一小方塊石蠟,用燒紅的解剖針在石蠟塊的一端燙開一小孔,立即將材料放入孔中,冷后凝固即可供切片用。2徒手切片刀:徒手切片刀最好是刀刃一面平,一面凹的特種有

19、柄剃刀,或用比較堅固的保安剃胡刀片。3切片方法:用左手拇指、食指夾持材料,并用中指托著,使材料略高出食、拇二指,肘關節靠在桌沿,以避免手臂及手腕的搖動,并使材料的切面保持水平。右手執刀片,刀口向內并使刀刃與材料的切面平行,移動右臂使刀鋒自左前方向右后方切削,即可得薄片。在切片時,材料的切面和刀刃上必須經常加水(較堅實的材料)或50%乙醇(較柔軟或含粘液的材料)保持濕潤,以防止材料的干燥收縮和避免切出的薄片粘在刀上,不易取下,切出的薄片用筆輕輕從刀上拂下,放在盛有蒸餾水或50%乙醇的培養皿中,剔除木髓等夾持材料及過厚的切片,即得。圖5徒手切片的持刀方式4.裝片:徒手切片一般多不然色,直接封藏在適

20、宜的試劑中,如水合氯醛液、稀甘油或顯微化學試劑等。取材方法是毛筆選取上述已切好的完整、清晰的薄片,放在清潔的載玻片上,加上所需試劑,蓋上蓋玻片,即可觀察。如果制成半永久性標本片,可用稀甘油洗去水合氯醛液,然后封藏在熔化了的甘油明膠中。(三)石蠟切片見藥用植物學教材實驗部分。(四)表面制片表面制片主要是觀察表皮細胞的形狀、著毛情況、氣孔的類型和數目以及角質層的特征等,一般多用于葉的上下表皮及草質莖的表皮。1 .鮮植物標本:用解剖剪刀剪下所需的制片部位,如葉片,應從葉基或柄部剪下,過大的葉片應在規定的觀察范圍剪下一個方塊(5X5cm或4Mcm),用清水沖洗一次,再泡在30%得乙醇溶液中,以防腐。2

21、 .干藥材樣品:如荊芥葉、枇杷葉、益母草莖、陳皮等,在剝離前應經過軟化的過程,先用冷水浸,再用溫水浸,較硬的材料(如枳殼類),還應泡在50%甘油酒精中,經35日,方能剝離制片。剝離制片的方法:將已準備好的材料取出,放置于干凈的分割木板或玻板上,認清上、下表皮,再用刀片輕輕地在表面上劃一刀,不能劃斷葉片,再用小銀子撕取表皮。有時,表皮不易與葉肉組織分離開來,應借助刀片,一邊撕剝,一邊切割(平切),取下一塊(0.5:0.5cm)即可,速置于干凈的載玻片上,滴加一滴稀甘油,封片,即可觀察。如需透化,可滴加水合氯醛液,微微加熱,在滴加稀甘油封片,觀察。(五)解離組織制片解離組織法在顯微鑒定中,對于觀察

22、木化、栓化及角質化的組織是必不可少的,特別常用在細胞、纖維、導管、管胞的單個細胞形狀的觀察以及角質化表皮的制片觀察。解離是用化學試劑使組織中各細胞之間的胞間層溶解,達到細胞分離。對于不同性質的藥材所采用的方法不同。如果藥材的薄壁組織占極大部分,木化組織很少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如薄壁組織較少,木化組織較多或集合成較大的群束,須用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在進行組織解離前,應將藥材切成不粗于火柴梗的條狀或片狀。1氫氧化鉀法:將少量材料置于試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量(25ml),在沸騰的水浴中加熱,至用玻璃棒擠壓材料能離散為止(一般需要30分鐘),傾去堿液,用清水洗滌35次,取少許在載玻片上,

23、用解剖針撕開,用稀甘油封片觀察。2硝鉻酸法:將材料放入小試管中,加入20%硝酸與20%鉻酸的等量混合液適量,以淹沒材料為止,放置20分鐘,用玻璃棒擠壓材料能離散為止。傾去酸液,用清水洗滌35次,取少許在載玻片上,用解剖針撕開,用稀甘油封片觀察。(經此法解離的木化細胞壁不再顯木化反應)3.氯酸鉀法:將材料置于試管中,加50%(V/V)硝酸以淹沒材料為度,投入相當于材料體積量的氯酸鉀粉末,并在小火上或沸水浴中加熱,待產生的氣泡平息后,立即再投入少量氯酸鉀,以保持氣泡穩定發生,至用玻璃棒擠壓材料能離散為止,余同上法。五、藥用植物學實驗報告的基本要求(一)實驗次數及名稱(二)實驗材料的來源(寫出品種的

24、學名)(三)內容:(根據所做實驗,選擇如下內容)1植物形態:主要鑒別特征或對比主要鑒別特征,文字要精簡,重點要突出。2性狀:注意描述的次序,歸納要點同上。3組織:注意有外到內的觀察和描述,各部分的比例、結構特征及內含物的情況等。4粉末:首先應觀察紀錄粉末顏色和氣味,有的還需注意質地。顯微鏡下應注意各組分的特征,包括形狀、顏色、大小、多少等,并多以繪圖表示。注:實驗報告紙上的注意事項1文圖必須字跡清楚,布局合理;2保持紙上整潔,不得亂涂亂畫;3圖文均用鉛筆。實驗一顯微鏡的構造和使用、植物細胞基本結構一、實驗目的1了解普通光學顯微鏡的構造和各部分性能,學習和掌握顯微鏡的使用方法。2學習生活細胞觀察

25、方法,掌握植物細胞基本結構,了解質體類型及特點。3學習臨時制片方法(斯取法、刮取法)和生物繪圖方法。二、實驗器具與試劑光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、解剖針、刀片、剪刀、吸水紙、擦鏡紙、紗布塊、吸水紙、蒸儲水、稀碘液、蘇丹田、水合氯醛、稀甘油、20須糖液。三、實驗材料洋蔥鱗葉表皮細胞制片、新鮮洋蔥、新鮮女貞葉、新鮮綠辣椒、新鮮紅辣椒、番茄、蘿卜。四、實驗內容(一)普通光學顯微鏡的構造顯微鏡是研究植物細胞結構、組織特征和器官構造的重要的和不可替代的儀器。顯微鏡的種類繁多,可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。電子顯微鏡結構相對復雜,光學顯微鏡結構較為簡單,基本結構均可分為機械部分和光學系統部

26、分。1機械部分:顯微鏡機械部分是由精密而牢固的零件組成,主要包括鏡座、鏡臂、載物臺、鏡筒、物鏡轉換器和調焦裝置等。(1)鏡座:是顯微鏡的基座,用以支持鏡體平衡,其上裝有反光鏡或照明光源。(2)鏡柱:是鏡座上面直立的短柱,連接、支持鏡臂及以上的部分。(3)鏡臂:彎曲如臂,上接鏡筒、下接鏡柱,支持載物臺、聚光器和調焦裝置。是取放顯微鏡時手握的部位。直筒顯微鏡鏡臂和鏡柱連接處有活動關節,可使顯微鏡在一定范圍內后傾,一般不超過30。(4)鏡筒:一般長160mnrr170mm其上端放置目鏡,下端與物鏡轉換器相連。雙筒斜式的鏡筒,兩鏡筒距離可以根據兩眼距離及視力來調節。(5)物鏡轉換器:是固著在鏡筒下端的

27、圓盤,其上裝有不同倍數的物鏡。可以左右自由轉動,便于更換物鏡。(6)載物臺:放置切片的平臺,中央有一個通光孔,旁邊裝有固定玻片的壓夾或標本移動器。有的顯微鏡載物臺下裝有聚光鏡。(7)調焦裝置:鏡臂兩側有粗、細調焦輪各一對,旋轉時可使鏡筒上升或下降,以便得到清晰物像,即調焦。大的一對是粗調,每旋轉一周可使鏡筒升降10mm,察的目標,并將其移至視野中央,然后轉高倍鏡至工作位置。高倍鏡下視野變暗用于低倍物鏡觀察;小的一對是細調,每旋轉一周可使鏡筒升降0.1mm,用于高倍物鏡觀察。使用時,必須先用低倍鏡、后用高倍鏡。2光學部分:由成像系統和照明系統組成。前者包括物鏡和目鏡,后者包括反光鏡(或內置光源)

28、、聚光器。(1)物鏡:物鏡是決定顯微鏡性能(如分辨率)的最重要部件。它將標本第一次放大成倒像。物鏡放大倍數一般低倍物鏡有10X、4X,高倍物鏡為40X,而油鏡為100X。使用油鏡時,玻片與物鏡之間需加入折射率大于1的香柏油作為介質。(在物鏡上標有“40/0.65160/0.17”字樣。40表示物鏡放大倍數。0.65表示鏡口率,其數值越大工作距離越小,分辨能力越高。分辨率是指顯微鏡能分辨兩點之間最小的距離。160表示鏡筒的長度。0.17表示要求蓋玻片的厚度。)(2)目鏡:目鏡的作用是將物鏡放大所成的像進一步放大,放大倍數有5X、10X、15X等。目鏡內可安裝“指針”,也可安裝測微尺。(3)聚光器

29、:由聚光鏡和彩虹光圈(可變光欄)組成。聚光鏡可以使光匯集成束,增強被檢物體的照明。彩虹光圈通過撥動其操作桿,可使光圈擴大或縮小,借以調節通光量。有的聚光器下方還有一個濾光片托架,根據鏡檢需要可放置濾光片。構造簡單的顯微鏡無聚光器,僅有光圈盤,其上有若干個大小不同的圓孔,使用時選擇適當的圓孔對準通光孔。( 4) 反光鏡:反光鏡的作用是把光源投射來的光線向聚光鏡反射。反光鏡有平、凹兩面,平面鏡反光,凹面鏡兼有反光和聚光的作用。一般前者在光線充足時使用,后者在光線不足時使用。裝有內置光源的顯微鏡,只要打開電源開關,使用光亮調節器即可。(二)普通光學顯微鏡的使用1取放:拿取顯微鏡時,應一只手握住鏡臂,

30、另一只手平托鏡座。將顯微鏡放置在座位桌子左側距桌邊510cm處,以便騰出右側位置進行觀察記錄或繪圖。裝配好適當的目鏡或否。2對光:對光時,先將低倍物鏡對準通光孔,用左眼或雙眼觀察目鏡。然后,調節反光鏡或打開內置光源并調節光強,使鏡下視野內的光線明亮、均勻又不刺眼。3低倍鏡使用:將玻片標本放置在載物臺上固定好,使觀察材料一定正對著通光孔中心。轉動粗調焦輪下降物鏡距玻片5mmt,接著用左眼(或雙眼)注視鏡筒,再慢慢用粗調焦輪上升物鏡,直到看見清晰的物像為止。4高倍鏡使用:由于高倍鏡視野范圍更小,所以使用前應在低倍鏡下選好欲觀且物像不清晰時,可調節光亮度和細調焦輪,不得使用粗調。由于高倍鏡使用時與玻

31、片之間距離很近,因此,操作時要特別小心,以防鏡頭碰擊玻片。5油鏡使用:在高倍鏡下將要觀察的部分移至視野中央,上升鏡筒約1.5cm,然后轉油鏡至工作位置。在蓋玻片要觀察的位置上滴一滴香柏油,慢慢下降鏡筒,使之與油滴接觸,然后慢慢調節細調焦輪上升鏡筒到物像清晰。若發現香柏油液滴與因物鏡分離,應重新下降鏡筒至與油滴接觸,然后細調。油鏡工作距離非常小(約為0.2mm,所以這步操作要特別小心,防止壓碎玻片。6調換玻片:觀察時如需調換玻片,要將高倍鏡換成低倍鏡,取下原玻片,換上新玻片,重新從低倍鏡開始觀察。7使用后整理:觀察完畢后,上升鏡筒,取下玻片,將物鏡轉離通光孔呈非工作狀態,放上擦鏡布,按原樣收好顯

32、微鏡。8使用注意事項: 顯微鏡是精密儀器,使用時一定嚴格遵守操作規則,不許隨意拆修。 隨時保持顯微鏡清潔。觀察臨時裝片時,一定要將蓋玻片四周溢出的水或其他液體用吸水紙吸干凈,以免污染鏡頭。已被污染的鏡頭要用鏡頭紙擦試。 觀察時,坐姿要端正,雙目同時張開,切勿睜一眼、閉一眼或用手遮擋一只眼。 觀察玻片時,一定要按先低倍、后高倍物鏡順序使用。細調焦輪是在觀察到物像而不夠清晰時使用,切忌沿同一方向不停地轉動細調焦輪。(三)細胞基本結構觀察1植物細胞基本結構取洋蔥鱗葉表皮細胞永久制片或用新鮮洋蔥材料撕取表皮制臨時裝片觀察,可見表皮為一層細胞,其細胞多為近長方形,選擇形狀較規則、結構清晰的細胞移至高倍鏡

33、下觀察,可分辨細胞壁、細胞質、細胞核結構。由于大液泡的形成,細胞核位于一側,高倍鏡下還可看見核仁。通過調節細調焦輪可使細胞的不同層次依次成像,加深對細胞立體結構的理解。加水合氯醛,加熱透化,再加稀甘油。鏡下觀察細胞變化。細胞壁較透明,細胞質無色均勻,細胞核扁球形,仔細觀察可見其內13個發亮的核仁。從一側滴加稀碘液,細胞質被染成淺黃色,細胞核被染成深黃色從一側滴加20%蔗糖液,放置20分鐘后觀察質壁分離現象。圖2洋蔥嶙葉表皮細胞的構造J期胞質2,液泡3.細胞壁2.質體(1)葉綠體:取新鮮女貞葉,撥取葉肉組織制成臨時裝片觀察,其細胞為狹長形,內含多數橢圓形綠色顆粒,即為葉綠體。高倍鏡下可觀察到細胞

34、內葉綠體接近細胞壁并在循一定方向環形流動,這是葉綠體隨細胞質環流的結果。(2)有色體:用銀子取少量新鮮紅辣椒靠近果皮的果肉細胞制成臨時裝片觀察,高倍鏡下可觀察到細胞呈近圓形,內含許多、細小、呈橘紅色的不規則顆粒,為有色體。另取番茄果肉細胞制成臨時裝片觀察桔紅色的顆粒,為有色體(3)白色體:再用銀子取少量新鮮蘿卜制成臨時裝片觀察,高倍鏡下細胞也呈近圓形,個別細胞內含許多白色顆粒,即為白色體。五、實驗報告1 .繪12個洋蔥鱗葉表皮細胞圖并引線注明各部分名稱。2 .繪細胞中葉綠體、有色體形態圖,并引線注明。3、敘述典型植物細胞的亞顯微結構的組成及各部分主要功能?4、質體有哪幾種類型?它們的結構和功能

35、之間有何關系?實驗二顯微鏡的構造和使用、植物細胞基本結構一、實驗目的1了解普通光學顯微鏡的構造和各部分性能,學習和掌握顯微鏡的使用方法。2學習生活細胞觀察方法,掌握植物細胞基本結構,了解質體類型及特點。3學習臨時制片方法(斯取法、刮取法)和生物繪圖方法。二、實驗器具與試劑光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、解剖針、刀片、剪刀、吸水紙、擦鏡紙、紗布塊、吸水紙、蒸儲水、稀碘液、蘇丹田、水合氯醛、稀甘油、20須糖液。三、實驗材料洋蔥鱗葉表皮細胞制片、新鮮洋蔥、新鮮女貞葉、新鮮綠辣椒、新鮮紅辣椒、番茄、蘿卜。四、實驗內容(一)普通光學顯微鏡的構造顯微鏡是研究植物細胞結構、組織特征和器官構造的重要的和

36、不可替代的儀器。顯微鏡的種類繁多,可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。電子顯微鏡結構相對復雜,光學顯微鏡結構較為簡單,基本結構均可分為機械部分和光學系統部分。1機械部分:顯微鏡機械部分是由精密而牢固的零件組成,主要包括鏡座、鏡臂、載物臺、鏡筒、物鏡轉換器和調焦裝置等。(1)鏡座:是顯微鏡的基座,用以支持鏡體平衡,其上裝有反光鏡或照明光源。(2)鏡柱:是鏡座上面直立的短柱,連接、支持鏡臂及以上的部分。(3)鏡臂:彎曲如臂,上接鏡筒、下接鏡柱,支持載物臺、聚光器和調焦裝置。是取放顯微鏡時手握的部位。直筒顯微鏡鏡臂和鏡柱連接處有活動關節,可使顯微鏡在一定范圍內后傾,一般不超過30。(4)鏡筒:一般長

37、160mnrr170mm其上端放置目鏡,下端與物鏡轉換器相連。雙筒斜式的鏡筒,兩鏡筒距離可以根據兩眼距離及視力來調節。(5)物鏡轉換器:是固著在鏡筒下端的圓盤,其上裝有不同倍數的物鏡。可以左右自由轉動,便于更換物鏡。(6)載物臺:放置切片的平臺,中央有一個通光孔,旁邊裝有固定玻片的壓夾或標本移動器。有的顯微鏡載物臺下裝有聚光鏡。(7)調焦裝置:鏡臂兩側有粗、細調焦輪各一對,旋轉時可使鏡筒上升或下降,以便得到清晰物像,即調焦。大的一對是粗調,每旋轉一周可使鏡筒升降10mm,察的目標,并將其移至視野中央,然后轉高倍鏡至工作位置。高倍鏡下視野變暗用于低倍物鏡觀察;小的一對是細調,每旋轉一周可使鏡筒升

38、降0.1mm,用于高倍物鏡觀察。使用時,必須先用低倍鏡、后用高倍鏡。2光學部分:由成像系統和照明系統組成。前者包括物鏡和目鏡,后者包括反光鏡(或內置光源)、聚光器。(1)物鏡:物鏡是決定顯微鏡性能(如分辨率)的最重要部件。它將標本第一次放大成倒像。物鏡放大倍數一般低倍物鏡有10X、4X,高倍物鏡為40X,而油鏡為100X。使用油鏡時,玻片與物鏡之間需加入折射率大于1的香柏油作為介質。(在物鏡上標有“40/0.65160/0.17”字樣。40表示物鏡放大倍數。0.65表示鏡口率,其數值越大工作距離越小,分辨能力越高。分辨率是指顯微鏡能分辨兩點之間最小的距離。160表示鏡筒的長度。0.17表示要求

39、蓋玻片的厚度。)(2)目鏡:目鏡的作用是將物鏡放大所成的像進一步放大,放大倍數有5X、10X、15X等。目鏡內可安裝“指針”,也可安裝測微尺。(3)聚光器:由聚光鏡和彩虹光圈(可變光欄)組成。聚光鏡可以使光匯集成束,增強被檢物體的照明。彩虹光圈通過撥動其操作桿,可使光圈擴大或縮小,借以調節通光量。有的聚光器下方還有一個濾光片托架,根據鏡檢需要可放置濾光片。構造簡單的顯微鏡無聚光器,僅有光圈盤,其上有若干個大小不同的圓孔,使用時選擇適當的圓孔對準通光孔。( 4) 反光鏡:反光鏡的作用是把光源投射來的光線向聚光鏡反射。反光鏡有平、凹兩面,平面鏡反光,凹面鏡兼有反光和聚光的作用。一般前者在光線充足時

40、使用,后者在光線不足時使用。裝有內置光源的顯微鏡,只要打開電源開關,使用光亮調節器即可。(二)普通光學顯微鏡的使用1取放:拿取顯微鏡時,應一只手握住鏡臂,另一只手平托鏡座。將顯微鏡放置在座位桌子左側距桌邊510cm處,以便騰出右側位置進行觀察記錄或繪圖。裝配好適當的目鏡或否。2對光:對光時,先將低倍物鏡對準通光孔,用左眼或雙眼觀察目鏡。然后,調節反光鏡或打開內置光源并調節光強,使鏡下視野內的光線明亮、均勻又不刺眼。3低倍鏡使用:將玻片標本放置在載物臺上固定好,使觀察材料一定正對著通光孔中心。轉動粗調焦輪下降物鏡距玻片5mmt,接著用左眼(或雙眼)注視鏡筒,再慢慢用粗調焦輪上升物鏡,直到看見清晰

41、的物像為止。4高倍鏡使用:由于高倍鏡視野范圍更小,所以使用前應在低倍鏡下選好欲觀且物像不清晰時,可調節光亮度和細調焦輪,不得使用粗調。由于高倍鏡使用時與玻片之間距離很近,因此,操作時要特別小心,以防鏡頭碰擊玻片。5油鏡使用:在高倍鏡下將要觀察的部分移至視野中央,上升鏡筒約1.5cm,然后轉油鏡至工作位置。在蓋玻片要觀察的位置上滴一滴香柏油,慢慢下降鏡筒,使之與油滴接觸,然后慢慢調節細調焦輪上升鏡筒到物像清晰。若發現香柏油液滴與因物鏡分離,應重新下降鏡筒至與油滴接觸,然后細調。油鏡工作距離非常小(約為0.2mm,所以這步操作要特別小心,防止壓碎玻片。6調換玻片:觀察時如需調換玻片,要將高倍鏡換成

42、低倍鏡,取下原玻片,換上新玻片,重新從低倍鏡開始觀察。7使用后整理:觀察完畢后,上升鏡筒,取下玻片,將物鏡轉離通光孔呈非工作狀態,放上擦鏡布,按原樣收好顯微鏡。8使用注意事項: 顯微鏡是精密儀器,使用時一定嚴格遵守操作規則,不許隨意拆修。 隨時保持顯微鏡清潔。觀察臨時裝片時,一定要將蓋玻片四周溢出的水或其他液體用吸水紙吸干凈,以免污染鏡頭。已被污染的鏡頭要用鏡頭紙擦試。 觀察時,坐姿要端正,雙目同時張開,切勿睜一眼、閉一眼或用手遮擋一只眼。 觀察玻片時,一定要按先低倍、后高倍物鏡順序使用。細調焦輪是在觀察到物像而不夠清晰時使用,切忌沿同一方向不停地轉動細調焦輪。(三)細胞基本結構觀察1植物細胞

43、基本結構取洋蔥鱗葉表皮細胞永久制片或用新鮮洋蔥材料撕取表皮制臨時裝片觀察,可見表皮為一層細胞,其細胞多為近長方形,選擇形狀較規則、結構清晰的細胞移至高倍鏡下觀察,可分辨細胞壁、細胞質、細胞核結構。由于大液泡的形成,細胞核位于一側,高倍鏡下還可看見核仁。通過調節細調焦輪可使細胞的不同層次依次成像,加深對細胞立體結構的理解。加水合氯醛,加熱透化,再加稀甘油。鏡下觀察細胞變化。細胞壁較透明,細胞質無色均勻,細胞核扁球形,仔細觀察可見其內13個發亮的核仁。從一側滴加稀碘液,細胞質被染成淺黃色,細胞核被染成深黃色從一側滴加20%蔗糖液,放置20分鐘后觀察質壁分離現象。圖2洋蔥嶙葉表皮細胞的構造J期胞質2

44、,液泡3.細胞壁2.質體(1)葉綠體:取新鮮女貞葉,撥取葉肉組織制成臨時裝片觀察,其細胞為狹長形,內含多數橢圓形綠色顆粒,即為葉綠體。高倍鏡下可觀察到細胞內葉綠體接近細胞壁并在循一定方向環形流動,這是葉綠體隨細胞質環流的結果。(2)有色體:用銀子取少量新鮮紅辣椒靠近果皮的果肉細胞制成臨時裝片觀察,高倍鏡下可觀察到細胞呈近圓形,內含許多、細小、呈橘紅色的不規則顆粒,為有色體。另取番茄果肉細胞制成臨時裝片觀察桔紅色的顆粒,為有色體(3)白色體:再用銀子取少量新鮮蘿卜制成臨時裝片觀察,高倍鏡下細胞也呈近圓形,個別細胞內含許多白色顆粒,即為白色體。五、實驗報告1 .繪12個洋蔥鱗葉表皮細胞圖并引線注明

45、各部分名稱。2 .繪細胞中葉綠體、有色體形態圖,并引線注明。3、敘述典型植物細胞的亞顯微結構的組成及各部分主要功能?4、質體有哪幾種類型?它們的結構和功能之間有何關系?實驗三植物細胞減數分裂一、實驗目的學習花粉母細胞涂抹制片技術,觀察植物減數分裂各個時期染色體的變化特征。二、實驗原理減數分裂是生物在性母細胞成熟時配子形成過程中發生的一種特殊的有絲分裂。它包括連續兩次的細胞分裂階段:第一次分裂為染色體數目的減數分裂,第二次分裂為染色體數目的等數分裂。兩次分裂可根據染色體變化特點各分為前期、中期、后期和末期,由于第一次分裂的前期較長,染色體變化比較復雜,故其前期又可分為五個時期。在減數分裂的整個過

46、程中,同源染色體之間發生聯會、交換和分離,非同源染色體之間進行自由組合。最終分裂為染色體數目減半的四個子細胞,從而發育為雌性或雄性配子(n)。雌雄配子通過受精又結合成為合子,發育為新的個體,這樣又恢復了原有的染色體數目(2n)。由于不同雌雄配子染色體的重新組合,產生了大量的遺傳變異,有利于生物的適應和進化。生物的性母細胞成熟時,減數分裂各時期染色體變化的特征簡述如下(以小麥為例如圖示):第一次分裂:前期I:可分為以下五個時期:細線期:核內染色體呈細長線狀,互相纏繞,難以辨別成雙的染色體偶線期;同源染色體相互縱向靠攏配對,稱為聯會。這樣聯會的一對同源染色體,稱為二價體。偶線期所表現的這一特征時間

47、很短,一般較難觀察到。粗線期:配對后的染色體逐漸縮短變粗,含有兩條姐妹染色單體,這樣一個二價體中就包含了四條染色單體,故又稱為四合體。在此期間各同源染色體的非姐妹染色單體間可能發生片段交換。雙線期:各對同源染色體開始分開,由于在粗線期非姐妹染色單體之間發生了交換,因而同源染色體在一定區段間出現交叉結。此期可清楚地觀察到交叉現象。終變期:染色體更為濃縮粗短,交叉結向二價體的兩端移動,核仁和核膜開始消失,此時各二價體分散在核內,適于計數染色體的數目。中期I:核仁和核膜消失,所有二價體排列在赤道板兩側,細胞質里出現紡錘體,每個二價體的兩條染色體的著絲點分別趨向紡錘體的兩極,此時最適于計數染色體的數目

48、和觀察各染色體的形態特征。后期l二價體中的一對同源染色體開始分開,在紡錘體的作用下分別向兩極移動,完成染色體數目的減半過程。此期,同源染色體的兩個成員必然分離,非同源染色體間的各個成員以同等機會隨機結合,分別移向兩極。注意此時染色體的著絲點尚未分裂,每條分裂,在赤道板處形成細胞板,成為二分體。第二次分裂:前期II:染色體又開始明顯縮短,而其包含的兩條染色單體分得很開,只是著絲點仍然沒有分裂。中期Il染色體整齊地排列在分裂細胞的赤道板上,出現紡錘絲。后期幾染色體的著絲點分裂為二,兩條姐妹染色單體在紡錘絲的牽引下分別移向兩極。末期II:染色體分到兩極后,又重新出現核仁和核膜,同時細胞質分隔為二,從而使一個母細胞分裂成為四個子細胞,稱為四分體或四分孢子。每個子細胞內只含有原來母細胞的半數的染色體(n)。減數分裂中染包體的行為變化與生物的遺傳變異密切相關。既然染色體是遺傳物質的載體,因此染色體在減數分裂中的行為對遺傳物質的分配和重組產生了重大影響。高等植物的性母細胞(2n)在形成雌雄配子(n)過程中必須通過減數分裂。由于植物花藥取材容易,操作和鑒定比較方便。故一般都取用花粉母細胞作為制片材料,在光學顯微

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