1、大腸菌群計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)MPN計(jì)數(shù)法一、設(shè)備和材料250ML錐形瓶3個(gè) 100ML燒杯1個(gè)250ML量筒1個(gè) 1000ML燒杯1個(gè)15*150mm試管3個(gè) 1ML刻度吸管4個(gè) 18*180mm試管20個(gè) 杜氏小管玻璃棒1個(gè) 接種環(huán)1個(gè)剪刀1把 藥匙2個(gè)均質(zhì)器 天平（感量0.1g）電爐 洗耳球二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1、配制培養(yǎng)基：LST培養(yǎng)基的配制：用天平稱(chēng)取17.8gLST培養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸餾水加熱煮沸至完全溶解分裝于裝有杜氏小管的大試管中，每管10ML，共10管高溫滅菌備用BGLB培養(yǎng)基的配制：用天平稱(chēng)取20gBGLB培養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸餾水加熱煮沸至完全溶解分裝于裝有杜氏小管的大試

2、管中，每管10ML，高溫滅菌備用2、生理鹽水取4.25g氯化鈉于大燒杯中加入500ML蒸餾水溶解取225ML生理鹽水于錐形瓶中分別取9ML生理鹽水于3只小試管中將分裝好的生理鹽水進(jìn)行高溫滅菌3、滅菌：將均質(zhì)杯、100ML燒杯、刻度吸管、剪刀、接種環(huán)、洗耳球高溫滅菌備用三、取樣在提交的產(chǎn)品中隨機(jī)抽取三箱，從每箱中隨機(jī)抽取未打開(kāi)包裝的產(chǎn)品1袋3袋，抽取不低于250g的樣品作為微生物指標(biāo)檢驗(yàn)試樣。四、檢驗(yàn)程序檢 樣 25 g(mL)樣品+225 mL 稀釋液，均質(zhì) 10倍系列稀釋 選擇3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，接種LST肉湯管 36±1 48h±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣BGLB肉湯 36&

3、#177;1 48h±2h產(chǎn) 氣不產(chǎn)氣 大腸菌群陽(yáng)性大腸菌群陰性 查MPN表報(bào)告結(jié)果五、操作步驟初發(fā)酵試驗(yàn)1、稱(chēng)取25g 樣品，放人盛有225m生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8 00or/min-10 000r/min 均質(zhì)1 min-2 min ，制成1:10 的樣品勻液。2、用1ml無(wú)菌吸管吸取1:10 樣品勻液1ml，沿管壁緩緩注人9ml生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管，使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。3、換一只新的1ml無(wú)菌吸管吸取1:100樣品勻液1ml，沿管壁緩緩注人9ml生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），

4、振搖試管，使其混合均勻，制成1:1000 的樣品勻液。4、將三個(gè)連續(xù)稀釋梯度的樣品原液在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 ml樣品勻液于LST肉湯，每個(gè)稀釋度接種三管。5、同時(shí)做一組空白，在一支LST肉湯中接種1ml生理鹽水。6、 36±1 培養(yǎng)24h±2h ，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h 。記錄在24h 和48h 內(nèi)產(chǎn)氣的LST 肉湯管數(shù)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性，產(chǎn)氣者則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)從所有48h±2h 內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的LST 肉湯管中分別取培養(yǎng)物l環(huán)，移種于( BGLB）肉湯管中，36±1 培養(yǎng)48

5、h±2h ，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。大腸菌群最可能數(shù)（MPN ）的報(bào)告 根據(jù)大腸菌群陽(yáng)性管數(shù)，檢索MPN 表，報(bào)告每克（或毫升）樣品中大腸菌群的MPN 值。大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限0.10.010.001上限下限0.10.010.001上限下限000<3.09.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.694100

6、3.60.1718301388.71101017.21.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201143.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333>1100420注1：本表采用3個(gè)稀釋度【0.1g(mL)、0.01g(mL)和0.001g(mL)，每個(gè)稀釋度接種3管。注2：表內(nèi)所列檢樣量