1、解毒通絡調肝散對胰島素抵抗大鼠肝臟NF kB及MCP 1表達的影響(一)【摘要】目的觀察解毒通絡調肝散對糖尿病(DM)胰島素抵抗(IR)模型大鼠肝臟中核因子(NF) kB及單核細胞趨化蛋白(MCP) 1表達的影響。方法采用高脂飲食加鏈脲佐菌素(STZ)誘導 DMIR 大鼠模型。將造模成功的大鼠隨機分為模型組、二甲雙胍組、吡咯列酮組和解毒 通絡調肝組。給藥 8w 后進行各指標檢測。結果解毒通絡調肝散能升高 DMIR 大鼠胰島素敏 感性指數，降低大鼠肝臟中NF kB蛋白、MCP 1蛋白表達。結論解毒通絡調肝散對大鼠IR有顯著改善作用，其機制可能與其減少 DM大鼠肝組織中NF kB MCP 1表達，

2、發揮抑 制肝內炎癥的作用。【關鍵詞】胰島素抵抗(IR)；解毒通絡調肝散 核因子(NF) k B單核細胞趨化蛋白(MCP) 1【Abstract 】ObjectiveToinvestigatetheeffectofJieDuTongLuoTiaoGanSan(JDTLTGS)onnuclearfactor(NF) k Ban dmonocytechemoattractantprotein(MCP)1ofliverininsulinresistant(IR)rats.MethodsIRmodelratsinducedbyhighfatandglucosefoodandSTZwererandomly

3、dividedintomodel ， metformin ， pioglitazone，andJDTLTGSgroups.After8weeks，thevariousindexeswereobserved.ResultsInsulinsensitivityindexwassignificantlyelevated，besidesNF k BandMCP 1ofliverwerereducedintheJDTLTGSgroup.ConclusionsJDTLTGScouldatte nuateIRinrats，itspharmaceuticalmechanismsmightbecloselyre

4、latedwiththeoverexpressionofNF kB，MCP 1inDMmodelgroupliver ， andinhibitingtheinflammatorypathogenesisinliver.【 Keywords 】 Insulinresistance;JieDuTongLuoTiaoGanSan;Nuclearfactor(NF) k B;Monocytechemoattractantpro tein(MCP) 1 胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)的重要發病機制之一，但其具體的病理根底較為復雜， 國內已有中醫藥防治IR的臨床及試驗報道。前期工作說明1，解毒

5、通絡調肝散能改善實驗動物IR,為進一步探討其改善IR的作用機制，本實驗觀察了解毒通絡調肝散對實驗性DM大鼠肝組織核因子 k B(NF k B、) 單核細胞趨化蛋白1(MCP 1)及 MCP 1mRNA 表達的影響，探討肝組織 NF kB與MCP 1途徑與T2DM、IR之間的關系。1 材料與方法1.1實驗動物及分組清潔級8周齡雄性 Wistar大鼠60只(體重150170g)，購于吉林大學基礎醫學院，根底飼料(熱量15J/g)由吉林大學實驗動物中心提供，高脂飼料由吉林大學實驗動物中心新鮮配制：根底飼料63%, 15%牛油，20%蔗糖，2%膽固醇，提供熱量約20J/g，其中脂肪提供熱量占總熱量30

6、%。 60 只大鼠按體重隨機分為正常對照組 8 只和 DM 模型組 52只。正常對照組給予根底飼料， 模型組給予高熱量飼料。 4w 后，模型組腹腔注射 (ip)1.2%STZ 溶液 30mg/kg ，于注射 STZ1w 后測定糖耐量。按照國際通用大鼠 DM 診斷標準：血糖峰 值16.8mmol/L和120min血糖11.1mmol/L為DM，具備上述一條為糖耐量減低(IGT)2。取DM或IGT模型組動物為實驗對象。將造模成功大鼠48只按血糖峰值分層，隨機分為模型組(n=12)，中藥組(n=12),二甲雙胍組(n=12)，吡格列酮組(n=12)。3個治療組分別每日定 時灌服解毒通絡調肝散懸混液5

7、g kg-1 d-1、二甲雙胍水溶液 0.5g kg-1 d-1、吡格列酮懸混液5mgkg-1d-1，動物自由進食飲水，正常對照組喂普通飼料，其他組喂高熱量飼料。治療周 期為8w。治療結束時，納入統計數據的動物數為：正常對照組8只，模型組8只，二甲雙胍組 9只，吡格列酮組 10只，中藥組 10只。1.2 藥物及試劑解毒通絡調肝散由長春中醫藥大學附屬醫院中醫研究所提供;鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊 (君力達 )：北京圣永制藥;鹽酸吡格列酮片 (瑞彤 )：江蘇恒瑞醫藥股份有限公司。鏈脲佐菌素 (STZ：) 美國 Sigma 公司 ;末端全血葡萄糖測試條：北京怡成生物電子技術。胰島素放免試劑盒購自北京東亞生

8、物技術。兔抗大鼠NF kB MCP 1多克隆抗體購自武漢博士德公司。1.3 檢測指標及方法生化指標的檢測血糖：怡成血糖儀檢測；血清胰島素：磁酶免分析儀1(美國Bio Rad)檢測;胰島素敏感指數(ISI): Ln(1/空腹血糖 空腹胰島素)。SP法檢測。一抗分別為1 : 100)；二抗均為山羊抗SP 試劑盒。嚴格按試劑肝組織 NF k Bp65 MCP 1 蛋白表達測定采用免疫組織化學 兔抗大鼠NF k Bp65工作濃度1 : 100), MCP 1多抗(工作濃度:兔IgG,生物素標記來自抗兔的辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素 盒說明書進行。1.3.3 免疫組化染色半定量評分所有切片均由有經驗的

9、病理科醫師盲法閱片作出診斷,每張切片觀察5個X 400視野。結果評定標準：著色程度：不著色者為0分，著色淡者為1分，中等著色為 2 分,著色深者為 3 分。著色細胞陽性范圍：無著色 0 分,著色陽性細胞小于 1/3為1分，著色陽性細胞1/31/2為2分，著色陽性細胞大于 1/2為3分。將每張切片著 色程度與著色細胞陽性范圍得分各自相加為其最后計分。肝組織MCP 1mRNA表達測定按Trizol試劑說明書。根據文獻3合成MCP 1寡核 苷酸(PCR引物。MCP 1 引物序列：上游 5/ CACCTGCTGCTACTCATTCAC3T ;下游 5/GTTCTCTGTCATACTGGTCACTT3C

10、 。 GAPDH 引 物 序 列 ： 上 游 5 ACCACAGTCCATGCCATCAC7 ;下游 5/ TCCACCACCCTGTTGCTGTA/ 弓 I物由北京鼎國 生物技術開展公司合成。擴增條件為：94 C預變性 2min后進入如下循環：94 °C 45s,55C 45s, 72 C 45s,循環數為30個，最后于72 C延伸10min。擴增的MCP 1長度為 349bp, GAPDH長度為450bp。擴增產物用凝膠成像分析系統進行紫外光成像分析，以GAPDH密度作為參考定量標準，數值以兩者之吸光度(Int)面積(Pix)比值表示，以對照組的比值作為標準 1.0,計算 MCP 1 基因相對表達量。1.4統計學處理數據以 x 土表示，采用SPSS13.0軟件進行方差分析。2 結果2.1 各組大鼠空腹血糖、空腹胰島素、 ISI 比擬大鼠飼養 4w 時,造模組大鼠平均空腹血糖顯 著高于正常組(P0.01)，但未到達DM診斷標準。注射 STZ后大鼠空腹血糖、1及2h血糖水 平那么明顯升高。12w末，治療組大鼠血糖較模型組明顯降低(P0.05, P0.01)，中藥組與