1、抗菌的效力測試抗菌防腐劑是實際被添加到有菌的劑量配方里的物質(zhì)，使他們不受微生物滋長或是被無意中引進到生產(chǎn)過程中的微生物侵害。在無菌包裝多劑量配方的容器里，抗菌防腐劑被添加用來抑制由重復(fù)添加單劑量所引進的微生物的滋長?？咕栏瘎┎粦?yīng)被作為在良好生產(chǎn)操作中的替代方式使用，或僅是用來減少一個有菌產(chǎn)品的微生物群數(shù)量，或是在生產(chǎn)時控制多劑量的微生物量。在劑量表里抗菌防腐劑與添加的要求必需符合規(guī)定。所有有用的抗菌藥劑都是有毒物質(zhì)。為了最大的保護使用者，防腐劑的含量應(yīng)被有效地顯示在產(chǎn)品的最終包裝上，并應(yīng)會處在一個可能對人體有毒的水平線下。添加的抗菌防腐劑含量能夠被保持在一個最小的濃度，如果配方的活性成分具有

2、一個固定的抗菌力?？咕男Я?，不管是產(chǎn)品里固有的或者是生產(chǎn)中添加的抗菌防腐劑，都必須在所有注入包裝的多劑量容器里或其它包含抗菌防腐劑的產(chǎn)品上顯示?？咕栏瘎┍仨毐伙@示在多劑量和口頭劑量型和給其它劑量型，如眼藥，耳藥，鼻藥，沖洗的和透析液。(看 Pharmaceutical Dosage Forms(a1151).本章提供的測試用來顯示抗菌保護的效力。添加的抗菌防腐劑必須顯示在標簽上。測試的效力和標準適用于一個產(chǎn)品在原有的、未打開過的經(jīng)由制造商銷售的容器里。產(chǎn)品分類 為了測試的目的，配制產(chǎn)品分開為四個分類（看表1）?？咕ЯΦ臉藴蕦τ谶@些產(chǎn)品是一個管理的作用。Table 1.Compendial

3、 Product Categories 表1: 配制藥品分類Category類 別Product Description產(chǎn) 品 概 述1針劑，其它非腸胃藥劑，包括乳劑、無菌耳用劑、鼻用劑和眼用劑含水的或其它介質(zhì)的。2局部使用產(chǎn)品，含水的或其它介質(zhì)，如未滅菌耳用劑產(chǎn)品、軟膏，包括那些涂在黏膜上的。3口服產(chǎn)品，除了以水為基底或其它的介質(zhì)的解酸劑。4含水解酸劑。測試生物體使用以下微生物的培養(yǎng)基：白念珠菌（ATCC NO.10231）,黑曲霉菌（ATCC NO.16404）,大腸桿菌（ATCC NO.8739）,綠膿桿菌(ATCC no.9027),和金黃色葡萄球菌( ATCC NO.6538). 在

4、測試中使用活的微生物從原始的培養(yǎng)基移轉(zhuǎn)次數(shù)不得超過五次。為了測試的目的，移轉(zhuǎn)的定義是從一個已確定的培養(yǎng)基移到一個新鮮的媒介里。所有的移轉(zhuǎn)均應(yīng)被計算在內(nèi)的。一旦有機體被以種子庫(seed-lot) 技術(shù)保存下來時，每個在新鮮媒介里冰凍的，融化的和再生的循環(huán)周期被認為是一次轉(zhuǎn)移。種子存儲技術(shù)將會被使用到培養(yǎng)的長期存儲中。從ATCC得到的培養(yǎng)基將會依照操作方向蘇醒。如果在液體培養(yǎng)基里生長，細胞會通過離心法的方式被聚集成塊。懸浮在1/20容量的新鮮的液體培養(yǎng)基里，并添加一個同等容量的20%（V/V水里）的無菌的甘油。從表面到10%的甘油液體培養(yǎng)基里可能得到在瓊膠培養(yǎng)基上的細胞生長。分配小部分的懸浮液到

5、無菌的小瓶里。把小瓶子放在液化氮里或一個不超過-50攝氏度的機械冷藏室里。當要求一個新鮮的種子存儲瓶時，它可能被移除和使用來給一系列的有效的培養(yǎng)菌做接種。這些有效的培養(yǎng)基到時可以被定期地（每天，當測試細菌和酵母時）使用來啟動接種培養(yǎng)基。媒介測試中所有媒介的使用，必須做促生長測試。在有機體測試下使用上面指定的測試微生物。接種體的準備準備測試，由最近再生的培養(yǎng)基的表面適當?shù)慕臃N特定的微生物。接種培養(yǎng)基的描述請參考表2，表2里的適合的培養(yǎng)基是黃豆-消化酪蛋白(soybean casein digest)或沙保羅氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。（ 參看Microbial Enumeration Tests (61

6、)和Absence of Specified Microorganism 62）為了獲得細菌和白色念珠菌(C.albicans)培養(yǎng)基，使用干凈的鹽水溶液(Saline TS ，注: 9克氯化鈉溶于1000 mL.的水)，清洗表面的生成物，把它收集在一個合適的容器里，并添加足夠的鹽水溶液以獲得一個每毫升大約1×108 cfu的微生物計數(shù)。為了獲得黑曲霉菌(A. niger)細胞，使用干凈的鹽水溶液含0.05%的聚山梨醇酯80(polysorbate 80)，并添加足夠的鹽水溶液來獲得一個大約1×108cfu每毫升的計數(shù)?；蛘?，一個合適的液體的培養(yǎng)液（如，黃豆-消化酪蛋白液s

7、oybean casein digest broth 或沙氏瓊脂培養(yǎng)液sabouraud dextrose broth）可能生長出培養(yǎng)菌微生物并通過離心法得到細胞，然后以無菌的鹽水溶液清洗和重新懸浮以獲得一個大約1×108cfu 每毫升的微生物計數(shù)。（注意 預(yù)計的接種濃度可能通過濁度計測量來挑戰(zhàn)微生物。如果懸浮液沒有在兩個小時內(nèi)被使用，請冷凍它）測出每個懸浮液的每毫升的菌落數(shù)量，使用在TABLE2里的媒介和微生物的恢復(fù)培養(yǎng)期的情況來確認估計每毫升的原始cfu。這個值可以用在測試中做接種尺寸的比對。細菌和酵母菌的懸浮液在24小時收獲期里應(yīng)被使用，但真菌的準備可在冷凍情況下儲存7天。程序

8、測試可以在五個干凈的容器里操作，如果在每個容器里有足夠容量的產(chǎn)品且產(chǎn)品容器能被無菌地裝入（ 如，使用針和注射器穿過一個人造的橡膠瓶塞），或者在五個無菌的，加蓋的、尺寸合適的，能移轉(zhuǎn)產(chǎn)品的充足容量的細菌容器里。給每一個準備好的標準的接種體的容器做接種注射，并混合。接種懸浮液的使用量在產(chǎn)品量的0.5%到1.0%之間。被添加到產(chǎn)品的測試細菌濃度（類型）到最終的測試準備濃度在接種之后是每毫升1×105and 1×106cfu 之間。對于類型4產(chǎn)品（解酸劑）測試準備的最終濃度在接種后是每毫升產(chǎn)品1×103到 1×104cfu之間。在每次測試準備的活的微生物的原始濃

9、度是預(yù)計是基于每個標準接種體的微生物濃度，通過皿測法來預(yù)計的。在22.5±2.5的溫度下將容器接種。如表3，在適當?shù)臅r間間隔里把每個容器做樣品標示。記錄下在每個間隔時間里出現(xiàn)的任何變化（參看Microbial Limit Tests (61)下的程序）。以平皿計數(shù)方式(plate count)在適當?shù)臅r間間隔里計算出現(xiàn)的cfu數(shù)。使用特定的抗菌劑做為鈍化劑（中和劑）或是適當?shù)南♂屃縼碜銎矫笥嫈?shù)。在表2中規(guī)定出培養(yǎng)基與不同菌種的各種接種狀況與驗收時間。在開始測試時使用每毫升多少CFU來計算濃度，在適當?shù)拈g隔測試對每個微生物計算每毫升CFU濃度的log10 值的變化，并表述以log為單位

10、的減少變化量。Table 2.Culture Conditions for Inoculum Preparation 接種體準備的培養(yǎng)基Organism微生物Suitable Medium 適合的培養(yǎng)基IncubationTemperature接種溫度Inoculum Incubation Time接種時間Microbial Recovery Incubation Time驗收時間Escherichia coli 大腸桿菌(ATCC No.8739)SoybeanCasein Digest Broth;黃豆-消化酪蛋白液SoybeanCasein Digest Agar黃豆-消化酪蛋白基32.

11、5±2.518 to 24hours18至24小時3 to 5days3至5天Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌(ATCC No.9027)SoybeanCasein Digest Broth;黃豆-消化酪蛋白液SoybeanCasein Digest Agar黃豆-消化酪蛋白基32.5±2.518 to 24hours18至24小時3 to 5days3至5天Staphylococcus aureus金黃色葡萄球菌 (ATCC No.6538)SoybeanCasein Digest Broth;黃豆-消化酪蛋白液SoybeanCasein Diges

12、t Agar黃豆-消化酪蛋白基32.5±2.518 to 24hours18至24小時3 to 5days3至5天Candida albicans 白念珠菌(ATCC No.10231)Sabouraud Dextrose Agar;沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabouraud Dextrose Broth沙氏瓊脂培養(yǎng)液22.5±2.544 to 52hours44到52小時3 to 5days3至5天Aspergillus niger 黑曲霉菌(ATCC No.16404)Sabouraud Dextrose Agar;沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabouraud Dextrose Broth沙

13、氏瓊脂培養(yǎng)液22.5±2.56 to 10days6至10天3 to 7days3至7天抗菌效力標準抗菌效力的要求如Table 3下規(guī)定的標準（參看significant figures and tolerances under general notices）。增加值不高于現(xiàn)行測量值的0.5 log10 單位的可視為沒有增加。測試微生物的標準For Category 1 Products 對第一類產(chǎn)品Bacteria: 細菌7天里的原始計數(shù)量不少于1.0 log 的減少量，在14天里原始計數(shù)量不少于3.0 log的減少量，在14天-28天里計數(shù)量不增加。Yeast and Mold

14、s:酵母和霉菌原始計數(shù)量在7天，14天，28天里沒有增加。For Category 2 Products 對第二類產(chǎn)品Bacteria:細菌Not less than 2.0log reduction from the initial count at 14days,and no increase from the 14days'count at 28days.Yeast and Molds:酵母和霉菌No increase from the initial calculated count at 14and 28days.For Category 3 Products 對第三類產(chǎn)品Bacteria:細菌Not less than 1.0log reduction from the initial count at 14days,and no increase from the 14days'count at 28days.