1、精密度評估指導原則1 概述精密度是考察體外診斷試劑對同一樣本重復測定時能否得到相同實驗結果的能力的指標。精密度評價是質量控制的重要內容。同時，精密度評估資料也是是評價擬上市產品有效性的重要依據，是產品注冊所需的重要申報資料之一。本指導原則基于國家食品藥品監督管理局體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）的有關要求、參考體外診斷試劑分析性能評估系列指導原則（征求意見稿）、EP05A2-定量檢測方法的精密度評估和臨床檢驗質量管理技術基礎，并依據我公司具體情況，對定量檢測方法中精密度的評估和數據處理方法進行了要求。其目的是為我公司研發人員和相關技術人員進行定量檢測方法中精密度的評估提供原則性指導。同時也為用

2、戶驗證某種方法和設備的精密度提供實驗方案指導。這個過程對于某些無法獲得足夠的檢測材料的方法可能并不適用。2 基本概念精密度是指在規定的測試條件下，同一個均勻供試品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度，即在規定條件下，獨立測試結果表現的一致程度。一般用標準偏差(Standard Deviation，SD)或變異系數（Coefficient of Variation，CV）表示。給定檢測程序的“精密度”可以根據特定的精密度條件進行分類。“重復性”的檢測條件基本不變，常被稱為“批內精密度”。“重現性”與條件改變有關，如：不同的時間、實驗室、操作者和檢測系統（不同校準品和試劑批號）下的精密度。2.1

3、 批內精密度指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同批號試劑，在一個批次實驗中對同一測試樣品（常用校準品）重復測定10次或以上測量結果的精密度。表現為“重復性”，也被稱為“序列內精密度”和“分析內精密度”2.2 批間精密度指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同一批號試劑，在一段時間內（一般不超過一天）對同一測試樣品（常用校準品）分別做10個或以上試驗批次的測量結果的精密度。也被稱為“分析間精密度”2.3 天間精密度指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同一批號試劑，對同一測試樣品（常用校準品）每天做1次測量，累積測10天

4、或以上測量結果的精密度。其表現為“重現性”，與時間條件改變有關，2.4 不同批號試劑盒間精密度指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和10批或以上批號試劑，在一個批次實驗中對同一測試樣品（常用校準品）分別測量1次測量結果的精密度。2.5 總精密度將穩定的常用校準品每天做2次實驗，間隔時間不少于2小時，每次對樣品做雙份檢測，共做20個工作日實驗。將運行內、運行間和天間的精密度以方差形式相加，可得到樣品均值下具有的總標準差，由它可客觀地反映真正的總精密度。3 精密度評估的基本原則3.1 操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項注意事項，能在評估階段

5、維持儀器的可靠和穩定。3.2 用于評估試驗的樣品一般常采用臨床實驗室收集的穩定和冷凍貯存的血清(漿)庫；當實驗室收集的樣品不穩定或不易得到時，也可考慮使用穩定的、以蛋白質為基質的商品物質，如校準品或質控品。3.3 評估精密度時，應至少評估二個濃度水平樣本的精密度。當二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。所選樣本濃度應在測量范圍內有醫學意義，即至少有一個濃度在醫學決定水平(medical decision levels)左右。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。相當多的檢驗項目低值常無實際臨床意義，

6、但有少數檢驗項目，其低值也有臨床價值，此時就需要評估有判斷價值的低值精密度，適用時，可進行功能靈敏度的評估。如沒有醫學決定水平，可在參考區間上限左右選一個濃度。此外，再根據檢驗項目的性質在線性區間內選擇另一個值。如與廠商或文獻報導的精密度進行比較，所選濃度應與被比較精密度的濃度相接近。否則，有可能得出不恰當的結論。4 精密度評估的方法和數據處理4.1 批內精密度的評估4.1.1 評估方法：使用同一批號的試劑和校準物,每次使用六點定標。在一個工作日三次實驗中對樣本進行重復測定，每次進行10次重復測定，進行三次實驗，以兩次或以上結果無顯著差異，做進一步分析，求三次實驗CV均值。4.1.2 質量控制

7、：檢測時應同時至少測一個質控品。當質控品結果超出規定的失控限，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗，要保存所有的質控數據和失控處理記錄。 4.1.3數據收集：在進行數據分析前，檢查數據中是否有由于偶然差錯引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標準；以已收集的10個或以上數據計算出總均值和標準差，任何結果和總均值的差值超過4個標準差時，可認為本次實驗結果可疑，并進行至少2次重復實驗。以兩次或以上結果一致的數據作為有效數據。在進行這種批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當離群值超過1個時，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致。此時，應不用此次試驗數據。檢查問題和解

8、決問題后重新開始新的評估實驗。4.1.4數據的記錄：將所收集到的數據記錄在表1：表1 批內精密度實驗原始數據記錄序號第一次第二次第三次質控品1質控品2質控品1質控品2質控品1質控品212.910均值4.1.5 單次分析內精密度估計值的計算求出均值：計算標準差計算變異系數 n為一次實驗的重復測定次數，這里n=104.2 評估分析間精密度4.2.1評估方法：使用同一批號的試劑和校準物,每次使用六點定標。在一個工作日內分別做10個實驗批次的測量，每次測量重復三次。4.2.2 質量控制：檢測時應同時至少測一個質控品。當質控品結果超出規定的失控限，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗，要保存所

9、有的質控數據和失控處理記錄。 4.2.3 數據收集：在進行數據分析前，檢查數據中是否有由于偶然差錯引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標準；從已收集的10個或以上數據計算出總均值和標準差，任何結果和總均值的差值超過4個標準差時，可認為本次實驗結果可疑，并進行至少2次重復實驗。以兩次或以上結果一致的數據作為有效數據。在進行這種批間精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當離群值超過1個時，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致。此時，應不用此次試驗數據。檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。4.2.4數據的記錄：將所收集到的數據記錄在表2：表2分析間精密度實驗原始數據記錄實驗

10、批次質控品1質控品2結果1結果2結果3結果1結果2結果312.910均值4.2.5批次間精密度估計值的計算求出總體均值：，一次實驗的均值計算標準差計算變異系數n為實驗進行的批次，k為每次實驗的重復次數，這里n=10，k=3。4.3 評估天間精密度4.3.1 評估方法：使用同一批號的試劑和校準物,每次使用六點定標。在一個工作日早、中、晚各進行一次實驗，每次實驗中對樣本各測定1次，累計10個工作日結果還是每天進行一次實驗，每次實驗對樣本重復測定3次，累計10天？。以兩次或以上結果無顯著差異，做進一步分析，求三次實驗CV均值。4.3.2 質量控制：檢驗時應同時每批至少測一個質控品。當質控品結果超出規

11、定的失控限，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗，要保存所有的質控數據和失控處理記錄。4.3.3 數據收集：在進行數據分析前，檢查數據中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標準；從已收集的10個或以上數據計算出總均值和標準差，任何結果和總均值的差值超過4個標準差時，可認為本次實驗結果可疑，并進行至少2次重復實驗。以兩次或以上結果一致的數據作為有效數據。在進行天間精密度評估實驗時，一次一批次只能有一個離群值，當離群值超過1個時，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致。此時，應不用此次試驗數據。檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。4.3.4 數據的記

12、錄：將所收集到的數據記錄在表3：表3 批間精密度實驗原始數據記錄日期第一次實驗第二次實驗第三次實驗質控品1質控品2質控品1質控品2質控品1質控品212.910均值4.3.5天間精密度估計值的計算求出均值：計算標準差計算變異系數 n為累計實驗的天數，這里n=10，4.4 評估不同批號試劑盒間精密度4.4.1 評估方法：使用同一種類、10個批號試劑，一種校準物,每次使用六點定標。在一個工作日一次實驗中用不同批號試劑對樣本進行10次測定，進行三次實驗，以兩次或以上結果無顯著差異，做進一步分析，求三次實驗CV均值。4.4.2 質量控制：檢驗時應同時每批至少測一個質控品。當質控品結果超出規定的失控限，不

13、論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗，要保存所有的質控數據和失控處理記錄。 4.4.3數據收集：在進行數據分析前，檢查數據中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標準；從已收集的10個或以上數據計算出總均值和標準差，任何結果和總均值的差值超過4個標準差時，可認為本次實驗結果可疑，并進行至少2次重復實驗。以兩次或以上結果一致的數據作為有效數據。在進行不同批號試劑盒間精密度評估實驗時，一次一批次只能有一個離群值，當離群值超過1個時，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致。此時，應不用此次試驗數據。檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。4.4.4數據的記錄：

14、將所收集到的數據記錄在表4表4不同批號試劑間精密度實驗原始數據記錄批號第一次實驗第二次實驗第三次實驗質控品1質控品2質控品1質控品2質控品1質控品212.910均值4.4.5不同批號試劑盒間精密度估計值的計算求出均值：計算標準差計算變異系數4.5 評估總精密度4.5.1 評估方法：每天做2個批次的測試，每批測試時，對同一樣品作雙份測量，共做20天。評估結束時共有40對，即80個測試結果。從40批次測量中雙份結果的差值求出運行內精密度。從所有80個數據計算出批間精密度。將穩定的常用質控品每天做2次實驗，間隔時間不少于2小時，每次對樣品做雙份檢測，共做20個工作日實驗。將運行內、天間、運行間的精密

15、度以方差形式相加，可得到樣品均值下具有的總標準差，由它可客觀地反映真正的總精密度。在實施此項評估工作時，必須由同一個或一組操作者在同一臺儀器上進行，應該使用相同的校準品、相同種類和批號的試劑。所用時間不得少于20個工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出該臨床實驗室定量測量方法在一段時間內的理想或最適的穩定性。 在每一批次測量中，必須同時測量質控品，以保證結果是可靠的，數據能夠采用。4.5.2數據的收集要收集到足夠有效數據(至少為80個數據)。除補充由于質控失控而增加的測試外，應在進行數據分析前，檢查數據中有無由于偶然差錯引起的離群值(outlier)，可用下述剔除值的標準；從實施段已收集的4

16、0對均值的數據計算出總均值和標準差，出現下列任何一種情況都可認為是離群值：（1）任何一對均值和總均值的差超過4倍標準差（2）任何一對中二個結果的絕對差值超過4倍標準差離群值不用于精密度的計算。在剔除后應再增加檢驗次數，以保證至少有40批次，80個數據進行計算。注：任何一次實驗的剔除值不能超過總測量數的2.5%。當超過時，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致。此時應不用此次試驗數據，重新開始新的試驗。4.5.3數據的記錄：將所收集到的數據記錄在表5。表5 精密度實驗原始數據記錄序號日期第一次實驗第二次實驗結果1結果2均值結果1結果2均值1219204.5.4運行內精密度（repeatbility estimimation）的標準差評估按表5要求對數據進行進一步計算，將結果填入表6表6精密度實驗原始數據計算日第一次實驗第二次實驗（結果1-結果2）2（結果1-結果2）2121920合計(3)(4)利用表6中的結果依據下列公式計算批內標準差sr：I = 檢測運行的總天數（通常為20）j = 每天檢測運行的次數（1或2）xij1 = 第i天，第j次檢測，第1個測定的結果xij2 = 第i天，第j次檢測，第2個測定的結果4.5.5運行間和天間標準差的計算，將上述實驗結果記錄在表7中。表7：次間和天間精密度實驗原始數據記錄第一次第二次