1、2009 年第 3 期9 月出版摘要運用磷酸、甲醇溶液作為流動相，采用高效液相色譜法測定了葡萄酒中檸檬酸含量，實驗結果表明，該方法有很好的線性關系，相關系數為 0.9998，最低檢出濃度為 0.03mg/L，加標回收率在 93.8 106.2，相對標準偏差 RSD<3%，該方法簡便快捷、準確度高、重現性好。關鍵詞檸檬酸；高效液相色譜；葡萄酒Abstract A reversed-phase high performance liquid chromatographic method wasintroduced for determining the content of citric a

2、cids in wine with phosphate andmethanol solution as mobile phase.The result shows that this method takes on good linearrelation ，its correlative connection is 0.9998， the lowest detection concentration is0.03mg/L， the average recoveries ranged from 93.8%to 106.2%with the relativestandard deviation i

3、s less than 3%.This method is simpleness, speediness and highveracity and good fidelity. keywordscitric acid ； high performance liquid chro-matography ；wine檸檬酸作為一種食品添加劑廣泛應用于食品加工領域，但其使用范圍是受到嚴格限制的，在葡萄酒標準中有限量要求，即干、半干、半甜葡萄酒中要求檸檬酸含量 1.0g/L，甜葡萄酒中要求檸檬酸含量 2.0g/L。檸檬酸的測定方法有電位滴定法、離子色譜法、阻抑動力學熒光法和高效毛細管電泳法等。本文采用高

4、效液相色譜反相 C 18 柱，磷酸二氫鉀溶液作流動相，測定葡萄酒中的檸檬酸，并對測試條件進行了研究，建立了一種簡便、準確的分析方法。1 材料與方法1.1 儀器LC-10ATvp 高效液相色譜儀（日本島津）；SPD-10Avp 紫外檢測器（日本島津）； KQ5200DE 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；PHS-3C 型數字酸度計（雷磁儀器廠）；AP-9925 型真空泵（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）； AB104-S 型分析天平梅特勒 -托利多儀器（上海）有限公司。1.2 試劑無水檸檬酸、磷酸、氫氧化鈉、甲醇（色譜純）、磷酸二氫鉀、實驗用水為超純水。除另有規定外，試劑均為分析純。 1

5、.3 溶液的配制流動相的配制體積濃度1%磷酸溶液的配制：準確量取磷酸10mL ，用超純水定容至1000mL 。張素娟 *（國家農副加工產品及白酒質量監督檢驗中心，山西省食品質量監督檢驗中心，太原 030012）高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量Determination of citric acids content in wine byhigh performance liquid chromatography* 張素娟，女 1975 年出生， 2003年畢業于吉林大學分析化學專業，碩士，工程師。收稿日期： 2009-07-20ZHANG Su-juan *(NationalFarm Pr

6、oducts and Liquor Quality Supervision and Inspection Center, Shanxi Province Foodstuff Quality Supervision andInspection Center，Taiyuan 030012， China 食·品分析 ·食品工程FOOD ENGINEERING482009 年第 3 期 9 月出版樣品本底值g/LRSD 1.000g/L 檸檬酸加入量 mL 測得值 g/L 回收率 10.9681.551.374101.5磷酸甲醇溶液的配制：量取甲醇50mL ，用體積濃度 1%磷酸溶

7、液定容至1000mL ，混勻，再經 0.45 m濾膜過濾、超聲波脫氣后備用。0.02mol/L 磷酸二氫鉀溶液（ pH2.9）：準確稱量 2.72g 磷酸二氫鉀，用超純水定容至 1000mL ，用磷酸調 pH 值到 2.9，再經 0.45 m濾膜過濾、超聲波脫氣后備用。標準溶液的配制檸檬酸儲備液：稱取無水檸檬酸 0.10g ，精確至 0.0001g ，用 0.01mol/L 氧化鈉溶液溶解并定容至 100mL ，此溶液含檸檬酸 1.000g/L。1.4 試樣的制備吸取 10.00mL 樣品（液溫 20）于 100mL 容量瓶中，加超純水定容，經0.45 m微孔濾膜過濾后，備用。1.5 色譜條件

8、色譜分離柱：反相C 18（ 150mm×4.6mm i.d ， 5 m）；流動相：磷酸甲醇溶液；柱溫： 25；流速： 1.0mL/min ；檢測波長： 214nm ；進樣量： 10L。2 結果與討論2.1 標準曲線的繪制將 0.01mol/L 檸檬酸儲備液配制成一系列濃度為0.05mol/L ，0.10mol/L ，0.20mol/L ，0.40mol/L ，0.80g/L 的標準系列溶液。樣品測定液和標準溶液經0.45 m水系濾膜過濾，分別進樣，估算出樣品溶液的濃度范圍；根據檢測到的樣品濃度作適當的稀釋，使其濃度在標準曲線的范圍內；從標準曲線中求出樣品的檸檬酸含量。 2.2 流動相

9、的選擇檸檬酸為弱酸，在水系流動相中易解離，需在流動相中加入一些添加劑，以改善其在非極性固定相上的分離選擇性、色譜峰的峰形和色譜峰的重復性。故本實驗選用磷酸甲醇溶液和0.02mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（ pH=2.9）作流動相，測定同一標準溶液和樣品溶液進行比較，兩種流動相具有很好的分離效果，并能避免樣品中的雜質干擾。但0.02mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（ pH=2.9）作為流動相不僅配制時操作繁瑣、 pH 稍有變化對數據的影響也很大，而且容易滋生細菌，必須每天現用現配，否則造成賭塞色譜柱，縮短柱子的壽命。而磷酸甲醇溶液作為流動相由于有甲醇的存在可抑制細菌的繁殖，能用一定的時間。因此本實驗最

10、終選用磷酸甲醇溶液作為流動相。2.3 標準色譜圖在最佳色譜條件下，分析檸檬酸標準溶液的保留時間為8.78min 。見圖 1。圖 1 檸檬酸標準色譜圖2.4 回歸方程和線性范圍的測定用 6 次測定的平均值計算回歸方程得到Y =541498x，檸檬酸含量在0.05g/L1.00g/L 范圍內呈線性關系，標準曲線的線性相關系數r 2=0.99979。2.5 方法的精密度與回收率將 5 種檸檬酸含量不同的葡萄酒樣品分別取 6 份平行樣，按所選色譜條件下進行測定，測得 5 種樣品的相對標準偏差（ RSD ）；同時在分析樣品時， 5 種樣品平行取樣，各取 10.0mL 樣品于 25mL 容量瓶中，分別加入

11、 1.000g/L 的標準溶液2.0mL 、10mL ，以超純水定容至刻度。超出線性以外的加標溶液進行適當稀釋，再進行測定。測得5 種樣品加標的回收率結果見表1。表 1 試樣測定的精密度與回收率實驗結果（n 6）由表 1 可看出，該法的相對標準偏差（RSD ）<3.0，回收率為 93.8%106.2。 2.6 干擾試驗和最低檢出限選線性范圍中段質量濃度123456789101112t/minA /m A U（下轉第 54 頁）張素娟，等：高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量492009 年第 3 期9 月出版收購的區域進行實地調查，了解果樹農用化學品使用情況，收集農用化學品的種類、使用劑

12、量、作業方法等相關信息，同時對種植區域內農用化學品的銷售流通環節進行調查，了解農藥化學品銷售的種類、數量、來源、流向，核查銷售和使用的農用化學品在種類、數量等方面是否吻合，必要時可采集原料樣品進行檢測驗證。采集種植區域的土壤樣品進行檢測，了解土壤中重金屬污染以及農藥殘留情況。將調查的結果按區域、時間進行分類管理，并以此作為判斷原料是否安全的主要依據，對原料種植區域進行分類，確定原料的合格采購區域。 2.3 加強原料的入廠驗收作好原料入廠驗收工作，逐車查驗原料的來源地，堅決杜絕非合格種植區域內的原料進入生產線。對來自合格種植區域的原料檢測其包裝、運輸的衛生條件以及其腐爛情況，對不符合要求的予以絕

13、收。對合格的原料按區域分類存放，并按時間順序進入生產線進行加工，保證產品的可追溯性。 2.4 積極配合監管企業積極配合中央、地方各級政府及主管部門，切實加強監管力度，認真貫徹落實國家新的食品安全法各項條款，建立起統一的、明確的、行之有效的、與國際接軌的安全質量規則標準體系和產品安全質量預警制度。做到企業在為客戶和消費者負責的同時，也要為國家更要為企業自己的信譽負責。各級政府監管部門在處理質量事故時找出問題和差距的同時，尋求解決的辦法，幫助企業提早預防和克服不安全隱患。作為企業，要理性看待和接受政府監管部門的檢查、批評、指導，一旦發現問題，要自覺地及早的克服，以防影響企業長遠發展。2.5 規范農

14、用化學品的生產及銷售農用化學品的生產、銷售企業也應建立健全農產品的檔案管理制度，利用現代科學技術力量大力發展低濃度、低殘留的農用化學品，始終保持與國際農用化學品接軌。總之，果汁產品的安全，關系到果汁加工企業的長足發展，關系到眾多消費者的身體健康。企業要花大力氣，把好每個質量關，真正從源頭上消除不安全隱患的發生。要做到這些，要有長遠打算，不能急功近利，務必以一流的管理和技術水準作為實施產品安全質量強有力的后盾。參考文獻1大陶 . 有機果汁 安全級別最高的飲品 J . 食品與健康，2005（2）： 16-18.2陳敏 . 梨濃縮清汁生產工藝研究J . 食品工程， 2008（2）：40-41.（0.

15、40mg/mL）進行干擾實驗，選常見的食品添加劑苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、雙乙酸鈉、丙酸鈣等物質在 10 倍濃度范圍內，在確定的色譜條件下進行標樣的測定。試驗結果表明在本實驗條件下不產生干擾（測定值相對偏差小于5%，即認為無干擾）。本方法按儀器的 3 倍噪聲計算，檸檬酸的最低檢出質量濃度為 0.03mg/L。以儀器的 10 倍噪音計算，檸檬酸的最低定量檢出濃度為0.10mg/L。3 結論本文采用高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量，該方法有很好的線性關系，相關系數為0.9998，其最低檢出濃度為0.03mg/L，回收率為 93.8%106.2，具有簡便靈敏、準確、干擾少等優點，可適用于葡萄酒樣品中檸檬酸的檢測分析。參考文獻1陳雪湘 . 電位滴定法測定檸檬酸鈉含量J