1、1抗血管生成治療及恩度抗血管生成治療及恩度先聲藥業抗腫瘤藥事業部先聲藥業抗腫瘤藥事業部市場部市場部2006年年2Folkman,J. Tumor angiogenesis: therapeutic implication. N.Engl. J.Med. 1971. 285：1182-1186.腫瘤血管生成理論腫瘤血管生成理論Judah Folkman 教授教授腫瘤血管生成理論之父腫瘤血管生成理論之父波士頓兒童醫院醫療中心外科研究室主任波士頓兒童醫院醫療中心外科研究室主任美國國家藝術和科學院以及國家科學院美國國家藝術和科學院以及國家科學院(NAS)(NAS)院士院士3“抗血管生成療法抗血管生成療

2、法”示意圖示意圖細胞癌變細胞癌變小腫瘤小腫瘤腫瘤生長腫瘤生長分泌生長因子分泌生長因子誘發新生血管誘發新生血管新生血管向腫瘤供養新生血管向腫瘤供養癌細胞通過血管擴散癌細胞通過血管擴散腫瘤休眠腫瘤休眠血血 管管血血 管管血血 管管4 2003 2003 年度世界十大科技突破年度世界十大科技突破 引自美國引自美國科學科學雜志雜志 5血管生成的雙向調節機制血管生成的雙向調節機制目前的研究表明，機體對血管生成調控遵循雙向調節的普遍規律。血目前的研究表明，機體對血管生成調控遵循雙向調節的普遍規律。血管生成是受血管生成促進因子和血管生成抑制因子共同調節的。管生成是受血管生成促進因子和血管生成抑制因子共同調節

3、的。AngiostatinEndostatinThrombospondin-1VEGFbFGFPDGF6內源性促抗血管生成因子內源性促抗血管生成因子 Stimulators InhibitorsVEGFbFGFPIGFPDGFTGF-a a/b bTNF-a aIL-8HGFAngiogeninIL-3ProliferinLeptinG-CSFInterferons a/ba/bAngiostatinEndostatinVasostatinCanstatinTumstatinPlatelet factor-4Thrombospodin-1IL-1216 kD prolactin fragmen

4、tIL-18IP-1053 kD antithrombin III7抗血管生成治療的策略抗血管生成治療的策略通過抑制促進因子的表達或者外援性補充抑制因子等方法改變通過抑制促進因子的表達或者外援性補充抑制因子等方法改變血管生成促進因子和抑制因子之間的相對平衡，來阻斷血管生血管生成促進因子和抑制因子之間的相對平衡，來阻斷血管生成。成。直接針對各種血管生長因子抗體或藥物。直接針對各種血管生長因子抗體或藥物。針對生長因子受體的藥物，阻斷細胞內的信號傳導通路。針對生長因子受體的藥物，阻斷細胞內的信號傳導通路。針對血管內皮細胞的藥物，抑制內皮細胞的增值和遷移。針對血管內皮細胞的藥物，抑制內皮細胞的增值和遷

5、移。基質金屬蛋白酶抑制劑，阻止基底膜以及細胞外基質的降解。基質金屬蛋白酶抑制劑，阻止基底膜以及細胞外基質的降解。其他，比如抗粘附分子抗體抗整合素其他，比如抗粘附分子抗體抗整合素 a av vb b3 3 等等8 抗血管生成治療目前已經成為腫瘤治療中最引人矚目的抗血管生成治療目前已經成為腫瘤治療中最引人矚目的熱點領域之一。熱點領域之一。 經過近經過近3030年的探索，近年來已經有幾十種新生血管抑制年的探索，近年來已經有幾十種新生血管抑制劑藥物進入劑藥物進入 I I、II II、III III 期臨床研究，其中最引人注目的便期臨床研究，其中最引人注目的便是目前發現的最廣譜的血管生成抑制劑是目前發現

6、的最廣譜的血管生成抑制劑 Endostatin(ES)。 腫瘤血管生成理論腫瘤血管生成理論9內皮抑素內皮抑素 Endostatin 的發現的發現Oreilly MS, et al. Cell 1997; 88:277-285.10內皮抑素內皮抑素 Endostatin 的發現的發現 內皮抑素內皮抑素 ES ES 最初是從鼠的成最初是從鼠的成血管細胞瘤株培養液中分離提血管細胞瘤株培養液中分離提純得到的一種在動物體內天然純得到的一種在動物體內天然存在的蛋白。存在的蛋白。 內皮抑素內皮抑素 ES ES 是由細胞外基質是由細胞外基質成分膠原成分膠原 的羧基末端水的羧基末端水解而來，含有解而來，含有18

7、4184個氨基酸，個氨基酸，分子量為分子量為20 KD。 試驗研究發現內皮抑素試驗研究發現內皮抑素 ES ES 具具有強烈抑制血管生成的作用。有強烈抑制血管生成的作用。11Oreilly MS, et al. Cell 1997; 88:277-285.內皮抑素內皮抑素 Endostatin 的抑瘤試驗的抑瘤試驗12內皮抑素內皮抑素 Endostatin 的抑瘤試驗的抑瘤試驗Oreilly MS, et al. Cell 1997; 88:277-285. Boehm T, et al. Nature 1997;390:404-407.13內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (一一) )

8、 Endostatin 能作用于能作用于 VEGF 的受體的受體 KDR/Flk-1，阻止，阻止 VEGF與內皮細胞結合，直接阻斷與內皮細胞結合，直接阻斷 VEGF 的作用。的作用。 Kim YM, et al. JBC, 2002, 277(31):27872-27879.14干擾血管生成因子的作用：干擾血管生成因子的作用： 與與 bFGF 競爭結合，干擾其信號傳導通路。競爭結合，干擾其信號傳導通路。 下調下調 VEGF mRNA 和蛋白表達，直接阻斷和蛋白表達，直接阻斷 VEGF 受體受體的信號轉導，從而抑制的信號轉導，從而抑制 VEGF 介導的內皮細胞遷移和介導的內皮細胞遷移和血管生成。

9、血管生成。內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 (一一)Hajitou A, et al. FASEB J. 2002, 16(13): 1802-1804.Urbich C, et al. FASEB J. 2002, 16(7): 706-708.15 基質金屬蛋白酶基質金屬蛋白酶 MMP-2 在血管生成中發揮重要作用，在血管生成中發揮重要作用，Endostatin 能結合能結合 MMP-2 的催化活性區，阻斷其作用。的催化活性區，阻斷其作用。 Lee SJ, et al. FEBS letters, 2002:147-152.內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (二二) )16 E

10、ndostatin 能結合于能結合于 Tropomyosin, , 破壞微絲的完整性，破壞微絲的完整性，抑制內皮細胞的遷移，誘導其凋亡，發揮抗腫瘤作用。抑制內皮細胞的遷移，誘導其凋亡，發揮抗腫瘤作用。 MacDonald NJ, et al. JBC, 2001, 276(27): 25190-25196內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (三三) )17 Endostatin 能抑制能抑制 Wnt 信號通路，促進信號通路，促進 b b-catenin 的降解，的降解，抑制內皮細胞移動，導致內皮細胞停滯在抑制內皮細胞移動，導致內皮細胞停滯在G1期，減少內皮期，減少內皮細胞在細胞在S S

11、期的比例引起細胞周期停滯。期的比例引起細胞周期停滯。 Hanai JI, et al. JCB, 2002, 158(3):529-539.內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (四四) )18對內皮細胞凋亡的影響：對內皮細胞凋亡的影響： ES ES 的促內皮細胞凋亡作用可能與誘導酪氨酸激酶活的促內皮細胞凋亡作用可能與誘導酪氨酸激酶活性性, ,抑制抑制 bcl-2 bcl-2 、bcl-xl bcl-xl 和和bad bad 表達有關表達有關, , 而沒有改而沒有改變變 baxbax、p53 p53 、cdc-5Acdc-5A、p38 MAPK p38 MAPK 的基因表達。的基因表達。

12、ES ES 還能破壞微絲的完整性抑制內皮細胞的運動還能破壞微絲的完整性抑制內皮細胞的運動, ,誘誘導內皮細胞凋亡導內皮細胞凋亡, ,最終抑制腫瘤的生長最終抑制腫瘤的生長內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 (五五)Shichiri M, et al. FASEB J, 2001, 15(6):1044-1053.Dixelius J, et al. Blood, 2000, 95(11):3403-3411.19Folkman J. Experimental Cell Research, 2005.內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 (六六)20 EndostatinEndostatin能下

13、能下調體內的促血管生調體內的促血管生成因子，上調體內成因子，上調體內的血管生成抑制因的血管生成抑制因子，通過改變血管子，通過改變血管生成調節因子的平生成調節因子的平衡關系，發揮抗血衡關系，發揮抗血管生成作用。管生成作用。 內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (六六) )Folkman J. Experimental Cell Research, 2005.21 Endostatin inhibits 65 different tumor types and modifies 12% of the human genome to downregulate pathological angi

14、ogenesis without side-effects. (抑制65種腫瘤生長，影響占人類基因組12的與血管生成相關的基因發揮抗血管生成作用) In humans, endostatin has virtually no toxicity and has revealed no resistance even when it has been administered to patients every day for up to 3.5 years without interruption. (國外有患者連續應用endostatin超過3.5年) Endostatin, therefor

15、e, represents a model of a broad spectrum angiogenesis inhibitor that in the future could be a platform anti-cancer agent for coadministration with other therapies.內皮抑素的作用機理內皮抑素的作用機理 ( (六六) )Folkman J. Experimental Cell Research, 2005.22 Endostatin 缺失的小鼠體內腫瘤生長速度加快缺失的小鼠體內腫瘤生長速度加快2-32-3倍；而倍；而Endostati

16、n 表達水平高表達水平高1.61.6倍的小鼠體內腫瘤生長速度相對倍的小鼠體內腫瘤生長速度相對于正常小鼠減慢于正常小鼠減慢3 3倍。倍。 Sund M, et al. PNAS, 2005, 102(8):2934-2939.內皮抑素的基因敲除試驗內皮抑素的基因敲除試驗23內皮抑素與內皮抑素與 Down syndrome Down Syndrome (DS) 又叫又叫21 三體綜合癥，患者具有三體綜合癥，患者具有3條條21號染色體，號染色體，最主要的特點是智力障礙。最主要的特點是智力障礙。Endostatin 的基因位于的基因位于21號染色體上，因此，號染色體上，因此，DS 患者血中患者血中 E

17、ndostatin 水平較正常升高水平較正常升高1/3。一個有趣的現象是這類。一個有趣的現象是這類患者中的實體瘤發病率明顯較正常人低。患者中的實體瘤發病率明顯較正常人低。 Zorick T, et al. European Journal of Human Genetics, 2001, 9:811-814.24國家一類生物新藥國家一類生物新藥恩度恩度TM (ENDOSTAR)25產品一般信息產品一般信息 通通 用用 名：重組人血管內皮抑制素注射液名：重組人血管內皮抑制素注射液 注冊商標：恩度注冊商標：恩度TM EndostarTM 英英 文文 名名：Recombinant Human End

18、ostatin Injection 類類 別別：生物制品一類新藥生物制品一類新藥 規規 格格：15mg/3ml/支支 ( 2.4105u/支支 ) 代代 號號：YH-16 26恩度恩度TM 樣品樣品27恩度恩度TM (Endostar) 恩度恩度TM TM 不是單純的不是單純的 Endostatin ，是在是在 ES 母體上創造性母體上創造性的添加了的添加了9個氨基酸的新型個氨基酸的新型 Endostatin ，不僅使不僅使 ES 穩定穩定性提高，半衰期延長，性提高，半衰期延長， 而且生物活性增加。而且生物活性增加。 恩度恩度TM TM 是純度大于是純度大于99.9%高純生物制劑。高純生物制劑

19、。 恩度恩度TM TM 是人源化蛋白，不會誘導自身抗體產生。是人源化蛋白，不會誘導自身抗體產生。 恩度恩度TM TM 的蛋白非常穩定，可以室溫放置一年仍然保持活的蛋白非常穩定，可以室溫放置一年仍然保持活性，而國外的同類產品需要性，而國外的同類產品需要 -80冷凍保存。冷凍保存。28包含體電鏡照片包含體電鏡照片 高效表達的蛋白高效表達的蛋白 在大腸桿菌內形在大腸桿菌內形 成大量無活性包成大量無活性包 含體含體 。29超過超過 99% 的的 Endostatin 不能復性不能復性Endostatin 復性是一個世界性難題復性是一個世界性難題30復性復性結構不規則、無生物活性結構不規則、無生物活性特

20、定三維結構、有生物活性特定三維結構、有生物活性什么是蛋白質復性？什么是蛋白質復性？31恩度與恩度與 Endostatin 的比較的比較項目項目Endostatin恩度恩度生產廠家生產廠家美國美國EntreMed 公司公司先聲麥得津公司先聲麥得津公司氨基酸數目氨基酸數目184 184 個個193 193 個個表達體系表達體系酵母酵母大腸桿菌大腸桿菌抑瘤活性抑瘤活性較強作用較強作用Endostatin 的兩倍以的兩倍以上上純度純度低低高（高（99%99%）產量產量低低高高生產成本生產成本高昂高昂較低較低生產周期生產周期長長短短臨床研究臨床研究終止于終止于 II II 期臨床研究期臨床研究批準上市批

21、準上市32恩度恩度TMTM與國外同類產品的質量比較與國外同類產品的質量比較YH-16 樣品（中國）樣品（中國）高壓液相色譜法：純度比較高壓液相色譜法：純度比較恩度恩度TM TM 的純度遠高于國外的純度遠高于國外 Endostatin 樣品，這也是恩度的劑量樣品，這也是恩度的劑量只有國外十分之一左右的原因。只有國外十分之一左右的原因。EntreMed 公司公司樣樣品品(美美國國)33恩度的活性分析恩度的活性分析雞胚血管雞胚血管生成抑制試驗生成抑制試驗對照組對照組恩度組恩度組34恩度的活性分析恩度的活性分析 體外遷移試驗體外遷移試驗對照組對照組恩度組恩度組35863計劃重大科技專項資助計劃重大科技

22、專項資助36恩度恩度TM TM 臨床試驗研究臨床試驗研究中國醫學科學院腫瘤醫院中國醫學科學院腫瘤醫院 內科內科 孫燕院士孫燕院士37恩度恩度TM TM 國內臨床試驗國內臨床試驗 20012001年年7 7月月20022002年年3 3月月 恩度恩度TM TM I I 期臨床試驗期臨床試驗 20022002年年3 3月月20032003年年3 3月月 恩度恩度TMTM II II 期臨床試驗期臨床試驗 20032003年年4 4月月20042004年年7 7月月 恩度恩度TMTM III III 期臨床試驗期臨床試驗38藥代動力學藥代動力學正常人正常人 t t1/21/2為為10 10 小時小時

23、，全身清除率為，全身清除率為2.8 L/h/m2.8 L/h/m2 2。 正常小鼠靜脈給藥后正常小鼠靜脈給藥后腎腎、肺和肝中的濃度高于血肺和肝中的濃度高于血漿漿，肌肉、脂肪和腦濃度最低。，肌肉、脂肪和腦濃度最低。主要經腎排泄。主要經腎排泄。 荷瘤小鼠靜脈注射本品后全身分布與正常小鼠相荷瘤小鼠靜脈注射本品后全身分布與正常小鼠相近，腫瘤組織中分布不高。近，腫瘤組織中分布不高。39 中國醫學科學院腫瘤醫院中國醫學科學院腫瘤醫院 遼寧省腫瘤醫院遼寧省腫瘤醫院 廣西醫科大學腫瘤醫院廣西醫科大學腫瘤醫院 浙江省腫瘤醫院浙江省腫瘤醫院 天津醫科大學腫瘤醫院天津醫科大學腫瘤醫院 北京胸部腫瘤醫院北京胸部腫瘤醫

24、院 四川大學華西醫院四川大學華西醫院 中山大學腫瘤醫院中山大學腫瘤醫院 天津第二中心醫院天津第二中心醫院 福建省腫瘤醫院福建省腫瘤醫院 第三軍醫大學新橋醫院第三軍醫大學新橋醫院 第三軍醫大學西南醫院第三軍醫大學西南醫院 安徽省腫瘤醫院安徽省腫瘤醫院 福建醫學大學協和醫院福建醫學大學協和醫院 軍事醫學科學院附屬醫院軍事醫學科學院附屬醫院 西安交通大學第一醫院西安交通大學第一醫院 第四軍醫大學西京醫院第四軍醫大學西京醫院 上海長征醫院上海長征醫院 河南省腫瘤醫院河南省腫瘤醫院 河北省腫瘤醫院河北省腫瘤醫院 福建醫科大學第一附屬醫院福建醫科大學第一附屬醫院 山東大學齊魯醫院山東大學齊魯醫院 山東省腫

25、瘤醫院山東省腫瘤醫院 天津市胸科醫院天津市胸科醫院 期臨床試驗參加醫院（期臨床試驗參加醫院（2424家）家）40 Sun Y, Wang JW, Liu Y et al, Results of phase III trial of rh-endostatin (YH-16) in advanced non-small lung cancer (NSCLC) patients. Proc ASCO 2005; 23:7138a 王金萬、孫燕、劉永煜王金萬、孫燕、劉永煜, ,等等. . 重組人血管內皮抑素聯合重組人血管內皮抑素聯合NPNP方案治療晚期方案治療晚期NSCLCNSCLC隨機、雙盲、對照

26、、多中心隨機、雙盲、對照、多中心IIIIII期臨期臨床研究。中國肺癌雜志床研究。中國肺癌雜志, 2005, 2005，8 8：283283290 290 期臨床試驗發表論文期臨床試驗發表論文41研究目的：研究目的： 主要目的：主要目的：RR、CBR、TTP 、生存期生存期 次要目的：次要目的：QOL、臨床癥狀緩解率、藥物的安全性臨床癥狀緩解率、藥物的安全性 研究設計：研究設計： 隨機、雙盲、安慰劑平行對照、多中心臨床試驗隨機、雙盲、安慰劑平行對照、多中心臨床試驗質控措施：質控措施： 設立獨立療效評價委員會設立獨立療效評價委員會 高頻度、高質量的臨床監查高頻度、高質量的臨床監查 III 期臨床試

27、驗期臨床試驗42 期臨床試驗設計期臨床試驗設計NSCLC初治或復治初治或復治493例例PS 0-2期期NVB25mg/m2NVB25mg/m2YH-16 7.5mg/m2+NS 250ml IV gttd1d2,3,4d5d1-14d21隨隨機機分分組組NVB25mg/m2CDDP30mg/m2NVB25mg/m2d21d1d2,3,4d5安慰劑安慰劑(NS 3.5ml)+NS 250ml IV gtt全國全國 24 個中心。個中心。隨機、雙盲、安慰劑平行對照、多中心臨床試驗隨機、雙盲、安慰劑平行對照、多中心臨床試驗初治：復治初治：復治= = 2：1試驗組：對照組試驗組：對照組= = 2：1C

28、DDP30mg/m2d1-1443 期臨床試驗期臨床試驗表表7.7.兩組患者的療效比較兩組患者的療效比較主要指標主要指標NP YH-16NP + + 安慰劑安慰劑P值值總有效率總有效率(%)(%)35.419.50.0003初治初治40.023.90.003復治復治23.98.50.03總臨床受益率總臨床受益率(%)(%)73.364.00.035初治初治76.565.00.02復治復治65.261.70.68總中位總中位TTP(TTP(月月) )6.33.60.0000初治初治6.63.70.0000復治復治5.73.20.0002總中位生存時間（月）總中位生存時間（月）14.879.900

29、.0000初治初治15.169.770.0000復治復治14.6710.000.01861 1年生存率（）年生存率（）62.7531.460.0000初治初治64.0831.830.0000復治復治59.4529.870.018644兩組患者生存兩組患者生存Kaplan-Meier曲線曲線試驗組中位生存期延長了試驗組中位生存期延長了5 5個月（個月（ 14.9 14.9 月月VS 9.9 VS 9.9 月月, ,延長延長 5.0 5.0 月，月，P P 0.0001 0.0001 ） ，1 1年生存率提高年生存率提高31.29% ( 31.29% ( P P 0.0001 ) 0.0001 )

30、。45 期臨床試驗期臨床試驗表表8. 兩組患者的不良反應比較兩組患者的不良反應比較 ( n=493 )毒性類型NPYH-16 （n=322）NP安慰劑（n=167）總不良反應3/4度總不良反應3/4度病例數病例數病例數病例數中性粒細胞減少17152.49328.58550.94728.2出血10532.2113.44728.153.0貧血5115.672.12515.031.8血小板減少20.60010.600惡心/嘔吐16550.6268.09053.9116.6腹瀉123.710.384.821.2便秘5516.910.33621.621.2粘膜炎30.910.30000轉胺酶226.82

31、0.684.800總膽紅素61.810.310.600發熱61.80010.600皮疹20.610.321.210.6疲乏10431.9123.76136.531.8疼痛3811.720.61810.842.4過敏30.910.30000周圍神經毒性30.90053.010.6脫發3912.0002313.821.2心律失常216.410.363.600注：兩組不良反應發生率比較無明顯差異注：兩組不良反應發生率比較無明顯差異46總結總結 恩度與恩度與NPNP聯合具有協同作用，能顯著延長患者腫瘤聯合具有協同作用，能顯著延長患者腫瘤緩解及生存時間。緩解及生存時間。恩度不增加化療的不良反應。恩度不增

32、加化療的不良反應。在獲得臨床受益的患者中大多數能伴隨腫瘤緩解提在獲得臨床受益的患者中大多數能伴隨腫瘤緩解提高生活質量，例如：緩解腫瘤引起的咳嗽，咯血，高生活質量，例如：緩解腫瘤引起的咳嗽，咯血，疼痛等。疼痛等。患者生存與恩度使用周期相關，臨床可推薦患者盡患者生存與恩度使用周期相關，臨床可推薦患者盡早使用恩度、且在能耐受的情況下盡可能延長使用早使用恩度、且在能耐受的情況下盡可能延長使用時間。時間。 47總結總結 恩度與化療聯合是一安全、有效的晚期恩度與化療聯合是一安全、有效的晚期NSCLC NSCLC 治療方案，也是化療與抗腫瘤血管生治療方案，也是化療與抗腫瘤血管生成靶向治療藥物聯合應用的成功典

33、范，不僅提成靶向治療藥物聯合應用的成功典范，不僅提高了療效，而且顯著提高了患者生存率，具有高了療效，而且顯著提高了患者生存率，具有令人鼓舞的臨床應用前景。令人鼓舞的臨床應用前景。48恩度恩度TM國外報道（一）國外報道（一）Nature Biotechnology, 2006, 24 (2) :117-118.49 Judah Folkman, who is familiar with Endostatin, since it was discovered in his laboratory at the Childrens Hospital in Boston says, “Medgenn h

34、as improved on the function of endostatin.” He cites tests in his laboratory that show endostar is at least twice as potent as endostatin in animal tumor models(Folkman教授證實，恩度在動物試驗上的抑教授證實，恩度在動物試驗上的抑瘤效果至少是瘤效果至少是Endostatin的兩倍的兩倍).Nature Biotechnology, 2006, 24 (2) :117-118.恩度恩度TM國外報道（一）國外報道（一）50恩度恩度TM

35、國外報道（二）國外報道（二）51 “ The developments in China represent a very important advance,” says Folkman. “Most of the angiogenesis inhibitors currently approved in the U.S., and in 28 other countries, block a single angiogenic factor produced by tumors, such as Avastins blockage of vascular endothelial growth factor (VEGF). The Chine