1、液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第1頁 共8 頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC1適用范圍本設(shè)備配備ACQUITY UPLC液相色譜儀、TQS MS/MS 質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機物的定性、定量分析，是一種具有高靈敏度的檢測儀器，儀器由主機、計算機和數(shù)據(jù)處理軟件等組成。2. 職責2.1 操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認真填寫實驗使用記錄。2.2 保管人員負責對儀器進行定期維護和保養(yǎng)。2.3 科室負責人負責監(jiān)督檢查規(guī)程的執(zhí)行。3操作程序日常操作步驟：準備UPLC 設(shè)置樣品表 運行樣品定量打印報告。 注：如果一個星期內(nèi)不運行樣品請不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。 建立新方法和project的

2、操作步驟： 準備UPLC 建立新的project 用標準品調(diào)諧編輯質(zhì)譜方法編輯UPLC方法設(shè)置樣品表運行樣品定量 打印報告。3.1開機： 3.1.1 徹底開機順序（儀器已關(guān)閉） 確定MS及其它儀器電源電纜已連接 ，開氮氣發(fā)生器、開氬氣，小表<0.1mpa。打開計算機電源 > 等待windows正常啟動 >電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標紅叉。打開UPLC自動進樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標出現(xiàn)感嘆號！。 打開UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。打開質(zhì)譜電源 ，等待5min，離子源透視鏡里面亮。 打開Masslynx軟件，masslynx主界面 -左側(cè)instrument-Ma

3、ss tune-界面菜單欄vacuum-pump 同樣界面左側(cè)偏上diagnostics-vacuum-analyser MS1 turbo speed%要在5分鐘內(nèi)升到80。至少抽真空4個小時 > 查看真空狀態(tài)主界面mass console-界面左側(cè)xevo tq ms detector加號展開-ms display > 碰撞室真空度 >達液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第2頁 共 8頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC到 7.x e-5mbar 。3.1.2 日常開機順序（儀器未關(guān)閉） 開氮氣發(fā)生器、開氬氣，小表<0.1mpa，打開Masslynx軟件，進入工作站。

4、3.2建立項目點擊file下的project wizard ,出現(xiàn)對話框，單擊yes 出現(xiàn)對話框 ，輸入project ,location 為C:MS DATA ,單擊next ,選擇create existing project as template,并以c: 為模板，單擊finish .點擊OK。3.3 準備UPLC系統(tǒng)準備液相的一般流程：準備流動相> 準備樣品> 灌注二元泵 > 灌注自動進樣器 > 建立液相方法> 平衡液相3.3.1. 準備流動相 用0.22um的膜過濾緩沖液，所有的緩沖液和超純水都要新配制，超純水和緩

5、沖液使用不得超過二天，緩沖鹽一定要是可揮發(fā)的，而且濃度不要大于10mM。3.3.2.樣品要求 所有樣品都要用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22um的膜過濾。 3.3.3灌注二元泵在Masslynx 主界面，單擊MS Console,進入UPLC交互顯示界面， 點擊左欄Acquity UPLC System> Control > Start Up System ，單擊QSM，選擇需要用到的流動相位置，如A 和B，選擇seal wash，時間設(shè)為3分鐘。單擊SM，選擇 Strong Wash 5 cycles , Sample syringe 20單擊 Equilibrate

6、 to Method，將流速設(shè)為0 ,單擊 Start 開始灌注. 時間大約為9min 左右。設(shè)定流速，平衡液相 在Masslynx主界面，單擊Inlet Method 圖標 ，打開液相方法編輯窗口，單擊status > ACQUITY Additional Status ，進入液相控制臺，單擊A 或B或流速的位置，出現(xiàn)流速、比例設(shè)定對話框, 設(shè)定液相流速與比例，單擊對勾，開始平衡液相，如果后面要做調(diào)諧，可設(shè)定流速0.2ml/min,有機相與水相的比例為50:50。液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第3頁 共 8頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.4 準備質(zhì)譜 3.4.1. 計算化合物

7、單同位素質(zhì)量數(shù) Masslynx主界面> 單擊Tools> Molecular Weight Calculator, 輸入化合物的分子式（大寫-注意Cl、Br等正確的輸入方法） ,注意選單同位素Monoiso ,Ion Mode:離子化模式，+ve 正離子，-ve 負離子 ,單擊Calculate。3.4.2 用Intellistart進行自動調(diào)諧 在Masslynx 主界面單擊MS Tune圖標，打開調(diào)諧窗口， 單擊 Ion Mode> ES+ 或 ES- ，單擊 API Gas 圖標 打開氮氣， 單擊 打開高壓 選擇MS Mode 圖標 ，設(shè)定液相流速0.2ml/min,

8、 水：乙腈的比例為50:50。 把標準品調(diào)諧液放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處的A（或B或C）號位(注:濃度在200ppb左右)單擊Fluidics ,選擇Reservoir為A ,Flow State 為LC 模式，點擊Purge 圖標。Purge 結(jié)束后，將Flow State 改為Combine 模式，設(shè)定Function 為MS1 scan， Mass為計算出化合物的質(zhì)量數(shù)，span 為5，點擊進樣 ，開始進樣，直到離子的響應比較穩(wěn)定。保存調(diào)諧文件：File > Save As至已建的項目下。在Masslynx主界面，選擇Ms Console> Xevo TQ MS Detector

9、 選擇Intellistart ，選擇 Sample Tune and Develop Method ，ES+ 單擊 Start 圖標 ，出現(xiàn)Intellistart 自動調(diào)諧編輯窗口，選擇Switch to Advancedmode ，輸入Compound name (化合物名稱) ，Molecular Mass/Formula (分子量或分子式) Adduct A+（ M+H +， 選擇 Load Existing Sample Tune ,在Sample Tune Name 方框后的“。”處調(diào)用開始保存的調(diào)諧文件，在Develop MRM Method 前的方框打鉤，并在方框出輸入MRM

10、 方法的文件名 ，路徑為已建的項目下。在Print Report 前方框打鉤，Cone Voltage ，Collision Energy 處為默認值，F(xiàn)luidics 下的Flow Path 選擇Combined 模式，Sample Reservoir 和Sample Flow Rate 參數(shù)與Fuldics 下Combined 模式下的進樣參數(shù)保持一致。單擊右邊的Start 開始自動調(diào)諧。調(diào)諧成功，會有綠勾出現(xiàn) ，查看intellistart 報告液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第4頁 共 8頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.4.3 查看intellistart 中自動生成的質(zhì)譜方法

11、： 從MassLynx 主窗口，單擊 MS Method，出現(xiàn)MS Method 編輯對話框 , 選擇File > open, 選擇Intellistart 中保存的質(zhì)譜方法的文件，雙擊方法,如發(fā)現(xiàn)自動調(diào)諧生產(chǎn)的質(zhì)譜方法中部分參數(shù)有誤，則可以在Channels 窗口手動修改參數(shù)，填寫 relentinon window 中的end時間 ，此時間必須與液相色譜方法運行時間保持一致，選擇Auto Dwell,單擊OK，點擊File> Save As, 保存質(zhì)譜方法文件。3.5建立液相方法 3.5.1編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊Inle t ，輸入溶劑名稱，run time 及梯

12、度洗脫程序，梯度洗脫程序中最后階段時間必須與run time 符合，單擊OK, 選擇File > Save As 保存方法 ，單擊 Load Method ，平衡液相。3.5.2 建立樣品列表 在Masslynx 主窗口，選擇 File > New 建立一個空白的表samplelist。輸入文件名File Name ，樣品信息 File Text ，雙擊 MS File ，選擇質(zhì)譜方法 ，雙擊Inlet File, 選擇液相方法 ，在Bottle 中輸入樣品瓶的位置 ，在 Inject Volume 中輸入進樣體積，可右鍵> Add, 增加樣品表的行數(shù)，保存樣品表：File

13、> Save As 。3.6數(shù)據(jù)采集和處理 3.6.1. 選中要采集的樣品，單擊Run > Start ,選擇Acquire Sample Data only,，單擊OK 開始進樣并采集 。3.6.2在采集過程中，可查看色譜圖，點擊Chromatogram窗口 ，點擊Real-timeUpdate icon . 如果不能見整個TIC圖，單擊 Default Range 圖標。 如果方法中包括多個通道，可通過Display > Mass 查看如果方法中包括多個檢測器或多個Function,可通過Display > TIC 查看 3.6.3處理多個Function的數(shù)據(jù) 如

14、果質(zhì)譜方法中有多個Function，如有三個Function，如想看第二個Function，MS Scan 的數(shù)據(jù)。 液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第5頁 共 8 頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC 在色譜圖窗口，點擊 Display > TIC，選中MS Scan ，選擇 Add trace ，單擊 OK。如想查第二個Function, Daughter Scan 質(zhì)譜圖 ，在色譜圖中，選擇 Display > TIC, 選擇 ScanWaveDS Add trace ，單擊 OK。. 選擇 Process > Combine

15、spectra. 分別用右鍵輸入信號和本底噪音. 單擊 OK. 得到 Daughter Scan的質(zhì)譜圖，單擊 Process > Smooth ，單擊 OK。3.7 數(shù)據(jù)處理-外標定量法 3.7.1在Masslynx 主頁面單擊Targetlynx/Edit method，出現(xiàn)定量方法編輯對話框，單擊新建方法圖標，新建一個定量方法。3.7.2單擊Add new compound (添加新的化合物)圖標，添加一個新的化合物。3.7.3單擊菜單欄update,選中Quantitation Ion 和Compound Name（前面打勾）在Masslynx 主頁面，打開中等偏下低濃度標準品的

16、色譜圖，Display/Mass chromatogram選出要定量的化合物的離子對，一般強度高的化合物用來做為定量離子，另一個離子對則作為確證離子，用鼠標右鍵在定量離子對色譜圖上拉一下，則compound name, Acquisition Function Number, Quantification Trace, Predicted Retention Time和Retention Time window 將自動輸入到定量方法中。注意：在色譜圖上拉的時候，要遵循兩個原則，拉的位置要以色譜峰的峰尖左右對稱，拉的寬度要超過峰的起點和終點。3.7.4單擊工作曲線圖標，在工作曲線設(shè)置頁面，填入

17、Concentration Units:濃度單位，例如ng/ml, ug/kg，ppb, ppm等。 Concentration of Standard: Level 選擇Conc.A。 Polynomial Type 選擇 Linear. （可根據(jù)自己行業(yè)的規(guī)定） Calibration Origin_選擇exclude(排除原點)，include(包含原點)，force(強制過原點) Weithting Function(權(quán)重)_1/x （根據(jù)自己行業(yè)規(guī)定） Propagate Calibration Parameters_如果所有的化合物均用相同的工作曲線的參數(shù)，選Yes 液質(zhì)聯(lián)用儀操作

18、規(guī)程第6頁 共 8 頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC3.7.5打開積分參數(shù)列表，選中Apex Track Enabled （打勾，YES），Integration Window Extent 輸入2，選中Propagate Integration Parameters (打勾)，如果色譜峰并不是很對稱的色譜圖，可先在色譜圖上先設(shè)定參數(shù)，積分，好積分參數(shù)滿意之后，process/integrate/copy ,在Targetlynx 方法中Edit/Past 就可將其粘貼到Targetlynx 方法中。建議用Apex Track 積分方法，Smooth 方法建議用smooth

19、iteration 1,smooth width 2。重復上面的過程，把其他幾個化合物的信息全部加入 ，保存方法：File/Save As, 保存到當前項目的MethDB 文件夾中，正確的samplelist 表格模板，除了前面進樣時的選項之外，還要有sample type, ConA, 等選中要處理的樣品，單擊Process Samples，出現(xiàn)下圖的對話框，確保選中,Integrate 、sample ，calibrate Standard， Quantify Sample,選擇剛才編輯的Targetlynx 方法，單擊OK后，出現(xiàn)定量結(jié)果對話框。可根據(jù)自己的需要，用鼠標右鍵，Chang

20、Column Order 來增加或減少Summary中的選項。 3.8關(guān)機程序 3.8.1日常關(guān)機： 如果流動相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2分鐘，流速設(shè)為0.2ml/min，80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機相，沖洗至少20分鐘，停流速，水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機相，沖洗至少20分鐘，停流速，柱溫為室溫。 關(guān)質(zhì)譜：主界面mass tune或者電腦下面儀器圖標-界面左側(cè)偏上fluidics-flow state選擇為waste、關(guān)氬氣，mass tune界面或者電腦下面儀器圖標工具欄第6個> 關(guān)高壓mass tune界面右下角&g

21、t; 等待去溶劑氣溫度降低至100度以下mass tune界面或者電腦下面儀器圖標左側(cè)偏上。ES+source-temperature-desolvation > 關(guān)氮氣 ，點擊氮氣發(fā)生器開啟開關(guān)。3.8.2徹底關(guān)機 先完成日常關(guān)機 液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第7頁 共 8 頁SOP·I-Xevo-TQSFSIDC泄真空: tune page > vacuum > vent-yes > 等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到10以下 ，masslynx主界面 -左側(cè)instrument-Mass tune-界面左側(cè)偏上diagnostics-vacuum

22、-source turbo speed%退出軟件，其他界面先退出，主界面最后退出 關(guān)質(zhì)譜電源 > 關(guān)所有UPLC電源，計算機電源 ，儀器三個電源順序無所謂，關(guān)氮氣發(fā)生器，氬氣。 如果有UPS，關(guān)閉UPS電源，計算機電源。4 日常維護、保養(yǎng)及注意事項4.1 儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。 4.2 儀器室溫度應相對穩(wěn)定，一般應控制在20-25，保持恒溫；相對濕度最好為50-70%，室內(nèi)應備有溫度計和濕度計，一般采用空調(diào)和吸濕機調(diào)節(jié)溫度和濕度。 4.3 氣壓過濾機械泵油 ，停止樣品采集、停止流動相、關(guān)閉高壓、關(guān)閉所有氣流，關(guān)閉離子源內(nèi)的真空隔離閥。用一字鏍絲刀順時針方向擰開機械泵上的Gas Ballast 閥四分之一圈，運行 30 分鐘后再把 Gas Ballast 閥旋轉(zhuǎn)到原來關(guān)閉的位置。對于 ESI源，至少每星期做一次，對于APCI源，每天做一次。4.4 開高壓之前一定要先開氮氣，關(guān)氮氣之前一定要先關(guān)高壓。 4.5 ESI 離子化與溶劑密切相關(guān)，在使用某些溶劑和添加物需要注意以下幾個方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白質(zhì)和多肽分析，但對ESI離子化有抑制