1、黃芪當歸合劑防治腎臟纖維化的有效物質與分子機理研究項目批準號：303 3 07 1 0 項目組總人數：1 O批準金額：1 3500萬元 執行期限：2004O 120071 2項目負責人：李曉玫 教 授 北京大學摘要：在以往確證黃芪當歸合劑治療腎病臨床有效、并可在不同實驗動物模型中防治腎小球硬化和腎間質纖維化病變的研究工作基礎上，采用藥物分析方法分離并提取其復方有效物質、分析其化學成分。進一步在腎小球硬化和腎間質纖維化動物模型中研究復方有效物質與黃芪當歸合劑防止腎纖維化作用的異同；探討有效物質對腎臟纖維化相關差異基因表達譜變化的影響，找出療效相關基因，分析有效物質抗腎臟纖維化作用的關鍵靶點和主要

2、途徑，闡明療效相關基因的功能意義；綜合分析并闡明黃芪當歸復方有效物質防止腎纖維化的細胞與分子生物學機理n 各種腎臟疾病的慢性進展最終均導致腎臟纖維化病變，臨床表現為慢性腎衰竭直至尿毒癥，病人長期喪失勞動能力，需依靠腎臟替代治療(血液透析、腹膜透析或腎移植)而存活。在我國，一方面，隨著經濟發展和生活方式的改善，大城市人群中高血壓、糖尿病、動脈硬化等疾病繼發腎損害的發病率不斷升高，另一方面，貧困地區人群中仍然存在著感染相關或免疫介導慢性腎臟病導致的慢性腎衰竭，對醫學和社會都造成了沉重負擔。由于腎臟纖維化過程具有多途徑、多細胞、多環節相互作用的復雜病理生理機制，其防治一直是臨床難點，防治措施極為有限

3、。因此，針對腎臟病慢性進展過程尋找具有多途徑、多靶點、多環節作用的防治纖維化有效治療藥物一直是國內外腎臟病學者最為關注的問題。 慢性腎臟疾病導致腎臟纖維化的過程符合中醫“久病入絡"的重要理論。根據中醫理論研究，慢性腎臟疾病導致的腎臟纖維化病變屬虛、瘀、毒互結，痹阻絡脈導致經久難愈、漸成痼疾。傳統中藥方劑“當歸補血湯”中的兩味主藥中：黃芪具有補氣升陽、益氣健脾、托毒排膿、利水消腫的功效，其不同成分分別具有提高機體免疫功能、抗氧化、穩定紅細胞膜、降血壓等作用；當歸具有補血活血、調經止痛、潤腸通便的功效，其成分具有提高機體的免疫功能、擴張血管、抑制血小板聚集、抗氧化、保護紅細胞膜、抗炎等活

4、性。多年來的臨床實踐和研究表明，以當歸補血湯為主的中藥復方治療慢性腎小球腎炎具有肯定療效，大量臨床資料顯示其治療可以明顯改善慢性腎炎患者的腎功能。 項目組所在單位多年來的系列研究表明，根據傳統中藥“當歸補血湯”制成的黃芪當歸合劑對腎臟疾病的慢性進展具有全身和腎臟局部不同途徑的治療作用，包括改善腎病綜合征時的蛋白及脂質代謝，以及在不同類型的慢性腎小球硬化腎間質纖維化動物模型中可減少腎臟局部的促纖維化因子表達、減少炎癥細胞浸潤和細胞外基質積聚等。這些研究結果提示黃芪當歸合劑具有多途徑、多靶點、多環節作用的特點，有可能成為抗腎臟纖維化有效藥物。根據以往的研究推測，黃芪當歸合劑有可能通過影響一組腎臟纖

5、維化相關基因而引起多種細胞的功能或代謝變化，最終產生其多靶點、多環節、多途徑治療作用。由于復方中藥是一個有層次和結構的有機整體，其化學成分不是單味荮群貰分的筒學橢，因此其療效邐常是復方中各成分的綜合效果。目前，黃芪當歸合劑防治腎臟纖維化病變的藥效物質基礎尚未明確。 本項目將以藥理療效為指導，采用現代藥學手段對黃芪當歸合劑進行追蹤式分離，在發現黃芪當歸合劑中與療效相關的有效部位(分子群)或有效成分、并對其進行分析、鑒定和作用機理研究的基礎上，擬研究黃芪當歸合劑及其有效組分抗腎臟纖維化的療效及其基因表達譜改變之間的關系，結合相關的生物學研究，試圖闡明黃芪當歸合劑對腎臟纖維化治療作用的復方藥效物質基

6、礎和療效的關鍵靶點以及主要病理生理環節。擬開展的主要研究內容為： 1尋找并確定黃芪當歸合劑的有效物質，即有效組分或有效成分(群)。 應用腎小球硬化或腎間質纖維化模型，采用藥理活性追蹤分離方法獲得A&A不同組分，觀察其抗纖維化病變的異同，最終確定A&A抗纖維化作用有效成分群或單體化合物；同時采集動物A&A含藥血清，從中分離鑒定化學成分，分別觀察其治療作用特點。 2在腎纖維化動物模型中尋找并確定黃芪當歸合劑有效成分(群)的療效相關基因群。 在對照組、模型組和A&A治療組中，用基因芯片方法分析不同組間腎組織基因表達譜的變化，篩選出與腎臟纖維化相關的差異表達基因；應用RT-PC R或Northern方法驗證上調或下調基因(群)，確定A&A有效組分的療效相關基因；綜合分析療效相關已知基因作用的主要途徑；對療效相關未知基因進行生物信息學分析。 3在體內、體外實驗中探討并闡明A&A療效相關基因群的作用及其功能意義。 選擇特定腎臟細胞驗證療效相關已知基因在細胞增殖凋亡、細胞外基質合成降解失衡中的