1、 講學屯轂2009年1月第54卷第1期骨細胞形態.(ii成骨細胞成骨礦化能力的影響.取HA涂層組、HA/Ag涂層組和鈦合金對照組各lo塊,分別放入24孔培養板內,涂層組將涂層面向上,將1xlo 個/mL的MC3T3成骨細胞接種到材料涂層表面.培養14d后取出標本,加入含四環素的培養液(50lag/mL,標記30min后,更換新鮮不含四環素的培養液后繼續培養30min,PBS漂洗,95%乙醇固定10min,在熒光顯微鏡下進行觀察拍照(物鏡xlO,用隨機附 上述實驗重復3次,計數資料以均值±標準差表示,應用SPSSfor windows13.0統計軟件(美國SPSS進行分析處理,組間比較

2、采用r一檢驗及方差分析,兩兩比較采用StudentNewmanKeuls(SNK檢驗,P<0.05認為有統計學意義.2結果2.1HA/Ag涂層材料體外銀離子緩釋實驗HA/Ag涂層材料在SBF中銀離子緩釋結果見圖2,HA/Ag涂層中銀離子SBF浸提1d后,銀離子的濃度達到O.1ppm(1ppm=1.g/mL,至2周時,銀離子釋放漸趨平緩,在0.4ppm,至7周時,銀離子的濃度達到0.9ppm.有少量細菌黏附,以紅色死菌為主,金葡菌呈團狀分布,銅綠假單胞菌散在分布.培養4d后涂層材料表面生物被膜形成,HA/Ag涂層表面細菌黏附明顯少于HA普通涂層,生物被膜形成被抑制.培養7d形成的成熟生物被

3、膜較培養4d形成的早期生物膜明顯稠厚,HA涂層細菌密集,層疊如棉絮狀,HA/Ag涂層死菌明顯增多(圖3,SEM形態學改變見圖4.圖3培養7d時激光掃描共聚焦顯微鏡觀察涂層表面細菌生物膜大體情況活菌染色為綠色,死菌染色為紅色 圖2HA/Ag涂層在SBF中7周時間內銀離子釋放曲線2.2體外抗菌性能實驗經過在2%TSB菌液系統中培養2,4,7d,在HA/Ag復合涂層及HA普通涂層表面金葡菌及銅綠假單胞菌的黏附和細菌外物質的堆積隨著時間的延長而圖4培養7d時掃描電子顯微鏡觀察純HA涂層(a,(c及增多.CLSM觀察,培養2d時HA普通涂層表面細菌HA/Ag涂層(b,(d表面在2%TSB金葡菌(a,(b

4、和銅綠黏附開始增多,以綠色活菌為主,而HA/Ag復合涂層假單胞菌(c,(d生物被膜微觀形態(×600062 鈄學屯權2009年1月第54卷第1期“9露是也2f 翩鯉驪圖6HA涂層、HA/Ag涂層及鈦合金表面培養2,24和48h后成骨細胞密度曲線可制備出具有廣譜抗菌作用的復合材料【211.銀可以與細菌DNA結合,抑制細菌DNA多聚酶,從而抑制細菌繁殖,且銀強烈地吸引細菌體中酶蛋白的疏基,并迅速結合在一起,降低原生物活性酶的活性,具有抗菌作用,銀作為抗菌劑在生物醫學領域應用已久Il,221.載銀抗菌材料的抗菌性能直接與材料銀離子的釋放有關【2引.理論上,材料若能持續釋放銀離子,即應具有相

5、應的殺菌性能,但銀作為一種重金屬,對組織器官有毒性作用(最低殺菌濃度為0.1ppm,對細胞毒性濃度為1.6ppm,因此銀離子析出的濃度須控制在這一范圍內,以避免對機體細胞產生損害1241.本文通過原子發射光譜法檢測HA/Ag涂層材料在SBF中 圖7HA涂層(a,HA/Ag涂層9b及鈦合金(c表面培養48h后成骨細胞形態(X 1500 圖8培養14d后HA涂層(a,HA/Ag涂層(b和鈦合金(c表面礦化結節及3種材料表面礦化結節平均面積(d銀離子呈緩慢持續釋放趨勢，前幾天釋放速度較快 周后釋放速度開始驥顯減漫，添后中鑷離子 的濃度達到 可見載銀抗菌劑復 合涂層在中能維持有效殺菌濃度，且低于細胞

6、毒性濃度 通過阻止細菌的黏附以及細菌生物被膜的形成 可以明顯減少內植物術后相關感染的發生率金葡菌 秘銅綠假蕈脆墓是臀科內蘊物術后藕關感染常覓懿孳 蘭氏陽性及陰性菌，我們采用真空等離子體噴涂 技術制備跬添加鑲抗菌劑的復合涂層體 辯抗菌性糍試驗表暖，在金蘩蔻、鑭綠緩單麓 菌液培養 時，涂層及復合涂層表面生物 膜厚度相當，但復合涂層的生物膜的活菌百分 院與涂層程院已開始減低，說驥其抗篡終震初步 照現在培養及 時，復合涂層的細菌生物 膜的厚度、細菌密度均隨著時間延長而增加，但生物 膜厚度與活藹吾分斃與涂晨裰斃較有著驥顯酶差 舁，且活菌百分比呈降低趨勢可見，復合涂層 對金葡菌、銅綠假單胞菌具有良好的抗菌

7、效果 纓胞熬附是成囂鏹胞程植入艨料接觸的第一步， 它將直接影響成骨細胞在植入材料表面的增殖、分化 和鈣化，以及隨后的槭人材料與周圍骨組織之間的 囂整合。本文的俸外渡骨緩麓黏附實驗泛明，成營纓 胞在復合涂層的黏附能力與普通相似，均 優于鈦合金對照組，其表面早期就能觀察到成骨細 胞偽足伸展良好，緊密貼壁，表明添加銀抗菌劑 怎不影鐫成雷繅胞在涂層的生物赫辯麓力體內 骨植入材料與骨組織的生物固定主要依靠成骨細胞 在材料表面的礦化來達到骨整合，成骨細胞的成骨 麓力強弱對曹組織形成潑及囂一植入材料的骨夔合具 有直接的影響，鈣結節的多少也反映了成骨細胞分 化及成骨能力的強弱，故材料表謠成骨細胞成骨 礦純熊力

8、是優良禳人材料瀚重要方蕊，本文豹成骨 細胞成骨礦化實驗證明，在普通及復合涂 層表顢，成骨細胞的成骨礦化能力均強于鈦合金對 照組，表噯添趣鍛抗蘸裁后不影鐫涂瑟表露 的成骨細胞的成骨礦化能力，易與骨形成骨整合，適 合作為骨植入材料，并具有良好的抗菌能力 結論 通過對真空等離子噴涂技術制備的以銀作為抗 蔻添攘劑的抗鏊復合涂層簿羚緩釋、撓菌性 能及成骨細胞影響實驗結果表明，復合涂層銀 離子緩慢持續釋放，對金黃色葡萄球菌及銅綠假單 脆菌蠢噯顯豹抗菌作羆，屋成曹纓脆在涂層表甄表 現良好的黏附和成骨礦化能力因此這種新型的復 合抗菌涂層具有良好的抗藏作用及體外生物相容性， 初步認為可璦應蔫予骨科念屬蝗入秘謇毒表面提裹其 骨整合及抗菌性能，體內的抗菌性熊及生物相容性 尚需進一步研究 參考文獻 ， ， ， 。 磊，（兮： ， ， ， ，（）： ， ， 。 。， ，（）： ， ， ， ，（）： ， 。 ，（）：一 ， ： ， （）： ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， 晷，（）： ， ， 西越 （； ， 錯每毫蘇 毒囂繁謄繁期 ，（）： （ “ 狂 玨，囂輕 ， 戴 。 ，囂）：，：。， ，（）： ， 。 ， ，疆）： ， ， ， ， ）：一約 麓 ， ， ，簿：一 ， 一一