1、農藥學學報1999,1(3:3944Ch inese Jou rnal of Pesticide Science防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選朱振東王曉鳴田玉蘭武小菲(中國農科院作物品種資源研究所北京100081摘要在離體條件下測定了8種內吸性殺菌劑對大豆疫霉菌菌絲生長的抑制作用。甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、殺毒礬、霜脲錳鋅、克露和加瑞農為有效殺菌劑,霜霉威不具有抑菌效果。甲霜靈的EC50值為0.4870g mL,抑菌效果最好,安克錳鋅、甲霜靈錳鋅的EC50值分別為1.4261g mL和1.7697g mL,效果次之。在活體條件下,甲霜靈和甲霜靈錳鋅能完全抑制大豆疫霉菌對感病大豆品種的侵入,并

2、具有較長的藥效期,安克錳鋅、殺毒礬和霜霉威雖然具有明顯的防治效果但藥效期很短。大豆疫霉菌菌株間對甲霜靈錳鋅的敏感性存在差異,但這種差異與菌株來源沒有相關性,EC50平均值為1.8302g mL,沒有發現耐藥性菌株。在我國黑龍江省目前缺乏有效抗病品種的情況下,建議應用甲霜靈錳鋅防治大豆疫霉根腐病。關鍵詞大豆;疫霉根腐病;大豆疫霉菌;殺菌劑;化學防治由大豆疫霉菌(P hy top h thora sojae引起的大豆疫霉菌根腐病是在我國發生的一種新的大豆病害,目前已在黑龍江省造成危害1,2。該病在大豆的任何生育期均可造成危害,具有極大的破壞性和毀滅性。大豆對疫霉菌的抗性由顯性單基因控制,選育抗病品

3、種是防治該病的主要方法,但由于該菌遺傳變異性極大,在美國和加拿大已有多個抗病基因被不斷產生的新的生理小種所克服3。一些研究表明,甲霜靈對大豆疫霉根腐病具有一定的防治效果,特別是耐病品種輔以甲霜靈處理防病效果明顯4。在我國,雖然已篩選出一些抗大豆疫霉菌1號生理小種的品種5,但由于目前黑龍江省病區生理小種結構仍不明確,這些品種的實用性有待進一步研究。因此,篩選并應用殺菌劑是我國目前有效防治大豆疫霉根腐病的方法之一。1材料與方法1.1供試材料25%甲霜靈可濕性粉劑(南通染化廠;58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑(NOVA R T IS公司產品;64%殺毒礬M8可濕性粉劑(SANDO Z公司產品;69%安克錳

4、鋅可濕性粉劑(氰胺中國有限公司產品;72%杜邦克露可濕性粉劑(杜邦中國有限公司產品;72%霜脲錳鋅可濕性粉劑(河北萬全農藥廠;72.2%霜霉威水劑(江蘇新沂農藥廠;47%加瑞農可濕性粉劑(北興化學工業株式會社。大豆疫霉菌菌株U SA2R1和U SA2R25由美國俄亥俄州立大學Schm itthenner博士提供;“九五”國家攻關(962005201212資助課題PS M1和PM S2由黑龍江省農科院合江地區農科所馬淑梅研究員提供,其他11個菌株均從染病大豆植株分離獲得。除特別說明外,所有試驗均用4121菌株。合豐25號(已鑒定為感病品種,由黑龍江省農科院合江地區農科所馬淑梅研究員提供。1.2殺

5、菌劑對大豆疫霉菌菌絲生長的影響在25黑暗條件下,供試菌株4121在稀釋V8培養基上培養7d,用打孔器從菌落邊緣打取直徑為5mm的圓形菌塊,移在含不同濃度藥劑的稀釋V8平板上(藥劑的濃度梯度分別是:甲霜靈和甲霜靈錳鋅為0、0.1、0.5、1、5、10g mL;安克錳鋅為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3g mL;克露、霜脲錳鋅和殺毒礬為0、5、10、15、20、25、30g mL,加瑞農和霜霉威為0,0.1, 0.5,1,5,10,50,100g mL,菌塊面朝下置于平板中央,每平板接種1塊,每處理重復三次, 25黑暗條件下培養,5d后測量菌落直徑,作出不同藥劑的抑菌回歸方程,求出EC50和

6、EC95值。試驗重復3次。1.3不同藥劑對大豆疫霉菌作用的活體測定供試品種為合豐25號,以種子重量0.5%藥劑量拌種。藥劑處理種子播種后7、10、15、20、25d分別運用下胚軸傷口接種4121菌株5,以同一播期未進行處理種子的植株為對照,接種后在霧室保濕2d,然后移入溫室正常管理,6d調查發病情況。病級劃分標準為:0級,沒有病斑擴展;1級,病斑擴展5mm;2級,病斑擴展10mm;3級,病斑擴展15mm;4級,病斑擴展大于15mm,植株存活;5級,植株死亡。試驗重復2次。供試品種為合豐25號,以種子重量0.5%藥劑量拌種。用修改的W alker和Schm itthen2 ner的菌層接種方法進

7、行藥效試驗6:底部帶孔的大小為9c m12.5c m12.5c m(底徑高口徑的標準塑料花盆用吸水紙封蓋底眼,加6c m高的新蛭石并加水浸透,將在直徑為9 c m的DV8A培養基平板上培養10d的4121菌株接種體圓片置于蛭石中央,上面加2.5c m 高的蛭石,加水充分浸透后播種。每個藥劑處理10粒種子,均勻播于花盆中央,保證每粒種子都垂直于接種體層以便根直接穿過接種體層。播種后覆蓋2c m的蛭石,澆水浸透。每處理設接菌對照(未處理種子加接種體層和空白對照(未處理種子不加接種體層。溫室溫度控制在1828,出苗后每天澆水12次并根據需要輔以光照。25d后調查出苗后植株死亡率和病級,計算防治效果。

8、試驗重復2次。出苗后死亡率(%=(死苗數 出苗總數100病級(植株矮化率:Sco re=1-N a H aN bH b100式中N a:接菌處理活植株數;N b:未接菌處理活植株數;H a:接菌處理平均株高;H b:未接菌處理平均株高防治效果=(S c-S t S c100式中S c:接菌對照病級;S t:藥劑處理病級。04農藥學學報1999年1.4不同來源大豆疫霉菌分離物對甲霜靈錳鋅的敏感性方法同1.2。2結果與分析2.1殺菌劑對大豆疫霉菌菌絲生長的影響測定了8種對低等真菌具有抑菌作用的內吸性殺菌劑對大豆疫霉菌菌絲生長的影響。結果表明,在離體條件下甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、霜脲錳鋅、克露

9、和殺毒礬6種藥劑能明顯抑制菌絲生長,其中甲霜靈的EC 50值為0.487g mL ,效果最好,其次為安克錳鋅和甲霜靈錳鋅(見表1。霜霉威為氨基甲酸酯類內吸性殺菌劑,在離體條件下抑菌作用很弱,其EC 50值為1185.6481g mL 。加瑞農在50g mL 時對大豆疫霉菌的相對抑制率為64.84%,在100g mL 時完全抑制其生長,但低濃度的加瑞農可加速大豆疫霉菌菌絲生長。表16種殺菌劑對大豆疫霉菌菌絲生長的抑制作用T ab le 1T he sen sitivity of hyp hal grow th of P hy top h thora sojae to 6fungicides藥劑F

10、ungicide抑菌回歸方程Inh ib ito ry equati on EC 50 g mL -195%置信度95%fiducial li m it EC 95 g mL-1y =3.2592+1.9243x8.02946.557810.414057.47492.2不同藥劑對大豆疫霉菌作用的活體測定運用下胚軸傷口接種檢測6種殺菌劑在活體條件下對大豆疫霉菌的抑菌效果。結果表明,在活體條件下藥劑間對大豆疫霉菌的抑菌效果和藥效期差異明顯。0.5%劑量拌種,播種后25d 接種,甲霜靈和甲霜靈錳鋅的防效均保持100%,這兩種藥劑在活體條件下具有很高的抑菌效果和較長的藥效期。0.5%安克錳鋅、殺毒礬、

11、霜脲錳鋅和霜霉威拌種,播種后7d 接種,其防效分別為68%、22%、0%和0%,播種后10d 接種,殺毒礬防效降至0,15d 后安克錳鋅完全失去作用。菌層法接種試驗結果見表2。對出苗率的調查結果表明,除霜霉威外,其他5種藥劑處理不影響種子萌發,同時能防止由大豆疫霉菌引起的出苗前死亡,但霜脲錳鋅顯著延緩種子萌發。25d 后甲霜靈和甲霜靈錳鋅處理出苗后植株死亡率均為0,植株生長發育正常,根系發達,未表現任何大豆疫霉根腐病癥狀,顯然完全抑制了大豆疫霉菌的侵入。該結果再次表明,甲霜靈和甲霜靈錳鋅在活體條件下對大豆疫霉菌具有很高的抑制作用和較長的作用期。安克錳鋅、殺毒礬和霜霉威防治效果依次為76.18%

12、、74.88%和71.09%,部分植株表現矮化或死亡,其14第3期朱振東等:防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選在活體條件下對大豆疫霉菌的作用效果明顯低于甲霜靈和甲霜靈錳鋅,不能抑制疫霉菌的入侵。霜脲錳鋅的防病效果最差,僅為43.91%,而且有28.57%的植株死亡。表20.5%藥劑拌種對大豆疫霉根腐病的防治效果T ab le2T he con tro l efficiency of coating seed w ith0.5%fungicides to soybean p hytop h tho ra roo t ro t disease殺菌劑Fungicide出苗率(%Seedling rate出

13、苗后死亡率(%M o rtality ofseedling病級D iseaseseverity防治效果(%Con tro lefficiency空白對照Con tro l96.670-2.3大豆疫霉菌分離物對甲霜靈錳鋅的敏感性測定分別來自于黑龍江省佳木斯、牡丹江、穆林、賓縣、安徽蒙城和美國的15個菌株對甲霜靈錳鋅的敏感性(見表3。結果表明:菌株間對甲霜靈錳鋅敏感性存在差異,其EC50值范圍在1.28652.3739g mL,平均值為1.8302g mL,EC95值在12.693042.1161g mL,平均值為27.4046g mL。來自于蒙城的PM C1菌株具有最高EC50值和EC95值,但

14、與最低值相比僅分別相差約2倍和3倍。另外,菌株間對甲霜靈錳鋅敏感性的高低與來源不具有相關性。因此,所測定菌株均為甲霜靈錳鋅敏感菌株,不存在抗藥性。3討論大豆疫霉菌為土傳病原菌,在大豆的任何生育階段均可造成嚴重危害,這為病害的防治,特別是藥劑防治帶來極大的困難。甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、殺毒礬和霜脲錳鋅在離體條件下對大豆疫霉菌均表現有效,但在活體條件下只有甲霜靈和甲霜靈錳鋅可完全抑制大豆疫霉菌的侵入并保持較長時間的藥效,安克錳鋅和殺毒礬不能抑制大豆疫霉菌的侵入,其藥效期較短。在美國和加拿大,已有應用甲霜靈防治大豆疫霉根腐病的報道,在播種時溝施甲霜靈能24農藥學學報1999年表3大豆疫霉菌分離

15、物對甲霜靈錳鋅的敏感性T ab le 3T he sen sitivity of hyp hal grow th of iso lates of P hy top h thora sojae to m etalaxyl 2M Z分離物Iso late來源Sou rce 抑菌回歸方程Inh ib ito ry equati on EC 50 g mL -195%置信度95%fiducial li m itEC 95 g mL -1PSJ 141-1黑龍江佳木斯PS M 2黑龍江290農場6-2黑龍江牡丹江16-1黑龍江穆林P M C 2U SA 2R 1美國y =4.6994+1.4510x1.

16、61131.27842.001921.9145U SA減輕感病品種的損失4,7。但是,甲霜靈為高抗藥性風險藥劑,許多疫霉菌已產生對甲霜靈的抗藥性8。自然條件下大豆疫霉菌便存在對甲霜靈具有高耐藥性的菌株,應用甲霜靈防病可能選擇自然耐藥性菌株,導致抗藥性群體產生9。事實上美國大豆疫霉菌菌株已產生對甲霜靈的耐藥性10。在我國,李寶篤等研究了大豆疫霉菌對甲霜靈的敏感性和變異性,未發現對甲霜靈具有耐藥性的菌株10。在本研究中我們也未發現對甲霜靈錳鋅具有耐藥性的菌株。因此,為了控制大豆疫霉根腐病在黑龍江省的危害,在目前大豆疫霉菌生理小種分布不明確和抗病品種還無法立即推廣的情況下,可以首選甲霜靈錳鋅進行病害

17、防治。應用甲霜靈錳鋅可以降低甲霜靈的用量,能延緩大豆疫霉菌對甲霜靈抗藥性的產生,同時兼治大豆其他根腐病及種子病害。安克錳鋅為卵菌低抗藥性風險藥劑,改變應用方法如采用種衣劑延長其藥效期,用于防治大34第3期朱振東等:防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選44 農藥學學報 1999 年 豆疫霉根腐病具有一定的前景。 參考文獻 1沈崇堯, 蘇彥純, 植物病理學報, 1991, 21 ( 4 : 298 2韓曉增, 何志鴻, 張增敏, 大豆通報, 1998, ( 6 : 5 6 3 ao Y. , T yler B. M. , F ung a l Genetics and B iology , 1996 , 2

18、0 : 43 51 M 4Schm itthenner A. F. , P lan t D isease , 1995, 69: 362 368 5Zhu Z. D. , W ang X. M. , S oy bean Genetics N ew sletter, 1998, 25: 52 53 6 a lker A. K. , Schm itthenner A. F. , C rop S cience, 1994, 24: 487 489 W 7A nderson T. R. , B uzzell R. I , P lan t D isease, 1982. 66 ( 12 : 1144 1

19、145 . 8王文橋, 劉國容, 植物病理學報, 1996, 26 ( 4 : 294 296 9H unger R. M. , H amm P. B. , Ho rner C. E. et a l. , P lan t D isease, 1982, 66 ( 8 : 645 649 10 李寶篤, 彭友付, 沈崇堯, 植物病理學, 1995, 25 ( 1 : 23 27 SCREEN ING O F FUNG IC I ES FO R CO NTROLL ING D PHY TO PHTHO RA ROO T RO T O F SOY BEAN Zhu Zhendong ang X ia

20、om ing T ian Yu lan u X iaofei W W ( In stitu te of C rop Germ p lasm R esou rces, CAA S, Beijing 100081 AbstractEffect of 8 system ic fung icides on g row th of P hy top h thora sojae w a s investiga ted in v itro. Am ong the tested chem ica ls, seven of them effectively inh ib it the g ro th of P.

21、 sojae excep t p rop am oca rb hyd roch lo 2 longer; In add ition d i ethom o rp h m ancozeb, oxad ixyl m ancozeb and p rop am oca rb hyd roch lo ride had better m to P hy top h thora soybean cu ltiva rs a re no t ava ilab le, app lying m eta laxyl m ancozeb to con tro l th is d isea se m ay ride. T he EC 50 va lues fo r inh ib ition of m ycelia l g row th by m eta laxyl, d i ethom o rp h m ancozeb, m eta laxyl m m ancozeb, oxad ixyl m ancozeb, cym oxan il m ancozeb, cu rza te2 8 w ere 0. 4870 g mL , 1. 4261 g mL , M be an a lterna tive and effective w ay. Key wordsSoybean; Phytop h tho ra r