1、黃芪對早期糖尿病大鼠心肌組織一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性【摘要】 目的探討黃芪對糖尿病大鼠心肌組織一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合成酶（NOS）活性的影響。方法正常大鼠、糖尿病大鼠及高、低劑量黃芪(10，8gkg-1d-1)8周的糖尿病大鼠各10只，分別測定各組大鼠血清乳酸脫氫酶（LDH），肌酸激酶（CK）含量及心肌組織一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合成酶（NOS）活性。結果第8周末終止實驗時，糖尿病大鼠血清LDH，CK水平和心肌NO含量及NOS活性均明顯高于正常組(P0.01)；黃芪治療組血清LDH，CK和心肌NO含量及NOS活性均明顯低于糖尿病組(P0.01)，但高于正常組(P0.01

2、或P0.05)。黃芪高、低劑量組間在血清LDH水平、心肌NO含量上有明顯差異(P0.05)。結論黃芪可提高心肌組織NO含量和NOS活性，對糖尿病大鼠心肌具有保護作用。 【關鍵詞】 黃芪； 糖尿病； 心肌病； 一氧化氮； 一氧化氮合酶Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of astragalus on NO content and NOS activity in myocardial tissue in diabetic rats. MethodsForty male wistar rats were randomly divided int

3、o four groups: normal control group (NC), diabetic group (DM), astragalus high doses group (AS2 ，10gkg -1d-1) and astragalus low doses group (AS1, 8gkg -1d-1). At the end of 8 weeks ,the rats were killed. Serum lactate dehydrogenase(LDH) and creatine kinase(CK) were measured . Content of nitric oxid

4、e (NO) and activity of nitric oxide synthase(NOS) in myocardial tissues were tested. ResultsLDH and CK levels of serum ,content of NO and activity of NOS in myocardial tissues of diabetic rats were significantly higher than those of normal controls (P0.01). After 8 weeks of treatment, LDH and CK lev

5、els of serum ,content of NO and activity of NOS in myocardial tissues of astragalus groups were greatly lower than those of diabetic rats,but higher than normal controls (P0.01 or P0.05). There was significant difference in level of LDH, content of NO between AS1 and AS2. ConclusionAstragalus can de

6、crease NO content and NOS activity in heart of diabetic rats and has protective effect on diabetic rats.Key words：Astragalus; Diabetes; Cardiomyopathy; Nitric oxide; Nitric oxide synthase 糖尿病(DM)并發癥是導致糖尿病死亡的主要原因。近年來研究表明， DM及其并發癥發生過程中出現的多種臟器損害，常與一氧化氮（NO）代謝異常有關1。糖尿病性心肌病（diabetic cardiomyopathy，DC）的發生機

7、制目前仍不清楚。可能與心肌細胞糖代謝障礙、脂質過氧化反應增強、一氧化氮（NO）代謝異常、胞膜完整性受損和Ca2+轉運機制異常等有關2。馬善峰等3發現DM大鼠心肌NO含量及NOS活性降低；陳國榮等4發現DM大鼠心肌NO含量明顯增高、心肌NOS(iNOS)表達明顯較正常組增強。本研究探討糖尿病早期大鼠心肌NO含量和NOS活性的變化及黃芪對上述指標的影響。1 器材1.1 動物 Wistar大鼠，雄性，體重180200g，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。1.2 試劑與藥品 鏈脲佐菌素（Streptozotocin STZ）美國Sigma公司生產； LDH，CK試劑盒，上海科華公司生產； NO

8、測試盒、NOS試劑盒、蛋白試劑盒(考馬斯亮藍法)均購自南京建成生物工程研究所。黃芪注射液，神威藥業有限公司生產。1.3 儀器 日立7080型全自動生化分析儀；TU-1901型紫外分光光度計，北京普析通用儀器公司。2 方法 大鼠適應性飼養1周后，10只作為正常對照組，其余用于造模。2.1 糖尿病動物模型的制作 造模動物禁食12 h后，以鏈脲佐菌素（用前以0.1 mol/L檸檬酸鹽緩沖液，冰浴新鮮配制，pH4.5）55 mg/kg一次性腹腔注射。穩定3 d后尾靜脈采血測定血糖，以血糖大于16.6 mmol/L者為糖尿病模型動物。2.2 實驗分組及處理 正常(NC)組（n=10）動物按“2.1”項方

9、法操作，但以等容積緩沖液代替STZ進行注射。造模成功大鼠隨機分為3組（每組10只）：糖尿病對照(DM)組、黃芪低劑量組(AS1組)、黃芪高劑量組(AS2組)。每組各分兩籠飼養，固定飼料，自由飲水。AS1，AS2組，于每天17：00分別按8，10 gkg-1d-1灌胃給藥；每周稱重，調整給藥量。持續給藥8周。1 2.3 標本收集與檢測 于第8周末禁食12 h后，稱重， 10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射，麻醉動物，打開胸腔，左心室采血約5 ml，用于血清LDH及CK活性的測定；迅速取出心臟，在冰生理鹽水中取心肌組織，制備10%勻漿，取上清液作心肌NO含量、NOS活性和心肌組織勻漿蛋白含量測定。測

10、定時按說明書要求操作。2.4 統計學處理 數據以s表示，采用SPSS10.0軟件包對數據進行方差分析，組間比較，方差齊者用LSD檢驗， 方差不齊者用Dunnett T3檢驗。3 結果3.1 各組大鼠血清乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的變化DM組大鼠血清LDH，CK明顯高于NC組(P0.01），經高、低劑量AS后明顯降低(P0.01），但仍明顯高于NC組(P0.010.05）。組間比較在LDH水平上AS1、AS2組間有顯著差異(P0.05)。AS2組優于AS1組，見表1。3.2 各組大鼠心肌組織NO含量及NOS活性的變化實驗結果表明，DM組大鼠心肌組織NO含量及NOS活性比NC組明顯增高

11、(P0.01) ，經高、低劑量黃芪治療后明顯低于糖尿病組(P0.01），但仍高于NC組(P0.01或P0.05)。組間比較，在NO含量上AS1，AS2組間有差異(P0.05），AS2組的作用優于AS1組。見表1。表1 各組大鼠血清乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）及心肌組織NO含量、NOS活性的變化（略）與NC組比較，*P0.05，*P0.01；與DM組比較，#P0.01；與AS1組比較，&P0.054 討論 本實驗中，造模大鼠腹腔注射STZ(55 mg/kg) ，3d后測血糖，血糖大于16.6 mmol/L者為糖尿病模型動物。造模成功動物均出現了明顯的多飲、多食、多尿，病程中抽檢DM組大

12、鼠，血糖始終在建模時的高水平波動，未見轉復，故本實驗中，糖尿病模型的建立是成功的。第8周末實驗終止時，發現DM 組大鼠血清的LDH，CK異常，提示已有心肌損傷。 一氧化氮(NO)是機體內的-精氨酸在還原型輔酶(NADPH)、四氫葉酸等輔助因子的存在下，經NO合成酶(NOS)的作用，與O2發生反應而產生的。近年來，隨著對糖尿病研究的深入，發現 NO參與糖尿病的整個病程并起著重要作用。但關于DM大鼠NO含量及NOS活性改變的報道卻不盡相同。本研究結果顯示，DM組大鼠心肌NO含量及NOS活性顯著高于正常對照組，可能與STZ誘導的糖尿病動物模型中，被損傷的胰腺組織作為自身免疫的誘因活化殺傷性巨噬細胞，使其釋放TNF-，IL-1等細胞因子，促使心肌組織NOS活性升高。而過量生成的NO作為重要的免疫介質發揮細胞毒作用，可損傷線粒體、含鐵硫蛋白酶，亦可引起DNA損傷，導致心肌損傷。經黃芪治療8周后，可見NO含量及NOS活性明顯下降，提示黃芪可減輕糖尿病心肌所受NO的損傷。 黃芪是否抑制心肌內iNOS基因表達、對糖尿病早期和后期的作用是否一致等尚需進一步研究。【】 1 金智生,汝亞琴,楚惠媛,等.紅芪多糖對不同病程糖尿病大鼠血清NO、NOS及過氧化脂質的影響J.上海中醫藥雜志,2004,38（6）