1、西安長安醫院 檢 驗 科癌胚抗原  (CEA)測定(化學發光法測定)文件編號：CA-JY-CZ-MY第 二 版 執行日期：2010-1-4共5頁 第1頁  原理 癌胚抗原是一種糖蛋白，由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細胞所合成，屬于非器官特異型腫瘤相關抗原物。適用于結腸癌、肺癌、胃癌的輔助診斷。本檢驗科使用日本東曹AIA-1800型全自動免疫分析儀進行測定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技術(MEIA)。CEA測定利用雙抗體夾心法原理：已包被了抗體的塑料微珠試劑中，加入待測標本后，經溫育，再加入堿性磷酸酶標記的抗體、形成“抗體抗原酶標記抗體復合物”。然后將其轉移到玻璃纖維柱上，用緩

2、沖液洗滌，沒有結合的抗原、酶標抗體被洗掉，結合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜的上方。這時再加入底物：4-甲基傘型酣磷酸鹽(4-Mup)。酶標抗體上的堿性磷酸酶將4-Mup分解,脫磷酸后形成甲基傘型酣(4-Mu)，它在365nm激發光的照射下，發出448nm的熒光，經過熒光讀數儀的記錄、放大，計算出所測物質的含量。2 標本采集與處理2.1原始樣本類型：血清、血漿或全血（應用抗凝劑為肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、隨即尿、24小時尿等)或其他體液(羊水等)。2.2樣本量：根據不同項目樣本量不等（83l-238l）。2.3患者準備：嚴禁使用接受過鼠單克隆抗體診

3、斷或治療的病人樣本，引起體內含有人抗鼠抗體（HAMA），當這些樣品在使用含鼠單克隆抗體分析試劑進行測試時，引起結果升高或降低。2.4樣本采集方法：一般采用靜脈采血。樣本采集要求： 避免過度溶血，必須在無菌體條件下采集； 確保離心速度（10000轉/分鐘）和時間（10分鐘），避免顆粒物質的干擾。避免樣品的反復凍融，溶解后的樣品需低速震蕩或輕輕顛倒混勻已獲得穩定的結果。若樣品中有顆粒物質，紅血球或渾濁物質必須離心使其澄清后再進行測試。2.5樣品的穩定期和保存：上機3小時內完成檢測；2-8標本可保存1-14天；若需長期保存（1年內），必須將血清分離出來，冷凍保存（-10或更冷）。3  &#

4、160;試劑3.1 所有試劑均購自東曹公司 TOSOH相關校準品TOSOH相關校準品1TOSOH相關校準品2 TOSOH樣本稀釋液 TOSOH基質：4-甲基傘形酮酰磷酸TOSOH基質溶解液 TOSOH清洗液TOSOH緩沖液3.2 試劑準備與檢查： 從冰箱中取出1號液（底物液）放入儀器 從冰箱中取出相關測試試劑放入儀器 檢查所有試劑和緩沖液是否在有效期內，超過有效期的試劑不可使用 檢查所有試劑和緩沖液是否足夠檢查所有消耗品（纖維杯或反應杯）是否足夠，廢液或廢物是否清空3.3 試劑保存條件： 試劑盒、標準品、質控品在2-8保存。其他試劑室溫保存。3.4 試劑性能可接受性： 按測定項目資料手冊中質量

5、控制章節所規定內容進行質量控制，結果必須在實驗室規定的可接受范圍內。4   操作步驟   1 開機前檢查 a 察看電源是否正常安全通電 b 推主機下部的前門，打開后檢查洗凈水與分注液的用量是否滿足當日用量廢試樣杯與廢吸嘴是否丟棄2 開機a更換75%酒精，放置基質液b 打開電腦主機及AIA-1800電源, 點擊主業面進入rootc 試樣吸嘴的設置及酶標識試劑，檢體稀釋液的設置，按主機操作版面Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩，將酶標識試劑，檢體稀釋液設置在試劑托架上，將條形碼標識面朝前d 試劑杯的設置，按主機操作版面

6、的Cup Sorter鍵，LED指示燈變為綠色，拉開分類器抽屜將試劑托盤設置在分類器托盤上，將分類器抽屜推到底3 開機日檢4 日檢通過后，進行標本檢測，在樹形菜單上進入界面設置標本檢測項目，Assay鍵點擊開始測定5 測定完畢后，按主機操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩及分類器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質液， 放置75%酒精6 點擊關機，待窗口消失，關閉AIA-1800電源，在關閉電腦及主電源5 質量控制：每批試劑都要使用東曹公司標準品作質量控制，請參見AIA-1800儀器操作手冊。6  結果計算（定量分析）：利用點對

7、點數據產生方法來產生標準曲線，并根據標準曲線機器會自動計算最終樣品濃度；7 報告格式： 各種定量單位通常采用ng/mL 8 參考值： 0-10ng/mL9 臨床意義：癌胚抗原是一種糖蛋白，由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細胞所合成，屬于非器官特異型腫瘤相關抗原物。適用于結腸癌、肺癌、胃癌的輔助診斷。9.1 主要用于對結腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、肝細胞癌、肺癌、乳癌以及甲狀腺髓質癌等患者的臨床監測。9.2 結腸直腸癌患者CEA測定的敏感性高于其他腫瘤標志物故常選CEA。初診時15% DukesA期患者CEA升高，而在C期和D期患者升高率分別達55%和70%。術前CEA升高的患者，無復發期和存活期都較

8、短。10 方法學性能精密度：采用NCCLS中的EPS-T2標準，測WithinRun,BetweenRun,RetweenDay和Total四個方面進行精密度的評價，檢測方案為：測6套以上的血清盤，（每套3個以上的樣品），在3-4個試驗點，每天分兩個時間段，每個樣品做復管（每個樣品累計測80次以上），連續測20天以上，使用一個以上批號試劑和標準曲線。總的CV%值控制在8%以內。正確度（準確度）：采用與東芝原有的商品化試劑或市售的其他經典的商品化試劑（如：HPLC或RIA）進行相關性的比較，回歸方式一般采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear Regression方式，比較