1、哈爾濱學(xué)院本科畢業(yè)論文設(shè)計題目：蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測院系理學(xué)院專 業(yè)化學(xué)年 級2007級姓 名XXX學(xué) 號07052108指導(dǎo)教師XXX職 稱副教授2011年 6月 13 日目 錄摘 要1Abstract2前 言4第一章實驗局部61.1 儀器與試劑6儀器6試劑6 1.2 實驗原理61.3 實驗過程71.3.1溶液的配置71.3.2兩點法殘留農(nóng)藥速測71.3.3數(shù)據(jù)處理和計算公式8第二章 結(jié)果與討論102.1 實驗影響因素102.2 實驗結(jié)果討論10酶抑制劑法的優(yōu)缺點10酶抑制劑法使用過程中應(yīng)注意的幾個問題102.3 分光光度法112.3.1實驗步驟112.3.2結(jié)果計

2、算112.3.3實驗結(jié)果分析122.3.4檢測考前須知122.3.5分光光度法存在的問題探討122.4 兩種方法的討論13第三章 結(jié)論14參考文獻(xiàn)15致 謝16摘 要隨著環(huán)保意識和健康意識的加強，農(nóng)藥殘留危害性越來越受到重視。許多國家制訂了食品中農(nóng)藥殘留限量，加強了關(guān)鍵檢測技術(shù)的研究和應(yīng)用。傳統(tǒng)的檢測技術(shù)如氣相色譜技術(shù)由于檢測本錢高、檢測時間長、不能對蔬菜進(jìn)行有效的產(chǎn)前、產(chǎn)中、產(chǎn)后監(jiān)督管理。為了有效地快速監(jiān)督管理農(nóng)藥殘留的直接危害，農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)非常重要1。近幾年，在各個領(lǐng)域展開了農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)研究，快速檢測技術(shù)突飛猛進(jìn)。目前研究和應(yīng)用較多的快速檢測技術(shù)主要有活體檢測法、化學(xué)檢測法

3、、酶抑制法、免疫分析法、儀器分析法等2。中國的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測尚處于起步階段，檢測方法標(biāo)準(zhǔn)的制定工作還滯后于農(nóng)產(chǎn)品市場開展的需要。今后應(yīng)加快檢測標(biāo)準(zhǔn)的制定，盡快研究出適合中國國情的多殘留檢測方法，加強技術(shù)培訓(xùn)，并以較低的本錢普及到生產(chǎn)和銷售領(lǐng)域中去，為提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量做出應(yīng)有的奉獻(xiàn)。本文研究的是根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中參加生化反響底物碘化乙酰硫代膽堿和乙酰膽堿酯酶，如果蔬菜不含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留或殘留量低，酶的活性就不被抑制，實驗中參加的底物就能被酶水解，水解產(chǎn)物與參加的顯色劑反響產(chǎn)生黃色物質(zhì)。如果蔬菜的提取液含有農(nóng)藥并殘留量較高時，

4、酶的活性被抑制，底物就不被水解，當(dāng)參加顯色劑時就不顯色或顏色變化很小3。用分光光度計在412nm處或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀測定吸光值，根據(jù)計算出的抑制率，就可以判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的情況。關(guān)鍵詞：有機磷；氨基甲酸酯；分光光度法；酶抑制劑AbstractWith the enhancement of environmental protection consciousness and health consciousness, pesticide residue harmfulness has attracted the attention of people . Many c

5、ountries have drawn up the pesticide residue limit in food and have strengthened the research and application of key measurement technique. Traditional measurement technique such as gas chromatography technology cant give supervision and management to vegetable effectively before, during or after pr

6、oduction because of high cost and long test time. In order to supervise and manage the immediate harm of pesticide residues effectively, rapid measurement technique of pesticide residue is very important 1. In recent years, the research of rapid measurement technique of pesticide residue was develop

7、ed in all areas ,and rapid measurement technique was improved by leaps and bounds. At present ,main rapid measurement techniques include in vivo detection method, chemical detection method, enzyme inhibition method, immune analysis method and instrument analysis 2. The detection of Chinas agricultur

8、al products pesticide residue is in initial stage and the establishiment of detection method standard still lags behind the needs of the development of the agricultural product market. We should speed up the establishiment of detection standard , and excogitate detection method suitable for Chinas n

9、ational conditions, strengthening residue and popularize detection method to areas of production and sales at lower cost ,in order to improve the quality of agricultural products to make due contributions. In this paper, according to the principle that organophosphor and carbamate pesticide can rest

10、rain the activity of acetylcholine esterase, such biochemical reactions substrates as iodinated acetyl sulfur choline and acetylcholine esterase were added to abstraction solution of vegetables, if vegetables didnt contain organophosphor and carbamate pesticide residues or low residual, the enzyme a

11、ctivity would not be restrained, the substrate in experiment could be hydrolyzed by the enzyme, hydrolysate and chromogenic agent produced yellow substance.If the abstraction solution of vegetables contained high pesticide residues, the activity of enzymes was restrained, substrate would not be hydr

12、olyzed, The solution didnt show color or color change was very little, when chromogenic agent was added 3. Using spectrophotometer in 412 nm place or rapid detecting instrument of pesticides, absorption values were measured.According to the calculated inhibition rate, we could judge the residual amo

13、unt of organophosphor and carbamate pesticide in vegetables .Keywords: organophosphor；carbamic acid ester; spectrophotometric method; enzyme inhibito前 言目前農(nóng)藥殘留的化學(xué)快速檢測技術(shù)研究主要是根據(jù)有機磷農(nóng)藥的氧化復(fù)原特性。 有機磷農(nóng)藥磷酸酯、二硫代酸酯、磷酰胺在金屬催化劑作用下水解為磷酸與醇,水解產(chǎn)物與檢測液反響使檢測液的紫紅色褪去變成無色。本方法的特點是防止了使用酶的不穩(wěn)定、不易保存，但該方法局限于有機磷靈敏度不高、易受一些復(fù)原性物質(zhì)干擾3。

14、酶抑制技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)方面的研究進(jìn)展中。酶抑制技術(shù)是研究比擬成熟、應(yīng)用最廣泛快速的農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)；是根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的特異性生化反響建立起來的農(nóng)藥殘留的微量和痕量快速檢測技術(shù)2。國內(nèi)外近幾年對選用酶的種類、底物和檢測方法做了大量的研究。碘代硫化乙酰膽堿為底物，二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氫鈉為顯色劑，根據(jù)顏色的變化測定酶的活性。有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制了的活性， 引起碘代硫化乙酰膽堿不能水解，造成積累，利用碘代硫化乙酰膽堿與二硫代二硝基苯甲酸反響生成黃色的巰基硝基苯甲酸。從而測定其吸光度即抑制率確定酶的活性根據(jù)酶的活性估算農(nóng)藥殘留量4。目前國內(nèi)大多農(nóng)藥速測

15、儀都是利用顏色的變化“吸光度原理研究設(shè)計的。如福建省測試技術(shù)研究所研制出便攜式農(nóng)藥殘留速測儀用于農(nóng)藥殘留的檢測；農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所設(shè)計的農(nóng)藥速測儀；廈門歐達(dá)科儀公司生產(chǎn)的速測儀；上海光電技術(shù)研究所設(shè)計的農(nóng)藥殘留儀等1。不同公司研制的儀器大同小異，只是在酶和底物應(yīng)用方面存在細(xì)微的區(qū)別，從而判定的抑制率也存在差異5。農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所選用的是丁酰膽堿酯酶；上海光電技術(shù)研究所和廈門歐達(dá)科儀公司等選用乙酰膽堿酯酶。氯化乙酰膽堿在膽堿酯酶作用下產(chǎn)生酸根據(jù)顏色的變化測定酶的活性6。當(dāng)有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在時酶的活性受到抑制，氯化乙酰膽堿在膽堿酯酶作用下產(chǎn)生的乙酸量也相應(yīng)減少，影響吸光度值，通過測定吸

16、光度的變化測定乙酰膽堿酯酶受抑制的程度，從而檢測出蔬菜中農(nóng)藥殘留量3。植物酯酶水解二氯乙酰錠酚，根據(jù)反響溶液反響前后顏色的變化測定酶的活性，酶可以催化二氯乙酰錠酚分解產(chǎn)生蘭色靛酚。當(dāng)有機磷農(nóng)藥存在時，抑制了酶的活性導(dǎo)致樣品溶液呈淺蘭色或橙色不變7。根據(jù)與對照溶液比擬確定樣品中是否含有有機磷農(nóng)藥。浙江、廣州、深圳等地研制出乙酰膽堿酯酶速測卡、速測箱用于定性檢測大多是根據(jù)酶催化二氯乙酰錠酚產(chǎn)生蘭色靛酚的量進(jìn)行比色確定抑制率1。其它的技術(shù)還有如乙酰萘酯為底物的等原理的速測技術(shù)。酶制技術(shù)檢測農(nóng)藥殘留操作簡便、快速、靈敏、經(jīng)濟、樣品無需凈化，但是此方法不能定性定量，在檢測韭菜、生姜、蔥、蒜、香菜、胡蘿卜

17、、辣椒、西紅柿等蔬菜容易受到干擾，只能作為有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的初篩8。隨著研究的深入，酶抑制技術(shù)檢測農(nóng)藥殘留在檢測方法上也有較大的突破。除檢測時間在市場應(yīng)用前景廣闊；免疫分析技術(shù)在農(nóng)藥殘留快速檢測方面的進(jìn)展；免疫分析技術(shù)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)方面的有放射免疫分析和酶免疫分析。目前酶免疫分析技術(shù)尤其是酶聯(lián)免疫分析在農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用研究在國外非常活潑，應(yīng)用也日趨普遍，酶免疫技術(shù)分析主要是基于抗原和抗體特異性識別和結(jié)合反響的分析方法。大分子量的農(nóng)藥可以直接作為抗原免疫動物產(chǎn)生抗體，小分子量的農(nóng)藥屬于半抗原， 一般不具有免疫原性不能直接免疫動物產(chǎn)生抗體，因而小分子量的農(nóng)藥一般要與分子量大

18、的載體偶聯(lián)制備人工抗原以檢測技術(shù)9,10。本文采用酶抑制劑法進(jìn)行蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測。因此有兩種儀器可供選擇，常用的儀器是分光光度計，另一種為食品平安快速檢測儀。由于本實驗側(cè)重的是快速，所以主要采取食品平安速測儀，采取兩點法殘留農(nóng)藥速測。國內(nèi)目前非常流行的殘留農(nóng)藥速測方法，通過測定3分鐘前后的對照和樣品溶液吸光度變化值計算抑制率。但本文中也會對分光光度儀的檢測方法進(jìn)行介紹。本文試驗中樣本為食堂中學(xué)生常吃的麻辣燙中所用蔬菜中的五種，看看我們身邊的蔬菜是不是可以放心的食用。第一章 實驗局部 儀器與試劑儀器儀器名稱儀器名稱生產(chǎn)廠家OPTIZEN 2120V-F 食品平安快速檢測儀

19、韓國美卡希斯公司UV-2550 分光光度儀日本島津公司 試劑試劑名稱等級成產(chǎn)廠家無水磷酸氫二鉀分析純北京紅星化工廠磷酸二氫鈉分析純天津石英鐘長霸州市化工分廠碳酸氫鈉化學(xué)純北京化工廠乙酰膽堿酯酶化學(xué)純韓國美卡希斯公司碘化乙酰硫代膽堿化學(xué)純韓國美卡希斯公司二硫代二硝基苯甲酸化學(xué)純韓國美卡希斯公司1.2 實驗原理根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中參加生化反響底物碘化乙酰硫代膽堿和乙酰膽堿酯酶，如果蔬菜不含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留或殘留量低，酶的活性就不被抑制，實驗中參加的底物就能被酶水解，水解產(chǎn)物與參加的顯色劑反響產(chǎn)生黃色物質(zhì)。如果蔬菜的提取液含有農(nóng)藥并殘

20、留量較高時，酶的活性被抑制，底物就不被水解，當(dāng)參加顯色劑時就不顯色或顏色變化很小。用分光光度計在412nm處或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀測定吸光值，根據(jù)計算出的抑制率，就可以判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的情況。1.3 實驗裝置與過程1.3.1溶液的配制(1) 分別稱取無水磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀，溶解于250 mL蒸餾水中。(2) 乙酰膽堿酯酶實驗專用酶 根據(jù)酶活力用緩沖溶液溶解，3 min的吸光值變化A0值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后在05冰箱中保存，保存期不超過4天。(3) 底物碘化乙酰硫代膽堿 稱取25.0 mg碘化乙酰硫代膽堿，用3.0 mL緩沖溶液溶解，在05下保存。保存期不超過2

21、周。(4) 顯色劑 分別稱取160 mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6 mg碳酸氫鈉，用20 mL緩沖溶液溶解，4冰箱保存。1.3.2兩點法殘留農(nóng)藥速測本實驗所用儀器有三種檢測農(nóng)藥殘留的方法，分別為終點法、兩點法和動力學(xué)法。終點法是酶抑制劑初期常用的方法，兩點法是現(xiàn)在國內(nèi)常用方法，動力學(xué)法是國外常用方法。所以本實驗采用兩點法。(1) 樣品處理選取有代表性的蔬菜樣品5種，去掉不可食局部后稱取蔬菜試樣，沖洗掉外表泥土，剪成1 cm左右碎片。取樣品1 g，放入燒杯或提取瓶中，參加5 mL緩沖液，振蕩12 min，倒出提取液，靜置3-5 min，待用。(2) 空白溶液 先于小燒杯中參加2.5 mL緩沖液

22、，再參加0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 放置15 min以上每批樣品的控制時間應(yīng)一致。放入比色皿中，記錄反響3 min的吸光度的變化值。(3) 對照溶液 先于試管中參加2.5 mL緩沖液，再參加0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 放置15 min以上。參加0.1 mL低物搖勻，此時檢液開始顯色反響，應(yīng)立即放入比色皿中，記錄反響3 min的吸光度的變化值A(chǔ)0。 (4) 樣品溶液先于試管中參加2.5 mL樣品提取液，再參加0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 放置15 min以上。參加0.1 mL低物搖勻，立即放入比色皿中，記錄反響3 min的吸光度的變化值。1.3

23、.3 數(shù)據(jù)處理和計算公式(1) 蔬菜樣品編號23456樣品菠菜大頭菜白菜生菜油菜 (2) 數(shù)據(jù)兩點法NOC#ABS1ABS2ABSInhibPass120230340450560Pass為0表示農(nóng)好藥殘留量合格不過量，為表示農(nóng)藥殘留量不合格過量。(3) 計算公式ABS對照= ABS3分鐘后對照 ABS3分鐘前對照ABS樣品= ABS3分鐘后樣品 ABS3分鐘前樣品抑制率 = ABS對照 ABS樣品ABS對照 100(4) 局部農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn) (表1 農(nóng)藥濃度與抑制率對照表)甲胺磷濃度(g/ml)抑制率氧樂果濃度(g/ml)抑制率敵百蟲濃度(g/ml)抑制率呋喃丹濃度(g/ml)抑制率(表2

24、國內(nèi)外農(nóng)藥殘留量最高限量標(biāo)準(zhǔn))有機磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥甲胺磷氧樂果甲萘威敵百蟲WHO/FAO的規(guī)定每日每公斤體重允許攝入量(ADI)ug/Kgbw41010EPA規(guī)定每日每公斤參照攝入量(RfD) mgKg5毒性(雄性大鼠經(jīng)口LD50)mgKg203050814560國外每人每天實際攝入量ug /60Kg國內(nèi)每人每天實際攝入量ug /60KgFAO 規(guī)定蔬菜農(nóng)藥殘留量允許限量(MRL)mgKg0.51國內(nèi)規(guī)定蔬菜農(nóng)藥殘留量允許限量(MRL)mgKg(中華人民共和國衛(wèi)生部、中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會 發(fā)布) 第二章 結(jié)果與討論 實驗影響因素本實驗采取的是兩點法殘留農(nóng)藥速測，實驗結(jié)果五個樣品均達(dá)標(biāo)。

25、蔬菜上有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶抑制法最關(guān)鍵的影響因素是酶。當(dāng)溫度條件低于37 ，酶反響的速度隨之放慢，參加酶液和顯色劑后放置反響的時間應(yīng)相對延長，延長時間確實定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3 min的吸光度變化ABS值在03以上，然后往下操作。試樣放置時間應(yīng)與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對照溶液3 min的吸光度變化ABS 值03的原因，一是酶的活性不夠，二是溫度太低。當(dāng)試樣溶液的吸光度大到無法讀取時，說明測定液渾濁，應(yīng)改變提取條件排除干擾后測定。 實驗結(jié)果討論酶抑制劑法的優(yōu)缺點：(1) 優(yōu)點：在于簡單方便，快捷、本錢低廉。整個檢測過程只需30分鐘左右，它可以作為傳統(tǒng)

26、儀器分析方法的有益補充，針對市場、農(nóng)場蔬菜農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速篩選監(jiān)測，保證上市蔬菜食用的相對平安性。 (2) 缺點：酶試劑易失活，導(dǎo)致反響不穩(wěn)定，檢測結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實際應(yīng)用中確實認(rèn)率大約為60%70%左右；存在檢測盲區(qū)，只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽性的農(nóng)產(chǎn)品；需要對檢測人員進(jìn)行專門培訓(xùn)，否那么將會對出現(xiàn)的問題無法正確處理或判斷，得出錯誤的結(jié)果。酶抑制劑法使用過程中應(yīng)注意的幾個問題 (1) 檢測室溫度在2030之間時，使用改良后的酶，此時不用放在3738

27、的保溫箱中培養(yǎng)，可以直接在室溫下培養(yǎng)，22左右培養(yǎng)20分鐘，25以上培養(yǎng)15分鐘，一旦室溫低于20，必須進(jìn)3738保溫箱培養(yǎng)。 (2) 樣品處理時，參加提取試劑混合后不用倒出上層清液，直接在原器皿中靜置3-5分鐘。(3) 配置檢測液時，用圓底小試管代替儀器配置的平底小試管，方便在樣本混合器上混合。 (4) 于待測液中參加底物混合后，要快速轉(zhuǎn)移到比色杯中進(jìn)行比色，否那么容易影響檢測結(jié)果。(5) 速測儀法是使用分光光度計測定待測液吸光值隨時間的變化而計算檢測結(jié)果的，因此保持比色杯的清潔也是一個減少檢測誤差的環(huán)節(jié)。經(jīng)摸索，我們發(fā)現(xiàn)用熱水浸泡和用洗衣粉清洗比色杯比擬容易洗干凈。 分光光度法 分光光度儀

28、與食品平安快速測儀檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的操作根本相同，實驗原理與溶液配制根本相同，實驗步驟和計算公式稍有不同。由于分光光度法是以往常用的檢測手段所以在這里就不進(jìn)行從實驗了，僅列出此種方法進(jìn)行簡單的介紹和與速測儀進(jìn)行比擬。實驗步驟 (1) 樣品處理 選取有代表性的蔬菜樣品，去掉不可食局部后稱取蔬菜試樣，沖洗掉外表泥土，剪成1 cm左右碎片。取樣品1 g，放入燒杯或提取瓶中，參加5 mL緩沖液，振蕩12 min，倒出提取液，靜置35 min，待用。 (2) 對照溶液測試 先于試管中參加2.5 mL緩沖液，再參加0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 放置15 min以上每批樣品的控制時間

29、應(yīng)一致。參加0.1 mL低物搖勻，此時檢液開始顯色反響，應(yīng)立即放入比色皿中，記錄反響3 min的吸光度的變化值A(chǔ)0。 (3) 樣品溶液測定先于試管中參加2.5 mL樣品提取液，其他操作與對照測定相同，記錄反響3 min的吸光度的變化值A(chǔ)t。結(jié)果計算 抑制率%= 式中 A0對照液反響3 min吸光度的變化值； At樣品溶液反響3 min吸光度的變化值。(表3 酶抑制率法對局部農(nóng)藥的檢出限 mgkg)農(nóng)藥名稱檢出限農(nóng)藥名稱檢出限敵敵畏氧化樂果對硫磷甲基異柳磷辛硫磷滅多威甲胺磷丁硫克百威馬拉硫磷敵百蟲樂果呋喃丹實驗結(jié)果分析當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率大于50% 時，表示樣品中有高劑量的有機磷或氨基甲

30、酸酯類農(nóng)藥殘留，可判定樣品為陽性結(jié)果，對檢驗結(jié)果陽性的樣品需重復(fù)檢驗兩次以上。藥殘檢測結(jié)果根據(jù)酶抑制率的藥殘檢測數(shù)值，進(jìn)一步判斷抽檢的蔬菜樣品是否合格。大于或等于70%10視為不合格蔬菜至少重復(fù)兩次。檢測考前須知(1) 對照組必須在A組中測出結(jié)果。并以此作為參考值。(2) 化學(xué)試劑配制無比精確，應(yīng)在7天內(nèi)用完試劑，以保證其準(zhǔn)確性。(3) 在操作過程中，要按對照、樣品1、2、3、4的順序。依次進(jìn)行酶顯示劑和底物的添加。假設(shè)順序顛倒，那么檢測結(jié)果不夠準(zhǔn)確。(4) 比色皿用后用蒸餾水徹底清洗干凈，以免影響透光率。(5) 酶液不要用干凈，因為底液的活性會明顯降低。分光光度法存在問題的探討(1) 假陽性

31、的產(chǎn)生不同植物的組織液、次生物質(zhì)、葉綠體、花青素等能與底物或顯色劑其反響，蛋白質(zhì)、氨基酸、電解質(zhì)等生物化質(zhì)也會干擾影響酶反響，也能改變光波的吸光度、透光率，影響測定結(jié)果。(2) 抑制率出現(xiàn)負(fù)值結(jié)果中抑制率偶爾出現(xiàn)負(fù)值，這是指在計算中樣本的吸光度變化值比空白的吸光度變化值要大。造成這一現(xiàn)象的原因：一是操作中的系統(tǒng)錯誤，從吸光值變化動態(tài)曲線可以看出，酶分解底物、分解物在與顯色劑結(jié)合，這樣的動力學(xué)過程盡心的是非常快的，如果操作中不夠熟練就會產(chǎn)生人為的系統(tǒng)誤差。另外，同一種蔬菜，由于不同次重復(fù)提取時所取蔬菜樣本的部位不同，這種較小的負(fù)值誤差10%以下是在允許范圍之內(nèi)，可以認(rèn)為這種情況下的樣本中無農(nóng)藥檢

32、出。 兩種方法的討論 分光光度計與食品平安速測儀(以下簡稱速測儀)同樣是利用酶抑制劑原理進(jìn)行測定蔬菜中農(nóng)藥含量。但分光光度計測定的是絕對值而速測儀測定的是相對值。分光光度計是實驗室中相對常用的儀器而速測儀適合野外作業(yè)。分光光度計的檢測速度慢，速測儀顧名思義檢測速度快，是專門針對野外作業(yè)而設(shè)計的檢測儀器。第三章 結(jié) 論 本實驗選取的五個樣品中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量均已達(dá)標(biāo)。多年來，蔬菜中農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題一直較突出，原因之一是現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測定需要通過有機溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進(jìn)行。無法對廉價的蔬菜進(jìn)行隨時隨地的快速檢測。為解決這一問題，我們對使用范圍廣、用量大的有機磷和氨

33、基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法進(jìn)行了研究，建立了這種標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法，不受時間、地點、場合等條件限制，從樣品處理到得出結(jié)果l530 min內(nèi)完成，如果附加恒溫裝置，一次可完成多個樣品。酶抑制率法的檢出限與抑制率由于酶源的不同，檢出限(最低檢出濃度)與抑制率往往不同。丁酰膽堿酯酶的抑制率一般控制在70 以上為陽性樣品。乙酰膽堿酯酶的抑制率一般控制在50以上為陽性樣品。衡量的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該用檢出限與符合率來判斷，即檢出限不能太高，太高容易使一些農(nóng)藥超標(biāo)的蔬菜檢測不出來，太低容易出現(xiàn)假陽性。附錄(表1)列出了用乙酰膽堿酯酶試驗得出的局部農(nóng)藥的檢出限和抑制率。這種方法的建立，可在監(jiān)督環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，有利于及時發(fā)現(xiàn)問

34、題、采取措施，控制高殘留農(nóng)藥蔬菜的攝人，降低農(nóng)藥中毒發(fā)生率，保障消費者食菜平安。參考文獻(xiàn)1 李艷霞, 張保東. 農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的研究J. 周口師范學(xué)院學(xué)報,2005, 22(5): 79-82.2 HOLGER S, SANDRA V, FRANCOIS V, et al. Design ofacetylcholinesterases for biosensor applicationsJ. Biosensors andBioelectronics, 2003, 18: 201-209.3 LAROSA C, PARIENTE F, HERNANDDEZ L, et al. Amperome

35、tricflowthroughbiosensor for the determination of pesticidesJ. Anal ChimActa, 1995, 308: 129-136.4 陸貽通, 周培, 李振紅. 生物酶技術(shù)在農(nóng)藥殘留快速檢測中的應(yīng)用進(jìn)展J. 上海環(huán)境科學(xué), 2001, 20(10): 467-473.5 張寧. 果蔬中有機磷農(nóng)藥殘留快速檢測方法研究J. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005, 33(8): 1471-1472.6 孟范平, 唐學(xué)璽, 李桂芳. 利用乙酞膽堿酯酶傳感器監(jiān)測海水久效磷J. 海洋環(huán)境科學(xué), 2003, 22(4): 63-67.7 郭勝清, 曹樹桂, 馬林. 疏水載體固定化膽堿酯酶的研究J. 生物化學(xué)雜志, 1994, 10(4): 439-442.8 魏福祥, 韓菊, 劉慶洲. 膽堿酯酶生物傳感器測定有機磷農(nóng)藥敵敵畏J. 河北科技大學(xué)學(xué)報, 2003, 24(4): 92-94.9 崔卉, 林朝暉, 張力彬. 一種新的乙酰膽堿酶電極的研究報J. 分析科學(xué)學(xué)報, 1995, 11(4): 7-10.10 韓承輝, 谷巍, 王乃巖. 快速測定水中有機磷農(nóng)藥方法的研究J. 環(huán)境化學(xué), 2000, 19(2): 188.11