1、實驗九 分光光度法測定水樣中鐵的含量一、實驗目的1、了解利用可見分光光度法進行定量分析的原理和方法；2、初步掌握分光光度計的使用方法，學習測繪溶液的吸光度；3、掌握利用標準曲線法進行定量分析的操作與數(shù)據(jù)處理方法。二、實驗原理鄰二氮菲(鄰菲羅啉，phen)和Fe2+在pH為3-9的溶液中，生成一種穩(wěn)定的橙紅色絡(luò)合物Fe(phen) 32+，其lgK=21.3，508=1.1 × 104L·mol-1·cm-1。鄰菲羅啉 + Fe2+ 鄰菲羅啉-Fe2+絡(luò)合物（無色） （橙紅色）鐵含量在0.16g·mL-1范圍內(nèi)遵守Lambert-Beer定律：A= bc=

2、K·c其吸收曲線如下圖所示。鄰菲羅啉-鐵()的吸收曲線顯色前需用鹽酸羥胺或抗壞血酸將Fe3+全部還原為Fe2+，然后再加入鄰二氮菲，并調(diào)節(jié)溶液酸度至適宜的顯色酸度范圍。有關(guān)反應(yīng)如下：2Fe3+2NH2OH·HC12Fe2+N2+2H2O+4H+2Cl-用分光光度法測定物質(zhì)的含量，一般采用標準曲線法，即配制一系列濃度的標準溶液，在實驗條件下依次用分光光度計測量各標準溶液的吸光度(A)，以溶液的濃度為橫坐標，相應(yīng)的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。在同樣實驗條件下，測定待測溶液的吸光度，根據(jù)測得吸光度值從標準曲線上查出相應(yīng)的濃度值，即可計算試樣中被測物質(zhì)的質(zhì)量濃度。 三、實驗儀器與

3、試劑電子天平，容量瓶（25ml×7，或用比色管代替）, 刻度移液管（1ml，2ml，5ml，10ml×2），752 型分光光度計，1 cm玻璃比色皿，滴管；2mmol/L鐵標準溶液，待測含鐵水樣，1.5mol/L鹽酸羥胺溶液，8mmol/L鄰二氮菲溶液，1.0 mol/L醋酸鈉溶液，蒸餾水。四、實驗內(nèi)容與步驟 1、標準Fe2+溶液系列及待測溶液的配制 按表1所示，在編號為1-7的50 mL容量瓶（或比色管）中分別按照表1的數(shù)據(jù)加入鐵標準溶液或待測水樣，然后分別加入1.00 mL 1.5mol/L鹽酸羥胺溶液，搖勻后放置2 min，再各加入2.00 mL 8mmol/L鄰菲羅

4、啉溶液、5.00 mL 1.0 mol/L乙酸鈉溶液，以水稀釋至刻度，搖勻。表1 標準系列溶液和樣品液的配制實驗序號1234567標準Fe2+溶液/ml00.400.801.201.602.000待測水樣/ml00000010.00鹽酸羥胺/ml1.001.001.001.001.001.001.00鄰菲羅啉/ml2.002.002.002.002.002.002.00醋酸鈉/ml2.002.002.002.002.002.002.00V總(稀釋)25.0025.0025.0025.0025.0025.0025.00c稀釋(Fe2+)/mmol·L-12、吸光度A的測定（分光光度計的

5、使用參照后附說明）選擇最大吸收光波長max=510nm為入射光波長，以試劑空白溶液(1號)為參比溶液，用1 cm比色皿作吸收池，在分光光度計上測出所配一系列標準溶液的吸光度。3、標準曲線的測繪在坐標紙上，以鐵標準溶液的濃度為橫坐標，相應(yīng)的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。4、待測含鐵水樣中鐵含量的測定按照同標準曲線系列溶液相同的條件，測量待測水樣的吸光度，由標準曲線計算試樣中鐵的含量。五、實驗注意事項1、分光光度計測量前應(yīng)預熱30min；2、儀器操作應(yīng)在教師指導下進行；3、手拿比色杯的粗糙面；4、本實驗的試劑加入順序不能隨意改變；5、反應(yīng)時間應(yīng)嚴格控制足夠長，保證反應(yīng)完全；6、測定順序是從稀到濃。

6、六、實驗思考討論1、根據(jù)有關(guān)實驗數(shù)據(jù)，計算鄰二氮菲-Fe()絡(luò)合物在選定波長下的摩爾吸收系數(shù)。2、在有關(guān)條件實驗中，均以水為參比，為什么在測繪標準曲線和測定試液時，要以試劑空白溶液為參比?附：722S型可見分光光度計的使用說明一、儀器的基本操作 1、 測定溶液的透射比預熱 設(shè)定波長 置參比樣品和待測樣品 置0%（T） 置100% （T） 選擇透射比操作模式 拉動拉桿，使待測樣品進入光路 記錄測試數(shù)據(jù)2、 測定溶液的吸光度 預熱 30min設(shè)定波長 最大吸收波長max（吸光度值一般選在0.20.7之間)置參比樣品和待測樣品 拿粗糙面、潤2-3次、 裝2/3-3/4 、吸水紙擦干置0%（T） T模

7、式、開蓋或用黑體置100% （T）T模式、參比選擇吸光度操作模式 mode（模式）拉動拉桿，使待測樣品進入光路 記錄測試數(shù)據(jù)二、吸收池的使用吸收池要配對使用，因為相同規(guī)格的吸收池仍有或多或少的差異，致使光通過比色溶液時，吸收情況將有所不同。注意保護吸收池的透光面，拿取時，手指應(yīng)捏住其毛玻璃的兩面，以免沾污或磨損透光面。在已配對的吸收池上，于毛玻璃面上做好記號，使其中一只專置參比溶液，另一只專置試液。同時還應(yīng)注意吸收池放入吸收池槽架時應(yīng)有固定朝向。如果試液是易揮發(fā)的有機溶劑，則應(yīng)加蓋后，放入比色皿槽架上。凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)的溶液，不得長時間盛放在吸收池中。倒入溶液前，應(yīng)先用該溶液淋洗內(nèi)壁三次，倒入量不可過多，以吸收池高度的2/3-3/4為宜。每次使用完畢后，應(yīng)用蒸餾水仔細淋洗，并以吸水性好的軟紙吸干外壁水珠，放回吸收池盒內(nèi)。不