1、姜黃素對肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響        【摘要】  目的觀察姜黃素對肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響。方法四氯化碳加酒精制備大鼠肝纖維化模型，設正常對照組、病理模型組、姜黃素小劑量組、姜黃素中劑量組、姜黃素大劑量組、-干擾素組、復方鱉甲軟肝片組。結束后肝組織作HE染色、膠原纖維染色、網狀纖維染色觀察肝組織纖維化程度；免疫組織化學方法（SABC法）檢測肝組織，型膠原的含量。結果和病理模型組比較，姜黃素大劑量組大鼠、姜黃素中劑量組大鼠SSS計分值明顯降低（P<0.05），肝組織，型膠原含

2、量明顯降低，有顯著性差異（P<0.05）。結論姜黃素能夠降低肝組織，型膠原含量，降解肝組織，型膠原，具有治療肝纖維化的作用。 【關鍵詞】  姜黃素 肝纖維化 大鼠 膠原纖維    Abstract：ObjectiveTo study the effect of Curcumin on the type , and collagens of liver tissues in rats with Liver Fibrosis.MethodsAn animal model of liver fibrosis was made by subcutaneou

3、s injection of carbon tetrachloride and ethanol orally and randomly divided into blank control group, model control group, small curcumin group, middle curcumin group, large Curcumin group, -interferon group and Compound Biejiaruangan Tablet group.The degree of liver fibrosis was detected by H.E. st

4、aining, collagen fibre and reticular fibre staining. The contents of type , and collagens of liver tissues were detected by immunocytochemistry SABC method.ResultsThe results showed that SSS scores in large and middle curcumin group were significantly lower than that of model control group (P0.05),

5、and so did the content of type , and collagens of liver tissues.ConclusionCurcumin can degrade the type , and collagens of liver tissues and promote the recovery of liver fibrosis.    Key words：Curcumin;  Liver fibrosis;  Rats;  Collagen fibre    姜黃素是從姜黃屬

6、中藥中提取的一種酚性色素，近年研究發現具有抗肝纖維化作用。本實驗觀察了姜黃素對肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響，以期了解姜黃素抗肝纖維化的作用機理。    1  材料    1.1  動物   一級SD大鼠96只，雄性，體重（200±20） g，由西安大學醫學院實驗動物中心購進。動物合格證號：醫動字第08-005號。    1.2  藥物及試劑CCl4分析純，西安化學試劑廠生產，批號050124。姜黃素粉，分子式C21H20O6 上海試劑三廠生產

7、，批號050124，25 g/瓶，用0.5%羧甲基纖維素納制成混懸液備用1，濃度分別為10，20，40 mg/ml。羧甲基纖維素鈉：上海山浦化工有限公司生產，500 g/瓶，批號20050118。75%乙醇，500 ml/瓶，陜西祥泰藥業有限公司生產，批號050302。復方鱉甲軟肝片：內蒙古福瑞中蒙藥科技股份有限公司出品，0.5 g/片，生產批號20041204，用蒸餾水溶解62.5 mg/ml備用。注射用重組人-干擾素（IFN-）：麗珠生物工程制藥廠出品，100 萬u/支，生產批號20050201，用注射用水溶為80 u/ml備用。 ，型膠原抗體，均為0.2 ml濃縮性，由武漢博士德生物制品

8、有限公司生產，人民解放軍第四軍醫大學病理教研室提供，批號200510。         2  方法    2.1  動物模型制備2及分組將實驗大鼠適應性喂養1周后，隨機抽取12只作為正常對照組（A組），其余84只大鼠實驗第1天每只皮下注射50%四氯化碳植物油溶液0.5 ml /100 g體重,以后每3天皮下注射50%四氯化碳植物油溶液0.3 ml /100 g體重造模，從造模第2周開始給大鼠用25%酒精灌胃0.5 ml/100 g體重，隔天1次，第6周起，每周末從造

9、模動物中隨機處死1只大鼠作肝纖維化病檢查，按照2000年西安會議病毒性肝炎防治方案肝纖維化分期標準來判斷肝纖維化程度3，直到有2期以上纖維化形成，即確定肝纖維化模型復制成功，造模共12周。造模結束時大鼠死亡5只，將剩余72只大鼠隨機分為6組：病理模型組(B組)、姜黃素小劑量組(C組)、姜黃素中劑量組(D組)、姜黃素大劑量組(E組) 、-干擾素組(F組)、復方鱉甲軟肝片組(G組)，每組12只。    2.2  治療給藥從第13周起開始給藥，A組、B組用生理鹽水灌胃，2 ml/只，1次/d，連續用藥8周；C組以姜黃素100 mg/kg體重灌胃，1次/d，連續

10、用藥8周；D組以姜黃素200 mg/kg體重灌胃4，1次/d，連續用藥8周；E組以姜黃素400 mg/kg體重灌胃，1次/d，連續用藥8周；F組以-干擾素0.2 mu/kg體重肌肉注射，1次/d，連續用藥8周；G組以復方鱉甲軟肝片0.625 g/kg體重灌胃，1次/d，連續用藥8周。各治療組的給藥劑量按成人常用劑量換算所得用量進行實驗2。    2.3  標本的采集與制備5治療結束分別給大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.35 ml/100 g麻醉,頸總動脈取血，2 ml/只，分離血清備檢（肝纖維化血清指標檢測）。與此同時開腹剖取新鮮肝組織左葉，10%甲醛固定

11、，石蠟包埋，連續切片，厚5 m 。    2.4  觀測指標及檢測方法    3  結果    3.1  動物死亡情況  造模結束時，大鼠死亡5只，死亡率為6.5%；治療結束時，A，E，C組大鼠無死亡，死亡率為0；D組和F組各死亡1只，死亡率為8.3%；B，G組大鼠各死亡2只，死亡率為16.7%。    3.2  肝纖維化組織學半定量計分系統（SSS）計分結果與正常對照組比較，病理模型組計分明顯增高（P<0.01），說明

12、造模后肝組織結構發生明顯變化；姜黃素小劑量組與病理模型組無差異（P>0.05）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復方鱉甲軟肝片、-干擾素4個治療組與病理模型組比較SSS計分明顯降低，有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復方鱉甲軟肝片、-干擾素4個治療組之間無差異（P>0.05）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復方鱉甲軟肝片、-干擾素與姜黃素小劑量比較有差異（P<0.05）。見表2。表2  肝纖維化組織學半定量計分系統與正常對照組比較，P<0.01；與病理模型組比較，P<0.05，P<0.01；與姜黃素小劑量

13、組比較，P<0.051             3.3  各組大鼠肝組織，型膠原免疫組織化學指標檢測    4  討論    肝纖維化是由于膠原和其它細胞外基質(ECM)的合成與降解失衡，導致ECM在肝內過量沉積。肝臟受損時，膠原合成逐步增多，降解逐步減少，可導致膠原的大量沉積，此時肝內膠原增加5倍以上，主要為，型膠原明顯增多，其中以型膠原增生最明顯，故檢測，型膠原這3個指標的變化對于了解肝纖維化程度

14、及藥物的治療效果具有重要意義。本實驗研究顯示，姜黃素可以改善肝纖維化時肝組織病結構，可以降低肝組織，型膠原含量，從而能夠促進肝內ECM的降解，因此對肝纖維化的治療有確切的效果；姜黃素在降低肝纖維化大鼠肝組織，型膠原含量及改善肝纖維化時肝組織病理學結構方面，其效果與復方鱉甲軟肝片和-干擾素基本相同；姜黃素對肝纖維化的治療有一定的量效范圍，大劑量、中劑量有確切的效果，小劑量則無治療作用；姜黃素對肝纖維化的治療機理可能與其降解肝組織，型膠原有關。【】  1 尤 紅，王寶恩，馬雪梅.中藥復方861抑制肝星狀細胞NF-kappaB活性的體外研究J.中華肝臟病雜志，2001，1(9)：73.2 施新猷.醫學實驗動物學M.北京：人民軍醫出版社，2000： 335.3 陸倫根，曾民德，萬謨彬，等.肝纖維化病理學分級分期及與非創傷性診斷檢測關系的初步研究J.肝臟，2000，5（4）:194.4 寧 勇，劉曉城.姜黃素對糖尿病大鼠腎臟保護作用機制研究J.湖北中醫學院學報, 200