1、精選優質文檔-傾情為你奉上島津LC-20AT型高效液相色譜儀的圖文操作手冊貯液瓶DGU-20A3真空脫氣機LC-20AT溶液傳輸單元CBM-20A系統控制器SPD-M20A二極管陣列檢測器SIL-20A自動進樣器RF-10AXL熒光檢測器CTO-20A柱溫箱手動進樣器Varian380-LC蒸發光檢測器一、 島津LC-20AT型高效液相色譜儀：島津LC-20AT型高效液相色譜儀二、 功能和用途：1、 功能：本儀器采用高壓梯度通過高壓輸液泵分別獨立精確控制流量、調整溶劑濃度比例，實現高效率、高精度混合；即配備了可提供全波長三維信息的二極管陣列檢測器，全新的光路設計與有效的梯形狹縫池設計保證了高分

2、辨率和高靈敏度；也配備了靈敏度更高、選擇性更好的熒光檢測器；還配備了具有高靈敏度、檢測范圍更廣的蒸發光檢測器。2、 用途：本儀器可以高效地分離分析高沸點、熱不穩定的有機及生化試樣；二極管陣列檢測器對大部分有機化合物有響應；熒光檢測器可以檢測產生熒光的物質，對如多環芳烴、維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應；蒸發光散射檢測器對碳氫化合物、表面活性劑、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和揮發性低于流動相的任何樣品、不含發色團的化合物有響應。三、 操作步驟：1、 色譜柱的安裝本儀器配備了SPD-M20A二極管陣列檢測器、RF-10AXL熒光檢測器和Varian380-LC

3、蒸發光散射檢測器。樣品分析前首先要確定用什么檢測器，然后把色譜柱連接到所需的檢測器上。2、 開機a、 首先打開UPS，然后依次打開DGU-20A3真空脫氣機、LC-20AT溶液傳輸單元（泵）、CBM-20A系統控制器、所選用的檢測器、自動進樣器SIL-20A，CTO-20A柱溫箱電源打開。（HPLC組件的電源開關大都在儀器的右下角）b、 將兩個泵上部中間的黑色旋鈕逆時針旋轉90180度，按purge鍵進行自動脫氣，一般設置為3分鐘；然后按自動進樣器軟鍵盤的purge鍵，對自動進樣器上的樣品進行脫氣，一般為25分鐘。c、 雙擊Lc solution圖標。輸入用戶名Admin，點擊OK。單擊系統配

4、置的圖標，出現系統配置的對話框。單擊自動配置，儀器自動將能找到的儀器配置，也可以用圖示中的藍色和紅色箭頭分別添加和去掉配置的儀器。需要注意的是，儀器優先選擇自動進樣器，如果需要手動進樣，需將自動進樣器去掉。單擊儀器（通訊設置），選擇正確的儀器類型，然后單擊自動獲取IP地址。單擊系統控制器，出現系統控制器的對話框，繼電器的四個選項需要設置為start。d、 單擊儀器開關按鈕，將軟件與儀器連接e、 儀器參數視圖里面，簡單設置里面，模式選擇二元高壓梯度，設置總流速，泵B濃度，時間，柱溫箱溫度，時間程序。然后選擇下載，跑基線。單擊繪圖，可以看查看基線。3、 方法編輯a、下圖中看到儀器參數視圖，選擇高級

5、，然后依次改變其中的參數。如果儀器為PDA檢測器時，則按以下進行設置。數據采集：LC停止時間為0.01。采集時間打勾，結束時間為分析樣品的時間。LC時間程序：如果等度洗脫，則設置如圖中0.01 controller stop。進行梯度洗脫時需要如圖所示進行設置。單擊繪制曲線，可查看梯度曲線。泵：模式選擇二元高壓梯度，設置泵B的濃度。最大壓力根據色譜柱的最大壓力進行設置。PDA：一般同時選擇D2和W等，然后輸入開始和結束時的波長。柱溫箱：設置柱溫箱的溫度。控制器：將四個時間全部打勾。自動進樣器：不需要重新設置。自動排氣：不需要重新設置。方法設置完后，選擇文件，另存為方法文件。當儀器穩定，基線穩定

6、后，可以下載方法，進行樣品的分析。b、如果選擇熒光檢測器，首先需要色譜柱接熒光檢測器，打開熒光檢測器的電源，系統配置自動配置熒光檢測器。儀器參數設置部分檢測器需要輸入激發光和發射光的波長。其他同PDA檢測器。c、4、如果選擇蒸發光檢測器，將色譜柱連接蒸發光散射檢測器。打開Varian-380電源開關，打開Varian ELSD Control軟件方法編輯器單擊Method，出來一對話框，Use my own instrument sett，則可以改變參數，設置新的方法。也可以不打勾，直接選擇已經設置好的方法。儀器開啟時即處于STANDBY模式，加熱塊關閉，霧化氣流速設定為較低的1.2SLM。S

7、tandby模式下用戶可設定儀器參數（霧化氣流速，霧化溫度，蒸發溫度），然后將模式切換至RUN。Run模式是正常工作模式，儀器處于完全設定控制狀態。在加熱或降冷卻程中，儀器會顯示“NOT READY”，表明儀器未達設定條件。當儀器平衡完畢，會顯示“READY”。方法使用打開機器后，選擇合適的方法。將工作模式設定為RUN，使儀器加熱平衡。打開LC solution 軟件，自動配置選擇AD2，即選擇了蒸發光檢測器。其它設置同PDA檢測器。儀器平衡后檢察基線。在洗脫液未接入時噪音應低于0.2mv，這表明霧化氣潔凈干燥。基線毛刺一般是由霧化氣中的粒子或水分造成的。引入洗脫液并待其平衡15min。再次檢

8、查基線，應不超過1mv，如是為純水應不超過0.25mv，純有機溶劑也應不超過1mv。緩沖體系和穩定劑可顯著增加噪音。然后進行樣品分析。4、 運行a、 單次運行單擊單次運行，出現對話框，選擇已經編輯的方法，輸入文件名，輸入樣品瓶，樣品架和樣品的體積，單擊確定可以進行樣品的分析。點擊輔助欄停止或者停止的快捷鍵，可以將分析停止。b、 批處理運行單擊批處理，打開二級菜單，單擊向導，可以新建，也可以附加一個批處理文件。選擇方法文件，輸入開始樣品瓶，樣品架，進樣體積。下一步。輸入樣品組數，選擇標準品和未知。下一步。輸入標準品名字，ID，校準級別，數據文件名。下一步。輸入未知品名字，ID，數據文件名。下一步

9、。下一步，完成。出現批處理文件。另存批處理文件。單擊批處理開始，開始分析樣品。5、 關機樣品分析完畢，按照色譜柱的沖洗要求進行沖洗。沖洗完后，儀器參數視圖，將總流速設為0，下載。然后單擊儀器開關，關閉軟件，最后將電源關掉，關閉UPS。6、 積分單擊再解析，打開已經完成的數據，會看到數據、方法、報告格式、批處理、全部文件形式。點擊分析圖標，選擇多色譜，提取所要波長下的峰。在積分頁面，選擇通道，半峰寬，斜率，最小峰面積，一般選擇面積選項。識別頁面，利用時間窗或時間帶限制峰。也可以選擇積分頁面的程序，進行手動積分。如果不了解方法，可以單擊幫助。點擊確定，分析完成。結果在視圖，峰表內查看。7、 標準曲

10、線a、外標法定量單擊向導，打開化合物表向導窗口，選擇通道，半峰寬，斜率，最小峰面積，一般選擇面積選項，下一步。選擇要標定的峰，下一步。選擇外標法。計算面積。輸入校準級別，曲線擬合類型，一般選擇線性。零點，一個校準級別，選擇強制通過，其它選擇未強制。加權方法無。輸入濃度，下一步。識別，選擇時間窗或者時間帶。一般來說保留時間小的用時間窗。下一步。定義峰的名字和標樣的濃度。完成。保存方法。單擊校準，雙擊已經建立的方法。然后將標樣圖譜拖動到左下角數據文件的級別中，有幾個級別，則相應的拖到相應的級別中。則自動生成標準曲線。另存為方法。b、內標法定量定量方法為內標法，確定內表物的峰。8、 利用標準曲線計算

11、樣品的濃度打開需要計算的譜圖，文件選擇需要加載的方法參數，查看峰表可以看結果。9、 報告編輯單擊報告模板，拖動到報告模板中即可，然后另存為報告格式文件。顯示報告，將數據拖動到報告模板中即顯示報告。四、 注意事項：1、 高壓恒流泵的維護：泵的密封圈是最易磨損的部件，密封圈的損壞可引起系統的許多故障，要注意保養和定期更換。應采取下列措施以延長使用壽命：絕對不允許在沒有流動相的或流動相還沒有進入泵頭的情況下啟動泵而造成柱塞桿的干磨。每天使用后應將整個系統管路中的緩沖液體沖洗干凈，防止鹽沉積，整個管路要浸在無緩沖的溶液或有機溶劑中。長期不用也要定期開泵沖洗整個管路。要用HPLC級試劑。 輸液管前端要用

12、燒結不銹鋼沉子過濾流動相。要注意防止管路阻塞造成壓力過高而損壞儀器。壓力下限應設置在0.51MPa，以防止儲液器中的流動相被抽干或嚴重滲漏而引起柱塞的干磨。2、 流動相的使用：必須使用HPLC級或相當于該級別的流動相，并先經0.45m薄膜過濾。過濾后的流動相必須經過充分脫氣，以除去其中溶解的氣體O2等，如不脫氣易產生氣泡、基線噪聲增加、靈敏度下降，甚至無法分析。如果管路中使用peek樹脂部件，不可使用濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亞砜等試劑。特別注意HPLC使用過后的系統清洗：含有緩沖溶液流動相的清洗方法：a、 先用100%的純水沖洗，打開排放閥，用35ml/

13、min的流量，洗20min左右后停泵，主要是針對吸液系統、泵頭、進出口單向閥等體積較大的空間的清洗。b、 再用95/5的甲醇/水清洗整個系統，關閉排放閥，用1ml/min的流量，洗3060min后停泵，主要是用水清洗整個系統中的鹽，用5%的甲醇主要是為了保護色譜柱。c、 最后用100%的甲醇清洗整個系統，用1ml/min的流量，洗2min左右，然后關機。 如果流動相中不含鹽，則只使用上述第三步清洗即可。3、 更換流動相：在分析過程中，有時需要更換流動相進行分析。一定要注意前一種使用的流動相和所更換的流動相是不是能夠相溶。如果前一種使用的流動相和所更換的流動相不能夠相溶，要采用一種與這二種需更換

14、的流動相都能相溶的流動相進行過濾、清洗。較為常用的過濾流動相為異丙醇，但實際操作中要看具體情況而定，原則就是采用與這二種需更換的流動相都能相溶的流動相。一般清洗時間為3040分鐘，直至系統完全穩定。 更換流動相時，要用100ml的燒杯，放入需要更換的流動相，將慮頭放入燒杯中，上下反復沖洗，然后將排液閥逆時針180度，purge。然后將排液閥順時針180度。儲液器的注意事項： 保持流動相儲液器的清潔是保證儀器正常使用的關鍵。要使用HPLC級的溶劑，對試劑含有緩沖鹽及非HPLC級的流動相一定要用0.45m過濾器除區去其中的微量物質。4、 色譜柱的使用：a、使用前色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報

15、告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。b、樣品樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。c、色譜柱的保存如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新

16、色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。d、色譜柱的再生 因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。（1）、反相柱的再生：依次采用2030倍的色譜柱體積的甲醇/水=10/90 （V/V）、乙腈、異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。（2）、正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。5、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法 色譜柱在使用中最常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點：a、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；b、色譜柱頭的填料被樣品污染；c、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出；d、流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。解決辦法如下：a、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸