1、病原體核酸質控物的使用病原體核酸質控物的使用及注意事項及注意事項張 瑞衛生部臨床檢驗中心病原體核酸質控物病原體核酸質控物 HBV DNA液體質控物 （單位：IU/ml) 編號靶值（對數值）范 圍HBV DNA S15.42106 (6.73)1.70106 1.70107 (6.23 7.23)HBV DNA S23.19106 (6.50)1.00106 1.00107 (6.00 7.00)HBV DNA S39.42105 (5.97)2.95105 2.95106 (5.47 6.47)HBV DNA S42.60105(5.41)8.13104 8.13105 (4.19 5.91)

2、HBV DNA S57.66104 (4.88)2.40104 2.40105 (4.38 5.38)該質控品為液體血清，每支該質控品為液體血清，每支500500 l l，使用時室溫放置，使用時室溫放置1515分分鐘使其充分復融，顛倒或漩渦振蕩并瞬時離心后使用。鐘使其充分復融，顛倒或漩渦振蕩并瞬時離心后使用。 HCV RNAHCV RNA凍干質控物凍干質控物 （單位：（單位：IU/ml)IU/ml) 病原體核酸質控物病原體核酸質控物編號靶值（對數值）范 圍07111.32106 (6.12)4.17105 1.70106 (5.626.62)07121.05106 (6.02)3.31105

3、3.31106 (5.526.52)07135.76105 (5.76)1.82105 1.82106 (5.266.26)07156.61103 (3.82)2.09103 2.09104 (3.324.32)07168.72104 (4.94)2.75104 2.75105 (4.445.44)該質控品為凍干血清，每支該質控品為凍干血清，每支300300 l l，使用時用，使用時用DEPCDEPC水復溶，水復溶，室溫放置室溫放置5 5分鐘，漩渦振蕩使之充分溶解并混勻，瞬時離心分鐘，漩渦振蕩使之充分溶解并混勻，瞬時離心后使用。后使用。病原體核酸質控物病原體核酸質控物 關于定量單位IU/ml和

4、拷貝數/ml的換算請根據不同試劑的檢測結果與該質控品的定值進行比對得出，不同試劑的換算系數會有所不同。IU/ml拷貝數/mlWHO各不同試劑廠家病毒個數“檢出單位”（detectable unit） 假設：PCR反應體系內含有1 拷貝的待測分子即可檢出 拷貝數拷貝數/ml/ml的確定：的確定：DNA/RNA 參考品（質粒等）參考品（質粒等）測量OD260的值得到mg/ml通過與分子量的計算，得到拷貝數/ml不同實驗室得到的結果差別很大。HCVHCV國際單位與拷貝數換算國際單位與拷貝數換算NGI NGI SuperQuantSuperQuant: : 1 IU/1 IU/mLmL = 3.4 c

5、opies/ml = 3.4 copies/ml (NGI Product License Application to FDA ) (NGI Product License Application to FDA )Roche Roche AmplicorAmplicor Monitor v2.0 Monitor v2.0 1 1 IU/IU/mLmL = = 0.9 copies/ml0.9 copies/ml (Roche Molecular Systems) (Roche Molecular Systems)CobasCobas AmplicorAmplicor Monitor HCV

6、v2.0 Monitor HCV v2.0 1 IU/1 IU/mLmL = 2.7 copies/ml = 2.7 copies/ml (Roche Molecular Systems) (Roche Molecular Systems)LCxLCx HCV RNA Quantitative Assay HCV RNA Quantitative Assay 1 IU/1 IU/mLmL = 3.8 copies/ml = 3.8 copies/ml (Abbott Diagnostics)(Abbott Diagnostics)Bayer Bayer bDNAbDNA 3.0: 3.0: 1

7、 IU/1 IU/mLmL = 5.2 copies/ml = 5.2 copies/ml (Bayer Development Group)(Bayer Development Group) 未知未知HCV RNA 樣本樣本甲實驗室 5000拷貝/ml 乙實驗室 10000拷貝/ml 丙實驗室 50000拷貝/ml 丁實驗室 20000拷貝/ml 實驗室結果的互通性實驗室結果的互通性20000IU/mlHCV RNA 樣本樣本甲實驗室 40000拷貝/ml1IU/ml2拷貝/ml 乙實驗室 10000拷貝/ml 1IU/ml0.5拷貝/ml丙實驗室 50000拷貝/ml1IU/ml2.5拷貝

8、/ml 丁實驗室 20000拷貝/ml1IU/ml1拷貝/ml 實驗室結果的互通性實驗室結果的互通性國家標準物質國家標準物質 在國際上，發達國家的試劑廠家均采用可溯源到國際標準的標準系列來進行定量檢測，而我國的試劑生產廠家標準來源、定量單位均不統一，造成檢測結果存在10倍乃至100倍的差異。 衛生部臨床檢驗中心參考世界衛生組織（WHO）相關項目標準物質的研制方法，研制了HBV DNA和HCV RNA標準物質。 (1）將該標準物質用于各試劑廠家定標； （2）依據該標準品制備標準系列血清用作廠家試劑的工作標準； （3）向全國提供可溯源到該標準物質的室內質控品。 IUIU（international

9、 units)international units)的確定：的確定：22家實驗室實驗1實驗2實驗3實驗4間隔1周7次10倍稀釋8次101/2倍稀釋(終點濃度附近）“終點”Report on the evaluation of a candidate standard for NAT assays for HCV RNA。 WHO BS/97.18611:3.161:101:31.6 1:1001:316 1:1000 1:3160HCV RNA 終點稀釋終點稀釋:1:100001 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111Poisson分布：63的實驗室檢測結果為陽性的稀釋倍數定為“終點”，即1IU/ml。IUIU（international units)international units)的確定：的確定：核酸質控物的定值核酸質控物的定值實驗室數方法均值3Amplicor Monitor3bDNA2In-house1NASBA6改良的Amplicor（定性）9單一PCR （定性）6巢式PCR （定性）統計學計算得出均值定值的標準品核酸質控物 該質控品是具有生物活