1、考試題型1、 名詞解釋1.氣溶膠（aerosol）：氣溶膠是懸浮于氣體介質中粒徑一般為0.001100m的固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態分散體系。2.生物因子（biological agents）：一切微生物和生物活性物質。包括可能致人、動物感染、過敏或中毒的一切微生物和其它相關的生物活性物質，以及基因修飾、細胞培養和生物體內寄生的微生物。3.生物恐怖（bio-terror）:用生物因子造成的恐怖。4.生物戰劑（Biological agent）：在戰爭中用于傷害人、畜或毀壞農作物的致病微生物或其所產生的毒素。5.生物武器（Biological weapon）：裝有生物戰劑的各種施放裝置：炮

2、彈、航彈、集束炸彈，和安裝在火箭或導彈彈頭中的分散裝置，以及安裝在飛機上的各種布灑裝置。6.實驗室生物安全：指在從事病原微生物實驗活動的實驗室中避免病原微生物對工作人員和相關人員的危害，對環境的污染和對公眾的危害，為了保證試驗研究的科學性還要保護被試驗因子免受污染。7.基因工程：（genetic engineering）：將外源性遺傳物質通過載體轉入宿主細胞內，經篩選，使其獲得新的性狀的過程。8.基因工程生物安全：重組DNA技術在內的所有對基因的操作及其生物體的安全。（通過基因工程技術所產生的遺傳工程體及其產品的安全性問題。）9.危險化學品：易燃、易爆、腐蝕、毒害、感染、放射等危險性物質，在一

3、定條件下引起燃燒、爆炸、中毒、燒傷、死亡等事故的化學品統稱為危險化學品。10.易燃液體：在閃點溫度（閉杯試驗閃點溫度60.5 ，開杯試驗閃電溫度65.6 ）時放出易燃蒸汽的液體，或在溶液含有固體物質的液體。11.氣體：壓縮、液化、加壓溶解的氣體（50時，蒸汽壓力>300kPa；20時,101.3kPa，完全呈氣態）12. 爆炸品：在外界（受熱、受壓、碰撞、震動、摩擦）作用下，發生劇烈反應，在極短時間內放出大量的氣體和熱量，同時伴有聲光等效應的物質。13. 腐蝕性物質：使生物接觸組織造成損傷；造成其它物品損害的物質。14. 高效空氣過濾裝置：鈉焰法效率不低于99.9%的空氣過濾器為高效空氣

4、過濾器，其中效率不低于99.9%為A類，不低于99.99%為B類，不低于99.999%為C類。15. 高壓蒸汽滅菌器：利用飽和壓力蒸汽對物品進行迅速而可靠的消毒滅菌設備，適用于醫療衛生事業、科研、農業等單位。16. 定向氣流：是指從污染概率小的區域流向污染概率高的區域的受控制氣流。三級以上生物安全實驗室內要求保持定向氣流，定向氣流包含以下三個方面的要求：實驗室周圍的空氣向實驗室內流動，實驗室內被污染的空氣決不能向外擴散，保證不讓公眾受感染；在實驗室內部，清潔區空氣向操作區流動，保證沒有逆流，以保護操作者安全；輕污染區的空氣應向重污染區流動。二、簡答題1.病原微生物實驗室生物安全管理條例中對病原

5、微生物的分類。第一類病原微生物：能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物以及我國尚未發現或者已經宣布消滅的微生物。第二類病原微生物：能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類病原微生物：中等個體危險和有限群體危險；可感染發病，對健康工作者、群體、家畜或環境不會引起嚴重的危害的病原體；實驗室暴露很少引起嚴重疾病，有有效治療和預防措施，并且傳播危險有限。第四類病原微生物：個體和群體低危險；不能導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒、和寄生蟲等（非致病生物因子）三、問答題復習思考題1 簡述實驗室生物安全的重要意義。（1）開展病原微生物研

6、究的需要（2）生物防護（國防）的需要（3）傳染病預防與控制的需要（4）動物防疫工作的需要（5）出入境檢驗檢疫工作的需要（6）醫院感染控制的需要2 試述我國微生物實驗室生物安全有哪些相關的法律法規？（1）中華人民共和國傳染病防治法目的是預防、控制和消滅傳染病的發生與流行，保障人民健康和公眾衛生。規定國家對傳染病實行預防為主的方針，防治結合，分類管理。把我國流行的傳染病分為甲類、乙類、丙類三類。（2） 病原微生物實驗室生物安全管理條例國務院424號令，2004年11月12日公布及實施。我國第一個具有法律效應的病原微生物的生物安全法規。內容包括：病原微生物的分類和管理、實驗室的設立與管理、實驗感染控

7、制、監督管理和法律責任。強調：造成傳染病傳播、流行等嚴重后果的實驗室工作人員將受到處罰；構成犯罪的，依法追究刑事責任；對中國尚未發現或者已經宣布消滅的病原微生物，任何單位和個人未經批準不得從事相關實驗活動。（3） 人間傳染的病原微生物名錄中華人民共和國衛生部制定，2006年1月11日。表一為病毒分類名錄；表二為細菌、放線菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體分類名錄；表三為真菌分類名錄。該名錄主要從分類學、危害程度、實驗活動所需生物安全實驗室級別、運輸包裝等方面對上述病原微生物進行了分類。對病毒培養、動物感染實驗等實驗室生物安全操作具有十分重要的指導意義。（4）醫療廢物管理條例醫療廢物是指醫療衛

8、生機構在醫療、預防、保健以及其他相關活動中產生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。醫療衛生機構對醫療廢棄物的管理、醫療廢棄物的集中處置、監督管理、法律責任和附錄。（5）實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）（6）生物安全實驗室建設技術規范（GB50346-2011）（7）微生物和生物醫學實驗室生物安全通用準則（WS233-2002）（8）可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規定3 試述微生物菌毒種及樣本的運輸與保藏方法。 （1）運輸感染性物質運輸的包裝系統。A.內層包裝：將樣品采用防水、防漏的內層容器包裝并貼上指示內容物的標簽。B.中層包裝：內層容

9、器和中層容器間應放置足量的吸水性材料。C.外層包裝：應為硬質。托運人培訓：如果不采用路運，而采用航空，則按照國家民用航空總局批準培訓中介空運咨詢服務有限公司承運。運輸審批：相關申請資料等。專人運送。運輸后續工作：規定第十六條在運輸結束后，申請單位應當將運輸情況向原批準部門書面報告。（2） 保藏保藏機構：實驗室在相關實驗活動結束后，應及時將病原微生物菌（毒）種和樣本就地銷毀或送交保藏機構保管。保藏管理：帳目（總帳和分類帳）和實際庫存相符；有進出和操作記錄：編號（唯一標示號）來源；名稱（種名和株名）；保存方法和保存日期；批號或代次；分發。4 生物安全實驗室根據安全等級不同可分為幾個類型？（1）一級

10、生物安全防護水平（BSL1）適合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、對實驗室工作人員和環境危害性最小的生物因子的工作。許多通常與人類疾病不相關的病原微生物是條件致病性的。對于在體內已經繁殖多代的疫苗株不要簡單地認為是無毒的。（2）二級生物安全防護水平（BSL2）適用于操作我國的第三類（少量二類）危害的致病微生物。適合于從未知病原的人身上取血、體液和組織。（3）三級生物安全防護水平（BSL3）適用于操作我國第二類（個別第一類）病原微生物。（4）四級生物安全防護水平（BSL4）適用于操作我國第一類病原微生物。另外，與四級生物安全防護水平的微生物具有相近的或一致的抗原關系的微生物也應該在該防護

11、水平進行研究。我國尚未發現或已經滅絕的微生物。5 如何建設一個生物安全二級實驗室？在滿足BSL1實驗室設施的基礎上，增加以下內容：（1）門應能夠自動關閉，有可視窗。（2）有適當的火災報警器。（3）不需特殊的通風設備。但在計劃安裝新的設備時，應當考慮要設置通風系統，使空氣向內流動而不發生循環。如果沒有通風系統，那么實驗室窗戶應當能夠打開，同時要安裝防蟲的紗窗。（4）實驗室所在建筑內配備高壓蒸汽滅菌器。（5）實驗室內使用專門的工作服；戴乳膠手套。（6）有可靠的電力供應和應急照明。必要時，重要設備如培養箱、生物安全柜、冰箱等應設備用電源。（7）實驗室出口有黑暗中可明確辨認的標識。（8）應在實驗室內配

12、備生物安全柜。（9）應在實驗室工作區域配備洗眼裝置。補充：BSL-1的設施要求（1）應為安全運行以及清潔和維護提供充足的空間。（2）實驗室的工作區域外有存放外衣和私人物品的設備。（3）應該有洗手池，最好安裝在出口處。（4）窗子和門入口處安裝防媒介昆蟲和嚙齒動物的。 （5）實驗室的墻壁、天花板和地板應當是光滑、易清潔、不滲水以及耐化學品和消毒劑的腐蝕。地板應當是防滑的，同時應盡可能地避免管線暴露在外。（6）實驗臺應當密封于墻上，不滲水，并可耐消毒劑、酸、堿、有機溶劑的腐蝕并能適度耐熱。（7）在實驗室內進行操作時均應保證照明，避免不必要的反光和閃光。6 生物安全柜可分為幾個等級？簡述其基本原理。

13、生物安全柜（BSC）有三個級別，即級、級(A1、A2、B1、B2型)和級一共有6種。級為密閉袖套操作，其余為前開口操作。所有生物學污染的管道均為負壓狀態或由負壓的管道通風系統包圍。原理：（1）一級生物安全柜：對受試樣品無保護，但能滿足操作危害程度為二、三、四類致病因子要求的生物安全柜。工作窗開口向內吸入負壓氣流用以保護人員的安全，排出的氣流經高效過濾器過濾以保護環境。（2）二級生物安全柜：是目前應用最為廣泛的柜型。 用于對人員、受試樣品及環境進行保護且能滿足操作危害程度為二、三、四類的致病因子要求的生物安全柜。工作窗開口向內吸入的負壓氣流用以保護人員的安全，經高效過濾器過濾的垂直氣流用以保護樣

14、品，排出的氣流經高效過濾器過濾以保護環境。（3）三級生物安全柜：是為4級實驗室生物安全等級而設計的，是目前世界上最高安全防護等級的安全柜，可滿足操作危害程度為一、二、三、四類的致病因子的要求。人員通過與生物安全柜連接的密閉手套實施操作。生物安全柜內對實驗室的負壓應不小于120Pa。送風應經高效過濾器過濾后進入生物安全柜內，排風應經兩道高效過濾器過濾后排至室外。當密閉手套脫落時，其與柜體連接處的洞口風速應不小于0.7m/s。7 簡述正確使用生物安全柜的方法。（1）應安裝在實驗室內氣流流動小，人員走動少，離門和中央空調送風口較遠的地方。（2）生物安全柜的周圍應有一定的空間，與墻壁至少保持30cm的

15、距離，便于清潔環境衛生。（3）注意保潔，每天做完實驗后，清除所有廢棄物，再用75%酒精消毒。（4）一般濾膜有5-10年使用壽命，在儀器壓力表顯示壓力為50%的時候，需要更換濾膜。（5）在使用前開啟紫外線滅菌燈，30min后開機自凈，并確保工作區無污染。（6）滅菌時應關閉前窗。（7）工作時前窗開啟高度應小于200mm，區域內氣壓正常。（8）工作臺面為304不銹鋼，有污染物殘時應及時用酒精清理干凈，以確保工作臺面使用壽命。（9）開啟前窗時應注意不使設備受到強烈振動，以保持平板玻璃的完整性。（10）由于剩余的培養基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設備在內的生物安全柜里的所有物品都應

16、清除表面污染，并移出安全柜。（11）在每次使用前后，要清除生物安全柜內表面的污染。工作臺面和內壁要用消毒劑進行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里可能發現的任何微生物。在每天實驗結束時，應擦拭生物安全柜的工作臺面、四周以及玻璃的內外側等部位來清除表面的污染。在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或75%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。8 舉例說明在生物安全實驗室注重操作細節的重要性。（1）1956年，前蘇聯的一個實驗室曾有9支裝有感染了委內瑞拉馬腦炎病毒鼠腦的安瓿被打破。由于沒采取必要的措施，結果在幾天內造成24名工作人員感染；（2）1998年，我國某

17、大城市的某高校在使用大白鼠進行實驗時，有兩名學生被大白鼠咬傷，還有一些學生在給實驗老鼠放血、解剖的過程中，未按照要求戴手套操作，結果在29名實驗人員中，有9人感染了流行性出血熱；（3）三起嚴重的實驗室SARS病毒感染事件新加坡的實驗室SARS感染事件中國臺灣地區的實驗室感染事件中國大陸的實驗室感染事件（4）東北農業大學27名學生和1名老師在羊體實驗中感染了布魯氏菌病，原因是使用了未經檢疫的山羊以及進行動物解剖等實驗操作時沒有佩戴口罩等個人防護設備。 以上幾起事故中不難看出，發生感染的一個共同原因是工作人員主觀上的麻痹大意，沒有遵守實驗室的安全操作規則和程序，即使具有完善的設備和標準的操作程序也

18、不能杜絕事故的發生，因而加強實驗室的安全監督管理是防止此類事件發生的首要任務。9 消毒滅菌的方法有哪些?（1）化學消毒滅菌：液體化學試劑殺滅微生物繁殖體或芽孢等對象；（2）甲醛空氣熏蒸消毒；（3）物理消毒滅菌：紫外線、高壓蒸汽滅菌、焚燒和HEPA過濾除菌等。10 什么是實驗室活動的危害評估？ 對某一個特定的操作程序或實驗或微生物種類的危險度進行評估，最有效的工具之一就是列出微生物的危險度等級。11 如何進行實驗室活動的危害評估？在國務院病原微生物實驗室生物安全管理條例相關要求的指導下，按照實驗室生物安全通用要求、人間傳染的病原微生物名錄、WHO實驗室生物安全手冊等的技術指標和條款，并根據實驗室

19、所從事的工作，在微生物危害程度分類的基礎上，綜合考慮實驗活動中涉及的傳染或潛在傳染性生物因子及其他因素，進行生物因子風險、操作風險、實驗耗材、儀器設備、人員因素等評估，得出風險評估結論，進行實驗室活動的危害評估。實驗室活動的危害程度評估報告內容則包括以下五項：危險程度分類、背景資料、實驗室實驗活動及其危險性與預防措施、工作人員素質及評估結論。12 試述人間傳染的病原微生物名錄對實驗室活動的危害評估的重要性。（1）病原微生物實驗室生物安全管理條例按危害程度對病原體進行分類：四類病原微生物，危害逐級降低；實驗室生物安全通用要求根據生物因子對個體和群體的危害程度將生物防護水平分為4級，危害逐級增強。

20、以上兩種分類方法與國際不接軌，在使用過程中易引起混亂，可采用人間傳染的病原微生物名錄的分類方法；（2）人間傳染的病原微生物名錄將380種人間傳染病原微生物分為三大類，分別是病毒分類名錄，細菌、放線菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體分類名錄和真菌分類名錄，清晰明了，在實驗室活動危害評估中使用方便簡單；（3）人間傳染的病原微生物名錄還對人間傳染病的病原微生物的中文名稱、英文名稱、危害程度分類、從事實驗活動所需實驗室安全級別和運輸包裝分類等內容做出了明確的規定；（4）人間傳染的病原微生物名錄只是一種指南，僅供參考，是最基本的要求。（5）人間傳染的病原微生物名錄為實驗室活動的危害評估、實驗室生物安全的相關分類分級、建設要求、安全設備和個人防護裝備、安全操作與管理等提供了指導性的建議。13.基因工程生物的安全性問題。生物安全大致分為3個方面：（1）對人類健康的安全；（2）對人類賴以生存的農業生物安全；（3）對與人類生存有關的環境生物安全。14.基因工程生物安全管理目標。（1）健全基因工程生物安全管理法規、機構（2）加強安全管理的技術保障（3）提高研究者、開發者、消費者安全意識（4）強化監管和責任追究15.基因工程生物安全評估步驟。（1）確定受體生物的安全等級（2）確定基因工程操作對受體生物安全性的影響（3）確定基因工程生物體的安全等級（4）確定基因工程產